卵黃抗體在毛皮動物疾病防治中的應(yīng)用

（山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院山東濱州256600）

卵黃抗體在毛皮動物疾病防治中的應(yīng)用

莊金秋，梅建國，王玉茂

（山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院山東濱州256600）

本文綜述了卵黃抗體IgY在毛皮動物（包括兔、水貂、狐貍、貉）疾病防治中的研究和應(yīng)用，以期為廣大毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)主及獸醫(yī)臨床科技工作者更好地防治動物疾病提供參考。

卵黃抗體；毛皮動物；疾病防治

1 卵黃抗體

卵黃抗體（Immunoglobulinof yolk，IgY）是家禽卵黃中存在的主要免疫球蛋白，一般從被抗原免疫的母雞卵黃中提取。當(dāng)母雞機(jī)體受到抗原刺激后，誘導(dǎo)體內(nèi)漿細(xì)胞分泌抗體，IgG隨血液循環(huán)到達(dá)卵巢并選擇性地轉(zhuǎn)移到成熟卵泡中形成IgY。與IgG相比，IgY具有抗原用量少、制備周期短、對動物損傷小、產(chǎn)量大、特異性強(qiáng)、靈敏度高，可進(jìn)行定量檢測等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于人及動物多種疾病的診斷與防治，并顯示出了良好的應(yīng)用前景。

2 在疾病防治中的應(yīng)用

2.1 兔瘟

兔瘟又叫兔病毒性出血癥，是由兔瘟病毒引起的一種急性、熱性、敗血性和毀滅性的傳染病。該病常呈暴發(fā)性流行，發(fā)病率及死亡率極高，給養(yǎng)兔業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前該病尚無有效治療藥物，疫苗接種7～10 d后才能產(chǎn)生足夠抗體，不能及時有效保護(hù)。因此，研究在疫苗免疫建立之前對兔瘟易感兔群有保護(hù)作用的方法，對控制該病具有非常重要的意義。王孝友等（2004）用兔瘟抗原免疫產(chǎn)蛋雞精制的IgY，采用血凝抑制試驗（HI）測定的最高滴度為15 log2。臨床應(yīng)用效果表明，IgY（HI為13log2）對發(fā)病兔進(jìn)行緊急防治，治愈率為84.38%～92.86%，能迅速控制疫情。張宏偉（2007）制備的兔瘟IgY的HI效價達(dá)14 log2，并能維持7周以上。使用試驗結(jié)果測出的有效治療劑量對3個兔群在兔瘟高發(fā)季節(jié)前，間隔15 d進(jìn)行2次預(yù)防接種，與歷年相比，有效降低了發(fā)病率。隨后王治方等（2007）、湯少偉（2010）制備的兔瘟IgY也顯示出了較好的治療效果，對兔瘟早期治愈率為80%，對兔瘟緊急預(yù)防有效率為100%，并認(rèn)為其研制的IgY安全性良好，作用迅速，非常值得推廣。核衣殼蛋白VP60是兔瘟的主要免疫原性蛋白，Li等（2014）重組表達(dá)VP60蛋白N端的250個氨基酸并制備IgY，結(jié)果表明，特異性IgY可顯著保護(hù)兔感染病毒，持續(xù)治療5 d后可顯著提高其存活率。

2.2 兔大腸桿菌病

又稱黏液性腸炎，是由致病性大腸桿菌及其產(chǎn)生的毒素所引起的一種暴發(fā)性腸道性疾病，以斷奶后不久的幼兔多發(fā)，且病程長，反復(fù)發(fā)作，死亡率高。范作良等（2006）制備了雞抗兔大腸桿菌高免IgY，并通過微量凝集試驗方法，研究了高免IgY的消長規(guī)律及臨床應(yīng)用。結(jié)果表明，超強(qiáng)化免疫5周后，抗體效價達(dá)到高峰，9周后抗體效價逐漸下降。同一劑量IgY效價達(dá)26時，肌注2 mL/（kg·bw）體重，連用3 d對兔大腸桿菌感染的治愈率達(dá)90%。與頭孢噻肟進(jìn)行的對比田間治療試驗，IgY的治愈率顯著高于頭孢噻肟。

