Treg細(xì)胞在口腔疾病中的研究進(jìn)展*

滕丹麗 梁文紅

1995年Sakaguchi等[1]在一系列研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)了具有免疫調(diào)節(jié)功能的CD4+CD25+T細(xì)胞，并將該T細(xì)胞亞群命名為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，通過(guò)抑制T細(xì)胞的功能發(fā)揮抗炎作用，從而維持免疫系統(tǒng)對(duì)自身成分的耐受，維持機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)。研究表明，Treg細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子IL-35、IL-10、TGF-β在自身免疫性疾病、炎癥性疾病、移植耐受及腫瘤的免疫逃逸中發(fā)揮著重要的作用。本文就Treg細(xì)胞及其相關(guān)因子在口腔疾病中的研究進(jìn)展作一綜述。

1 Treg細(xì)胞的分化調(diào)控與生物學(xué)特性

T細(xì)胞根據(jù)其表面標(biāo)志和功能特征可以分為不同亞群，并且可表達(dá)多種CD分子（如CD4、CD25、CD8），而CD4+T細(xì)胞按功能又可分為CD4+效應(yīng)性T細(xì)胞（如Th1、Th2、Th17）和CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（如Treg）。Treg細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞的重要亞群之一，具有免疫無(wú)反應(yīng)性和免疫抑制性，其通過(guò)與效應(yīng)T細(xì)胞直接接觸或釋放細(xì)胞因子等多種途徑及機(jī)制作用于靶細(xì)胞，從而發(fā)揮其免疫抑制作用。Treg細(xì)胞按來(lái)源可分為天然調(diào)節(jié)T細(xì)胞（nTreg）和誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（iTreg）。nTreg細(xì)胞在胸腺發(fā)育成熟，釋放到外周血發(fā)揮其作用，叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3（FoxP3）是其特征性標(biāo)志物，是參與nTreg細(xì)胞分化、發(fā)育及發(fā)揮功能的關(guān)鍵特異性分子，因此目前認(rèn)為Treg細(xì)胞的經(jīng)典表型為CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞。雖然nTreg細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖需要IL-2，但是其自身并不產(chǎn)生分泌IL-2，因此由活化效應(yīng)T細(xì)胞所分泌的IL-2是其主要來(lái)源，推測(cè)Treg細(xì)胞的數(shù)量可能與之相關(guān)。iTreg細(xì)胞包括Tr1細(xì)胞、Th3細(xì)胞和適應(yīng)性Treg細(xì)胞，在體外的靜息T細(xì)胞在IL-10等刺激因素下可分化為Tr1細(xì)胞，而腸道黏膜組織的靜息T細(xì)胞在某些口服抗原下可分化為Th3細(xì)胞，還有某些靜息CD4+T細(xì)胞在局部微環(huán)境含有大量TGF-β并缺少IFN-γ、IL-12或IL-4時(shí)可成為適應(yīng)性Treg[2]。Tr1細(xì)胞可分泌高水平IL-10，而Th3細(xì)胞與適應(yīng)性T細(xì)胞主要是通過(guò)分泌產(chǎn)生TGF-β來(lái)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[2]。IL-10可以使抗原特異性T細(xì)胞的數(shù)量明顯降低，TGF-β可以抑制效應(yīng)免疫細(xì)胞的增殖分化和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，并且可以誘導(dǎo)FoxP3的表達(dá)，目前研究認(rèn)為iTreg細(xì)胞為非依賴FoxP3性。隨著研究的深入，Collison等[3]發(fā)現(xiàn)IL-35是又一類介導(dǎo)Treg細(xì)胞免疫抑制調(diào)節(jié)作用的重要因子。IL-35為抑制性細(xì)胞因子，屬于IL-12細(xì)胞因子家族，現(xiàn)認(rèn)為其分泌表達(dá)來(lái)源于Treg細(xì)胞[4]。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心肌炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性肝炎及腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，口腔中的許多疾病也與該細(xì)胞功能有關(guān)。

