咽炎消合劑對(duì)慢性咽炎大鼠咽黏膜修復(fù)作用的研究

王 藝，張 玲，周家璇

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650021)

咽炎消合劑對(duì)慢性咽炎大鼠咽黏膜修復(fù)作用的研究

王 藝，張 玲，周家璇

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650021)

目的 研究咽炎消合劑對(duì)慢性咽炎大鼠黏膜修復(fù)的作用及其機(jī)制。方法 將48只Wistar大鼠隨機(jī)分為咽炎消合劑低劑量組、咽炎消合劑高劑量組、陽性藥物組、抗生素組、模型組、空白對(duì)照組，每組8只。除空白對(duì)照組外，其余組采用5%氨水噴咽部制作慢性咽炎模型。造模成功后，咽炎消合劑低劑量和高劑量組分別給予咽炎消合劑1 mL/d和2 mL/d灌胃，陽性藥物組給予慢咽舒檸片溶解后1 mL/d灌胃，抗生素組給予阿莫西林膠囊溶解后1 mL/d灌胃。20 d后取各組咽部黏膜及其下組織進(jìn)行病理切片觀察。結(jié)果 治療10 d后，咽炎消合劑高、低劑量組及陽性藥物組動(dòng)物的一般狀態(tài)好轉(zhuǎn)，以咽炎消合劑高、低劑量組更明顯；咽炎消合劑低、高劑量組局部癥狀明顯好轉(zhuǎn)，攝食率降低等癥狀也隨之消失，而陽性藥物組的攝食率降低、騷動(dòng)不安癥狀改善不明顯；額鏡觀察其咽部組織基本接近正常，部分動(dòng)物雖還有輕度的慢性充血，但其咽部黏膜顏色較潤(rùn)澤。給藥20 d后，咽炎消合劑低劑量和高劑量組咽黏膜組織病理表現(xiàn)接近空白對(duì)照組，咽炎消合劑高劑量組黏膜上皮增生不明顯， 無炎細(xì)胞浸潤(rùn)，固有膜改變不大，肌層纖維近于排列規(guī)則，接近于空白對(duì)照組的黏膜形態(tài)。而抗生素組病理改變不大與模型組組織變化相近。結(jié)論 咽炎消合劑通過抗炎、減輕炎性滲出、抑制組織增生等多環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，療效顯著，證明了慢性咽炎脾胃學(xué)說理論的正確性。

咽炎消合劑；慢性咽炎；動(dòng)物模型；咽黏膜

慢性咽炎是一種發(fā)病率高且宜遷延不愈的疾病，近年來由于生活節(jié)奏加快，社會(huì)壓力增大，加上生活環(huán)境日益惡化，該病的發(fā)病率逐漸升高[1]。該病致病因素較多，難以確切把握，發(fā)病機(jī)制亦無明確的定論，因此臨床無統(tǒng)一的治療方案和療效判斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。咽炎消合劑是由云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院耳鼻喉科專家周家璇教授根據(jù)慢性咽炎的中醫(yī)脾胃理論開發(fā)的中藥復(fù)方制劑，臨床使用已有十余年，前期研究證明其臨床療效佳，不良反應(yīng)少[3]。本研究建立慢性咽炎大鼠模型，觀察咽炎消合劑對(duì)損傷的咽黏膜組織的修復(fù)作用，為該合劑臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用10 周左右健康雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量(210±20)g，SPD級(jí)別，全價(jià)顆粒飼料飼養(yǎng)。

1.2 藥品、試劑和儀器 咽炎消合劑 (院內(nèi)中藥復(fù)方制劑，由人參、白術(shù)、茯苓、浙貝、僵蠶、法夏、厚樸、桔梗、葛根等組成)， 慢咽舒檸片(桂龍藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：201302132，由玄參、麥冬、甘草、桔梗、生地、板藍(lán)根、薄荷、胖大海等組成)；阿莫西林膠囊(廣州白云山制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：201312031)。5%氨水 (天津化學(xué)試劑制品廠，批號(hào)：201211193) 500 mL瓶裝。喉頭噴霧器(金喉健噴霧劑10 mL藥瓶)，透射電鏡及多用光學(xué)顯微鏡(云南省中醫(yī)院病理科提供)，醫(yī)用冷光源額鏡，壓舌板，自制開口器等。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將48只Wistar大鼠隨機(jī)分為咽炎消合劑低劑量組、咽炎消合劑高劑量組、陽性藥物組、抗生素組、模型組、空白對(duì)照組，每組8只。