2.3 特種毛皮動物疾病

（水貂、狐貍、貉）主要傳染病包括犬瘟熱、水貂細(xì)小病毒性腸炎、水貂阿留申病、狐貍腦炎、水貂出血性肺炎、狐加德納氏菌病等。我國閆新華等（2000）率先應(yīng)用水貂腸炎病毒免疫蛋雞制備IgY，結(jié)果表明，經(jīng)5次免疫制備的IgY，于最后一次免疫后第10 d其瓊脂擴(kuò)散試驗（AGP）效價達(dá)1∶25；第30天效價為1∶23。該抗體較穩(wěn)定，4℃保存120 d、-20℃保存180 d效價不變。用該抗體治療細(xì)小病毒性腸炎病犬，治愈率高達(dá)93.9%，證實其制備的IgY是成功的，可用于犬細(xì)小病毒性腸炎的治療。譚婷婷（2010）采用分離株水貂細(xì)小病毒MEV-ZYL-1免疫蛋雞，并利用氯仿和飽和硫酸銨結(jié)合的方法提純IgY，HI效價可維持在9 log2以上，這為水貂MEV防治奠定了基礎(chǔ)。莊金秋（2013）試驗應(yīng)用水貂犬瘟熱CDV分離毒作為抗原免疫蛋雞制備IgY，并用AGP法和間接ELISA法測定其抗體水平。結(jié)果顯示IgY的最高抗體滴度與IgG接近，蛋雞3免后3～5 d可開始持續(xù)收集雞蛋制備IgY。臨床上應(yīng)用其制備水貂CDV精制IgY和高免血清治療制劑對水貂犬瘟熱的綜合治療進(jìn)行了探索。結(jié)果表明，精制IgY起到較好的治療效果，可進(jìn)行批量生產(chǎn)用于臨床治療。王玉燕（2002）分別用犬瘟熱疫苗和犬腺病毒（CAV）疫苗免疫蛋雞，制備了活性較高的抗狐CDV和CAV的IgY。該IgY具有較高的活性，可作為特異性的工具蛋白用于相應(yīng)抗原抗體的檢測。隨著人們對IgY研究的不斷深入，緩釋技術(shù)逐漸應(yīng)用于IgY研究中以增強(qiáng)其作用效果。Li等（2009）用海藻酸鈉和殼聚糖為原料制備的微膠囊來包被IgY，既改變了IgY的抗胃酸能力，又減緩了IgY釋放速度，增強(qiáng)了IgY的添加效果。張婧蘭（2009）將制備的CDV和犬細(xì)小病毒（CPV）高免IgY，分別加入酸化0.25%殼聚糖溶液中，以硫酸鈉為交聯(lián)劑，在超聲作用下利用形成的殼聚糖微球?qū)gY進(jìn)行包封，包封效果優(yōu)良。在pH值為1的模擬胃液內(nèi)37℃搖床2 h，制備的載藥殼聚糖微球能夠很好的保護(hù)IgY。

3 IgY在國際的應(yīng)用研究

德國、韓國、日本等也有大量關(guān)于IgY應(yīng)用研究的報道。應(yīng)用IgY防治特種毛皮動物疾病，不會出現(xiàn)應(yīng)用動物高免血清治療引起的副作用，又可避免同源或近源材料帶毒而導(dǎo)致本動物發(fā)病的潛在危險，對于有效降低動物疾病爆發(fā)、減少經(jīng)濟(jì)損失將具有重要的意義。

自KIemperer（1983）首次報道雞蛋中存在IgY抗體以來，學(xué)者對IgY的研究不斷深入。歐洲替代方法驗證中心（ECVAM）建議以IgY代替哺乳動物IgG作為試驗和生產(chǎn)的抗體，不僅因為IgY的結(jié)構(gòu)與IgG相似，而且IgY在許多功能方面優(yōu)于IgG。在國內(nèi)，雞也是率先實現(xiàn)SPF化和產(chǎn)業(yè)化的試驗動物，有利于IgY的規(guī)?；a(chǎn)。因此，IgY在重大動物疫病防治與診斷方面擁有非常廣闊的應(yīng)用前景。但是，目前來說在利用IgY進(jìn)行動物疾病治療的過程中，仍需要注意一些問題，如通常IgY在動物發(fā)病的初期其治療的效果顯著，IgY與動物疫苗接種二者之間應(yīng)間隔一定的時間，應(yīng)用IgY注射效果比較好，而用作飲水效果不是十分顯著。相信隨著人們對于IgY研究的不斷拓展，其生產(chǎn)制備技術(shù)的不斷完善，IgY將在動物疾病防治中發(fā)揮出更大的作用?！觯ň庉嫞黑w曉松）

《內(nèi)治八法》講解牛病例練習(xí)題

牛，精神倦怠，體瘦毛焦，食欲不振，久瀉不止，脫肛，口色淡白，脈虛。治療宜選用的方劑是（ ）（執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師考試真題）

A、四物湯 B、曲蘗散 C、桂心散 D、六味地黃湯 E、補(bǔ)中益氣湯

病例解析：本病例屬于脾虛泄瀉,其主要癥狀是患畜精神沉郁，倦怠無力，體瘦毛焦，食欲減退，鼻唇冰涼。大便溏泄或稀薄，?；煊袥]有消化的飼料，大便一般無惡臭味。嚴(yán)重病例久瀉不止，甚至出現(xiàn)脫肛，口色淡白，舌苔白膩，脈虛無力等癥狀。

治療方法：患畜需補(bǔ)脾益氣，燥濕利水，可以采用補(bǔ)法中的補(bǔ)氣法進(jìn)行治療。治療可選用補(bǔ)氣法的代表方劑補(bǔ)中益氣湯。

本病例中選項解析：四物湯是補(bǔ)血法的代表方劑，主要用于治療血虛證。曲蘗散是消食導(dǎo)滯法的代表方劑，主要用于清除胃中積食或腸中結(jié)滯。桂心散是以桂心為主用藥材的一種方劑，主要用于心脾虛損、氣血不足所致的失眠、驚悸、眩暈等癥。六味地黃湯是滋陰法的代表方劑，主要作用是滋陰補(bǔ)腎。補(bǔ)中益氣湯是補(bǔ)氣法的代表方劑，主要作用是補(bǔ)脾益氣，燥濕利水。所以本病例中，治療宜選用的方劑是補(bǔ)中益氣湯。（作者：向金梅）■（編輯：狄慧）

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系毛皮動物創(chuàng)新團(tuán)隊項目（SDAIT-18-011-15）

莊金秋（1978-），女，山東濰坊人，獸醫(yī)碩士，副研究員，主要從事細(xì)胞培養(yǎng)和動物用病毒疫苗研制。