2 Treg細(xì)胞與牙周炎

牙周病是牙菌斑與宿主防御相互作用的結(jié)果，盡管牙菌斑生物膜是牙周病的始動(dòng)因子，但是牙周病的發(fā)病過(guò)程及嚴(yán)重程度主要取決于宿主的免疫反應(yīng)。牙周炎可以導(dǎo)致牙槽骨和牙齦的破壞，也是導(dǎo)致牙齒缺失的主要原因。以往研究認(rèn)為Th1與Th2的失衡在牙周炎中發(fā)揮了重要的作用，但隨著近年研究的深入，發(fā)現(xiàn)Treg細(xì)胞也參與并發(fā)揮了重要的作用。于西佼等[5]在對(duì)大鼠牙周炎的研究中發(fā)現(xiàn)，外周血中CD4+CD25+Treg細(xì)胞自牙周炎發(fā)生早期逐漸升高，與牙周炎發(fā)生發(fā)展規(guī)律一致，證實(shí)了Treg細(xì)胞參與介導(dǎo)了牙周炎發(fā)生的免疫調(diào)控，機(jī)體通過(guò)調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞來(lái)控制免疫炎癥的發(fā)生。有研究發(fā)現(xiàn)，與牙齦炎及健康組織相比較，F(xiàn)oxP3在牙周炎中基因表達(dá)上調(diào)，在牙周炎病損中提取的Treg細(xì)胞表達(dá)了高水平的FoxP3[6]。Treg細(xì)胞也可通過(guò)抗炎細(xì)胞因子來(lái)控制炎癥。在牙周炎組織中IL-10基因表達(dá)高于健康組織及外周血單核細(xì)胞[6]。缺失IL-10的小鼠可以增加對(duì)牙齦卟啉單胞菌的敏感性，導(dǎo)致牙槽骨的吸收[7]。同樣，TGF-β在人類牙周炎病損中基因表達(dá)量增加[6]。Okui等[8]指出，在牙周炎癥較輕的區(qū)域，TGF-β升高，Treg細(xì)胞數(shù)量增多。大量TGF-β可以促進(jìn)FoxP3的表達(dá)，從而增強(qiáng)Treg細(xì)胞的分化。Dutzan等[9]認(rèn)為IL-10、TGF-β與牙周炎的發(fā)展進(jìn)程及活動(dòng)期呈負(fù)相關(guān)。最近越來(lái)越多的研究證明，全反式視黃酸（ATRA）可以抑制牙齦卟啉單胞菌，同時(shí)伴隨著Foxp3+細(xì)胞數(shù)量的增加，IL-10及TGF-β水平的升高[10]。Glowacki等[11]發(fā)現(xiàn)在小鼠的試驗(yàn)性牙周炎中，通過(guò)注射C-C家族趨化因子配體22（CCL22），可以使Foxp3+Treg細(xì)胞趨化到牙齦組織，CCL22所釋放的顆?？梢允筎reg細(xì)胞相關(guān)的抗炎因子增加，減少促炎細(xì)胞因子，并顯著減少牙槽骨的吸收。這些研究可以使得牙周炎的治療不再局限于牙菌斑的去除，通過(guò)ATRA或者CCL22介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)方法為牙周炎的治療帶來(lái)了新希望。

3 Treg細(xì)胞與根尖周炎

根尖周炎的特點(diǎn)是慢性炎癥的浸潤(rùn)，可以導(dǎo)致患牙根尖周組織的破壞。慢性根尖周炎的形成涉及免疫反應(yīng)的激活及牙根尖牙槽骨的吸收。研究顯示，在肉芽腫性病變中破骨細(xì)胞活動(dòng)占優(yōu)勢(shì)，與Th1反應(yīng)相關(guān)，同時(shí)標(biāo)記的Treg細(xì)胞的表達(dá)可能抑制了Th1的反應(yīng)[12]。在囊腫中，Th2活動(dòng)表現(xiàn)為增強(qiáng)[12]。雖然根尖病變的發(fā)展機(jī)制沒(méi)有研究透徹，但是免疫的失衡及破骨細(xì)胞在肉芽腫和囊腫中的活性是由Treg細(xì)胞調(diào)節(jié)的。與囊腫相比，在肉芽腫中IL-10表達(dá)的增加及Treg標(biāo)記物FoxP3的增加，表明在肉芽腫中T細(xì)胞數(shù)量較大，從而推測(cè)IL-10可能由Treg細(xì)胞產(chǎn)生，參與了在肉芽腫中Treg細(xì)胞對(duì)Th1細(xì)胞的抑制作用[12]。Treg細(xì)胞在根尖周炎中的作用有待進(jìn)一步研究。