1.3.2 造模及實(shí)驗(yàn)方法 除空白對(duì)照組外，其余組用5%氨水噴大鼠咽部2次,每次用噴霧器噴2撳，8 h 1次,連續(xù)21 d，空白對(duì)照組咽部噴等量蒸餾水，從第22天開始,停止上述造模因素,自然條件飼養(yǎng)觀察。造模成功后即開始藥物干預(yù)(空白對(duì)照組和模型組除外)，給藥劑量采用臨床成人用量與動(dòng)物體型系數(shù)計(jì)算法換算成大鼠灌胃的等效劑量，常溫下灌胃。咽炎消合劑低劑量組每只灌咽炎消合劑藥液1 mL/d(含生藥量2.0 g/mL)；咽炎消合劑高劑量組每只灌咽炎消合劑藥液2 mL/d(含生藥量2.0 g/mL)；空白對(duì)照組用生理鹽水 2 mL灌胃；陽性藥物組每只灌慢咽舒檸片藥液1 mL/d(0.5 g/kg用與咽炎消合劑高劑量組等容的蒸餾水溶化)；抗生素組每只灌阿莫西林膠囊藥液1 mL/d(50 mg/只)。

1.4 觀察指標(biāo) 每天觀察記錄各組動(dòng)物外觀及活動(dòng)狀態(tài)；動(dòng)物咽部情況,包括黏膜形態(tài)和色澤、口腔分泌物。灌胃給藥20 d后，股動(dòng)脈放血處死動(dòng)物后立即取下咽部黏膜及其下組織做切片以供觀察咽部組織黏膜層、肌層、骨骼肌層有無上皮增生，有無炎細(xì)胞浸潤(rùn)，有無血管擴(kuò)張充血，有無纖維增生，有無釘突延長(zhǎng)以及變化的程度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般觀察 造模第5天后大鼠出現(xiàn)搔抓口部，飲水頻率增加，口腔分泌物增多，噴氨水20 min后可出現(xiàn)類似人類哮喘聲，后期口腔分泌物逐漸減少，納食減少，動(dòng)物騷動(dòng)不安，造模10 d后尤為明顯。用額鏡觀察其咽部呈慢性充血，黏膜暗紅色而干燥、光澤度欠佳。治療10 d后，咽炎消合劑高、低劑量及陽性藥物組動(dòng)物的一般狀態(tài)好轉(zhuǎn)，以咽炎消合劑高、低劑量組更明顯；咽炎消合劑低、高劑量組局部癥狀明顯好轉(zhuǎn)，攝食率降低等癥狀也隨之消失，而陽性藥物組的攝食率降低、騷動(dòng)不安癥狀改善不明顯；額鏡觀察其咽部組織基本接近正常，部分動(dòng)物雖還有輕度的慢性充血，但其咽部黏膜顏色較潤(rùn)澤?？瞻讓?duì)照組體征無明顯變化。模型組、抗生素組動(dòng)物癥狀體征無明顯變化。

2.2 咽部黏膜及其下組織切片的病理形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)觀察 模型組的病理特征主要為上皮增生，釘突延長(zhǎng)，咽黏膜慢性充血，其周圍有較多淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜下結(jié)締組織及淋巴組織增生，重者形成咽后壁顆粒狀隆起，黏液腺肥大，分泌亢進(jìn)，見圖1。咽炎消合劑高劑量組黏膜上皮增生不明顯， 無炎細(xì)胞浸潤(rùn)，固有膜改變不大，肌層纖維近于排列規(guī)則，接近于空白對(duì)照組的黏膜形態(tài)，見圖2。而抗生素組病理改變不大與模型組組織變化相近，見圖3。各組組織切片的病理形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)分析結(jié)果見表1。

圖1 模型組病理表現(xiàn)(40×)

圖2 咽炎消合劑高劑量組病理表現(xiàn)(40×)

3 討 論

慢性咽炎為咽部黏膜、黏膜下及淋巴組織的慢性彌漫性炎癥，是上呼吸道慢性炎癥的一部分。慢性咽炎常由急性咽炎反復(fù)發(fā)作而成，或由煙酒過度、嗜食辛辣、粉塵、長(zhǎng)期張口呼吸等使咽局部長(zhǎng)期受刺激所導(dǎo)致。根據(jù)此誘因，選用氨水在咽部長(zhǎng)期噴霧的方法制作動(dòng)物模型[4]。氨水是堿性化學(xué)物質(zhì)，局部噴霧能刺激咽部黏膜，使之充血腫脹，反復(fù)刺激能使黏膜逐漸轉(zhuǎn)化形成慢性炎癥從而形成黏膜損傷，這符合慢性咽炎的發(fā)病因素。本課題預(yù)實(shí)驗(yàn)用此法造模的第3天，大鼠就開始逐漸出現(xiàn)搔抓口部，飲水次數(shù)增加而量不多，口腔分泌物增多，咽部充血、微腫脹等體征，造模后10 d較為明顯，咽黏膜甚至出現(xiàn)了局部斑點(diǎn)狀潰瘍面，與《中藥新藥治療慢性咽炎的臨床研究指導(dǎo)原則》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)相近，符合慢性咽炎動(dòng)物模型的生物學(xué)特征[5-6]。

圖3 抗生素組病理表現(xiàn)(40×)