4 Treg細(xì)胞與口腔黏膜病

4.1 Treg細(xì)胞與口腔扁平苔蘚 口腔扁平苔蘚（oral lichen planus）是一種由T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)性疾病，典型的病理表現(xiàn)為上皮過(guò)度不全角化、基底層液化變性及固有層密集的淋巴細(xì)胞呈帶狀浸潤(rùn)[13]。白楊等[14]研究發(fā)現(xiàn)OLP外周血中Treg細(xì)胞水平升高，糜爛型病損組織中CD4+Foxp3+/CD4+效應(yīng)性T細(xì)胞比網(wǎng)紋型低，表明OLP的分型與Foxp3+Treg細(xì)胞與效應(yīng)性T細(xì)胞的不平衡有關(guān)。在隨后的研究中發(fā)現(xiàn)，OLP患者相對(duì)于健康人而言，其CD4+CD25+細(xì)胞對(duì)CD4+CD25-細(xì)胞增殖的抑制作用減弱，因而推測(cè)OLP患者Treg細(xì)胞的免疫抑制功能降低，且其數(shù)量代償性增加，但是不能有效的限制效應(yīng)T細(xì)胞的應(yīng)答水平，出現(xiàn)T細(xì)胞抵抗，這可能是引起OLP發(fā)生的機(jī)制之一[15]。同樣，Tao等[16]研究發(fā)現(xiàn)，在OLP病損組織中FoxP3轉(zhuǎn)錄顯著高于正常組織，F(xiàn)oxp3+Treg細(xì)胞數(shù)量也增多。隨著研究深入，發(fā)現(xiàn)OLP紅斑及糜爛型的Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)量較網(wǎng)紋型少，并且病損中Foxp3+T細(xì)胞的數(shù)量與疾病活動(dòng)評(píng)分呈負(fù)相關(guān)性[17]。此外，有研究表明在OLP中網(wǎng)紋型上皮內(nèi)的Foxp3+細(xì)胞較糜爛型多，而糜爛型的Foxp3+的比率相對(duì)較高[18]。推測(cè)疾病的嚴(yán)重程度及口腔微生物的活動(dòng)可能與糜爛型OLP中Foxp3+比率較高有關(guān)。而王婧蛟等[19]發(fā)現(xiàn)在OLP患者的外周血中Foxp3的表達(dá)降低，抑制T細(xì)胞的活化，使Treg細(xì)胞的功能降低，無(wú)法維持和調(diào)控自身的免疫功能，可能是發(fā)生OLP的原因之一。造成結(jié)果不同的原因還需要進(jìn)一步研究。有研究表明，使用羥氯喹后可以使Treg細(xì)胞表達(dá)下降，可以為OLP的治療提供新方法[20]。

4.2 Treg細(xì)胞與復(fù)發(fā)性口腔潰瘍 復(fù)發(fā)性口腔潰瘍（recurrent aphthous ulcer，RAU）是最常見(jiàn)的口腔黏膜疾病，具有復(fù)發(fā)性、自限性和周期性，其發(fā)病機(jī)制不清，現(xiàn)認(rèn)為與遺傳、免疫、感染等因素有關(guān)。近年來(lái)研究認(rèn)為RAU與T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)有關(guān)，有研究顯示，RAU患者在潰瘍期Foxp3+Treg細(xì)胞的比例下降，活性降低[21]。CD4+CD25+Treg細(xì)胞在維持Th1/Th2平衡中發(fā)揮著重要的作用，尤其在抑制TH2細(xì)胞因子的免疫作用中發(fā)揮重要作用，CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平的降低，引起以Th2細(xì)胞為主的炎癥因子的釋放，使TH1/TH2失衡，向Th2漂移，導(dǎo)致RAU患者免疫功能發(fā)生紊亂，可能是反復(fù)發(fā)生潰瘍的原因[22]。關(guān)于Treg細(xì)胞在RAU中的作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

4.3 Treg細(xì)胞與白塞病 白塞?。?Behcets’s disease，BD） 是一類慢性進(jìn)行性、系統(tǒng)損害性及反復(fù)發(fā)作性的疾病，與患者自身免疫異常有關(guān)，又稱為口-眼-生殖器三聯(lián)征。曹慶科等[23]研究發(fā)現(xiàn)BD活動(dòng)期外周血中的CD4+CD25+Treg細(xì)胞的百分率低于健康組，非活動(dòng)期則略高于健康組，認(rèn)為CD4+CD25+Treg細(xì)胞比率較低的患者，病情處于活動(dòng)期。同樣，梁亮等[24]研究也發(fā)現(xiàn)BD患者的Treg細(xì)胞數(shù)量較正常人明顯下降，且Treg細(xì)胞的效應(yīng)因子IL-10也明顯降低，推測(cè)具有免疫抑制作用的Treg細(xì)胞及其細(xì)胞因子數(shù)量下降，而有促進(jìn)免疫發(fā)生的Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子數(shù)量增多，導(dǎo)致兩者的平衡破壞，從而發(fā)生炎癥反應(yīng)。而Kim等[25]發(fā)現(xiàn)在BD患者中，是由于活化的Treg細(xì)胞數(shù)量下降導(dǎo)致了外周血Treg數(shù)量的下降，活化Treg與靜息Treg的比例差異雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其平均值低于健康組。Treg細(xì)胞在BD中的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

5 Treg細(xì)胞與口腔鱗癌

口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral aquamous cell carcinoma，OSCC）是口腔頜面部最常見(jiàn)的惡性腫瘤， 其復(fù)發(fā)率高，患者生存率低，預(yù)后較差。腫瘤的發(fā)生發(fā)展和機(jī)體的免疫功能相關(guān)，而Treg細(xì)胞可以使機(jī)體內(nèi)的效應(yīng)細(xì)胞功能受到抑制，在腫瘤的免疫逃逸中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。張素欣等[26]研究發(fā)現(xiàn)，在正常的口腔黏膜組織中未見(jiàn)Foxp3+CD4+CD25+Treg細(xì)胞，而在OSCC患者的局部腫瘤組織中明顯升高，并且Treg細(xì)胞與腫瘤分化程度具有一定的相關(guān)性，隨著腫瘤分化程度的降低，Treg細(xì)胞數(shù)量增多，抑制免疫作用增強(qiáng)，利于腫瘤的免疫逃逸，促進(jìn)其發(fā)展。同時(shí)，腫瘤微環(huán)境下的Treg細(xì)胞及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子可以阻止效應(yīng)T細(xì)胞的激活與趨化，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[27]。此外，Gaur等[28]研究發(fā)現(xiàn)，在OSCC患者的血清中TGF-β1、IL-4、IL-10與腫瘤的大小及發(fā)展階段有關(guān)，它們可以作為潛在的高靈敏度和特異性的互補(bǔ)生物標(biāo)志物，在臨床上可用來(lái)證實(shí)診斷OSCC。由于OSCC患者體內(nèi)Treg細(xì)胞的數(shù)量明顯升高，因此臨床上對(duì)Treg細(xì)胞的測(cè)定有助于對(duì)預(yù)后的評(píng)估，對(duì)其調(diào)控是治療的關(guān)鍵。

6 小結(jié)

Treg細(xì)胞是具有免疫抑制作用的T細(xì)胞亞群，對(duì)于其來(lái)源、功能及與疾病的關(guān)系有了一定的研究，目前對(duì)其研究進(jìn)入了新階段。Treg細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子在口腔疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，但其作用于效應(yīng)細(xì)胞來(lái)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。隨著對(duì)Treg細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子作用的進(jìn)一步研究，對(duì)預(yù)防和治療口腔疾病具有深遠(yuǎn)的意義。

[1] Sakaguchi S，Sakaguchi N，Asano M，et al.Immunologic selftolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains（CD25）.Breakdown of a single mechanism of selftolerance causes various autoimmune diseases[J].J Immunol，1995，155（3）：1151-1164.

[2]龔非力.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].第3版.北京：科學(xué)出版社，2012：122.

[3] Collison L W，Abigail V C，Paul L H，et al.IL-35-mediated induction of a potent regulatory T cell population[J].Nat Immunol，2010，11（12）：1093-1101.

[4] Chaturvedi V，Collison L W，Guy C S，et al.Cutting edge：Human regulatory T cells require IL-35 to mediate suppression and infectious tolerance[J].J Immunol，2011， 186（12）：6661-6666.

[5]于西佼，杜毅，唐開亮.牙周炎發(fā)生時(shí)外周血中CD4+CD25+T細(xì)胞表達(dá)的變化研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014，11（2）：11-12.

[6] Cardoso C R，Garlet G P，Moreira A P，et al.Characterization of CD4+CD25+natural regulatory T cells in the inflammatory infiltrate of human chronic periodontitis[J].J Leukoc Biol，2008，84（1）：311-318.

[7] Alayan J，Ivanovski S，F(xiàn)arah C S.Alveolar bone loss in T helper 1/T helper 2 cytokine-deficient mice[J].J Periodontal Res， 2007， 42（2）：97-103.