在我國，隨著生活環(huán)境的惡化以及工作生活壓力變大，近年來該病的發(fā)病率有呈上升趨勢(shì)，世界衛(wèi)生組織已將其列入亞健康狀態(tài)的范疇。該病給患者工作、生活、精神及經(jīng)濟(jì)上帶來了一定的負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響了身心健康。治療上，多用抗感染、抗過敏方法對(duì)癥治療，許多患者甚至自行服用抗生素，長(zhǎng)期使用導(dǎo)致耐藥，口腔、胃腸道菌群紊亂，使上呼吸道、消化道功能失常，最終造成咽黏膜損傷[7]。本實(shí)驗(yàn)證明抗生素對(duì)慢性咽炎大鼠模型的咽部黏膜無任何改善作用。

表1 各組咽部黏膜組織病理形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)分析 只

注：①與空白對(duì)照組比較，P<0.01;②與模型組比較，P<0.01；③與抗生素組比較，P<0.01。

中醫(yī)藥辨證論治慢性咽炎具有一定優(yōu)勢(shì)，具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎的作用[8]。中醫(yī)認(rèn)為慢性咽炎的病因病機(jī)為虛火灼咽、肝郁氣滯、痰濕瘀阻、脾胃虛弱，其中肝郁氣滯、脾胃虛弱是最主要的病機(jī)。咽炎消合劑即根據(jù)健脾益氣、疏肝理氣的思想開發(fā)研制而成，該合劑由柴胡、厚樸、茯苓、白術(shù)、山藥、法夏、生地、地骨皮、知母、桔梗、葛根等組成。柴胡、厚樸、為君藥，以疏肝理氣、行氣散結(jié)；茯苓、白術(shù)、山藥為臣，健脾益氣，脾氣充足可布津于咽上；法夏、生地、地骨皮、知母為佐藥，清熱化痰生津；輔以桔梗、葛根生津而利咽。其中法夏、厚樸還有降逆和胃之功效[9]。

本研究結(jié)果顯示，給藥后咽炎消合劑高、低劑量組的復(fù)層鱗狀上皮、結(jié)締組織趨于正常，炎性細(xì)胞基本消失，由此可推測(cè)，咽炎消合劑的清熱利咽、健脾益氣功效在動(dòng)物模型上反映為控制和消除局部炎癥癥狀，對(duì)咽黏膜具有明顯的修復(fù)作用，對(duì)脾胃功能也具有調(diào)節(jié)作用[10]。本研究證明了健脾利咽的治療指導(dǎo)思想的正確性，為咽炎消合劑臨床應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)，具有重要臨床應(yīng)用價(jià)值。

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Study on the repairment of Yanyanxiao mixture in pharyngeal mucosa of rats with chronic pharyngitis

WANG Yi, ZHANG Ling, ZHOU Jiaxuan

(Yunnan Uinversity of TCM, Kunming 650021, Yunnan, China)

Objective It is to observe the repairment effect of Yanyanxiao mixture (YYX) in pharyngeal mucosa of rats with chronic pharyngitis and its mechanism.Methods 48 Wistar rats were randomly divided into YYX low-dose group, YYX high-dose group, positive drug group (Manyanshuning), antibiotic group (amoxicillin), model group and black control group, 8 cases in each.Except to the blank control group, all the other groups were received 5% ammonia for spraying in pharyngeal.After successful?animal model establishment, the rats were fed with YYX 1 mL/d and 2 mL/d orally in YYX low-dose group and YYX high-dose groups, and was given tablets dissolve Manyanshuning 1mL/d orally in the positive drug group, and was given amoxicillin liquid 1mL/d orally in antibiotic group.20 days later, the pathology of pharyngeal mucosa tissue in each group was observed.Results 10 days after treatment, the general state of the animals in YYX high-dose group, low dose group and positive drug group were improved, and were better in YYX high-dose and low-dose groups.In YYX low-dose and high-dose group, the local symptoms were improved significantly, the symptoms of reduced feeding rate were disappeared, and the feeding rate was reduced and the restlessness symptoms had no improved in positive drug group.Observation of frontal mirror showed that the pharyngeal tissue was closed to the normal animal, although parted of mild chronic congestion, but mucosal showed ruddy color.After 20 days of treatment, YYX high-dose group and low-dose group and pathological manifestations of mucosal tissue was closed to the black control group, epithelial hyperplasia was not obvious, and no inflammatory cell infiltration, inherent film changed little, muscle fibers arranged more rules, these were closed to the blank control group.While the pathology change of antibiotics group was not big, and it was approximate to the model group.Conclusion YYX achieve a significant effect on chronic pharyngitis by anti-inflammatory, reducing inflammatory exudation, inhibiting hyperplastic tissue and many other ways, it is proved the correctness of the theory of the spleen and stomach.

Yanyanxiao mixture; chronic pharyngitis; animal model; pharyngeal mucosa

王藝，男，醫(yī)學(xué)博士，講師，研究方向?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合臨床耳鼻喉科。

張玲，E-mail:zhanglin800323@sina.com

云南中醫(yī)學(xué)院科學(xué)研究基金項(xiàng)目(xk201308)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.15.002

R-332

A

1008-8849(2015)15-1600-03

2014-10-30