[8] Okui T，Aoki Y，Ito H，et al.The presence of IL17+/FOXP3+doublepositive cells in periodontitis[J].J Dent Res，2012，91（6）：574-579.

[9] Dutzan N，Vernal R，Vaque J P，et al.Interleukin-21 expression and its association with proinflammatory cytokines in untreated chronic periodontitis patients[J].J Periodontol，2012，83（7）：948-954.

[10] Wang L，Wang J，Jin Y，et al.Oral administration of all-trans retinoic acid suppresses experimental periodontitis by modulating the Th17/Treg imbalance[J].J Periodontol，2014，85（5）：740-750.

[11] Glowacki A J，Yoshizawa S，Jhunjhunwala S，et al.Prevention of inflammation-mediated bone loss in murine and canine periodontal disease via recruitment of regulatory lymphocytes[J].Proc Natl Acad Sci USA，2013，110（46）：18 525-18 530.

[12] Fukada S Y，Silva T A，Garlet G P，et al.Factors involved in the T helper type 1 and type 2 cell commitment and osteoclast regulation in inflammatory apical diseases[J].Oral Microbiol Immunol，2009，24（1）：25-31.

[13]陳謙明.口腔黏膜病學(xué)[M].第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：103-110.

[14]白楊，王文梅，王翔，等.Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在口腔扁平苔蘚組織中的表達(dá)[J].中華口腔醫(yī)學(xué)雜志，2011，46（z1）：31-35.

[15]白楊，王文梅，朱雅男，等.OLP外周血中CD4+CD25+T細(xì)胞體外增殖及對(duì)CD4+CD25-T細(xì)胞增殖的影響[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2013，29（12）：724-727.

[16] Tao X A，Li C Y，Xia J，et al.Differential gene expression profiles of whole lesions from patients with oral lichen planus[J].J Oral Pathol Med，2009，38（5）：427-433.

[17] Tao X A，Xia J，Chen X B，et al.FOXP3+T regulatory cells in lesions of oral lichen planus correlated with disease activity[J].Oral Dis，2010，16（1）：76-82.

[18] Pereira J S，Monteiro B V，Nonaka C F，et al.FoxP3+T regulatory cells in oral lichen planus and its correlation with the distinct clinical appearance of the lesions[J].Int J Exp Pathol，2012，93（4）：287-294.

[19]王婧姣，臧磊，漆明，等.FOXP3、GITR和GITRL在口腔扁平苔蘚患者外周血中的表達(dá)[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（6）：789-793.

[20] Zhu Y，Li J，Wang X，et al.Hydroxychloroquine decreases the upregulated frequencies of Tregs in patients with oral lichen planus[J].Clin Oral Investig，2014，18（8）：1903-1911.

[21] Lewkowicz N，Lewkowicz P，Dzitko K，et al.Dysfunction of CD4+CD25high T regulatory cells in patients with recurrent aphthous stomatitis[J].J Oral Pathol Med，2008，37（8）：454-461.

[22]聶玉潔，蔡揚(yáng)，豐秋婧.復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍患者外周血T-bet、GATA-3和Foxp3的表達(dá)及意義[J].國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志，2013，40（5）：568-571.

[23]曹慶科，于志湖.白塞病患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測(cè)及其臨床意義[J].中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志，2007，23（5）：376-378.

[24]梁亮，王紅，彭曉燕，等.白塞病患者外周血Th細(xì)胞亞群比例變化的研究[J].中華眼科雜志，2011，47（5）：393-397.

[25] Kim J R，Chae J N，Kim S H，et al.Subpopulations of regulatory T cells in rheumatoid arthritis，aystemic lupus erythematosus，and Behcet’s disease[J].J Korean Med Sci，2012，27（9）：1009-1013.

[26] 張素欣，劉哲敏，段玉芹，等.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在口腔鱗癌患者外周血及癌組織中的表達(dá)和意義[J].腫瘤防治研究，2013，40（11）：1041-1045.

[27] Oluwadara O，Giacomelli L，Brant X，et al.The role of the microenvironment in tumor immune surveillance[J].Bioinformation，2011，5（7）：285-290.

[28] Gaur P，Singh A K，Shukla N K，et al.Inter-relation of Th1， Th2，Th17 and Treg cytokines in oral cancer patients and their clinical significance [J].Hum Immunol，2014，75（4）：330-337.