CD90在增生性瘢痕中的表達(dá)及其生物學(xué)作用研究

楊炳林 肖 堅(jiān) 陳文新 王合兵 李永林 蘇衛(wèi)國

CD90在增生性瘢痕中的表達(dá)及其生物學(xué)作用研究

楊炳林 肖 堅(jiān) 陳文新 王合兵 李永林 蘇衛(wèi)國

目的 探討CD90在增生性瘢痕的形成過程中所起的生物學(xué)作用。方法 20例帶有正常皮膚組織的瘢痕為手術(shù)切除后的標(biāo)本，經(jīng)過嚴(yán)格固定、石蠟包埋、組織切片、HE染色后，分為增生性瘢痕組(A組)、瘢痕交界處組(B組)及正常皮膚組(C組)，每組20例。從每例標(biāo)本中選取1個(gè)典型部分進(jìn)行采樣，構(gòu)建包括60個(gè)典型組織標(biāo)本的芯片蠟塊，從該蠟塊中切取1張切片，免疫組化染色,檢測CD90在A、B、C組中的表達(dá)水平，將所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 CD90的陽性表達(dá)在A組與B組中均較高，兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而在C組中陽性表達(dá)較低，與上述兩組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 在增生性瘢痕中，CD90陽性表達(dá)的成纖維細(xì)胞與瘢痕異常增生存在相關(guān)性。

增生性瘢痕；CD90；免疫組化

增生性瘢痕是因創(chuàng)傷后膠原纖維等細(xì)胞外基質(zhì)過度生長、無序沉積所致。CD90作為粘附分子家族成員，在成纖維細(xì)胞的粘附、凋亡、細(xì)胞增殖等方面通過信號傳導(dǎo)發(fā)揮作用,與創(chuàng)面愈合和纖維化疾病關(guān)系密切［1］。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化結(jié)合組織芯片技術(shù)方法，檢測成纖維細(xì)胞CD90在增生性瘢痕、瘢痕交界處、周圍正常皮膚組織中的陽性表達(dá)情況，為增生性瘢痕的臨床防治提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 20例標(biāo)本均來自本院外科手術(shù)切除的瘢痕組織，用福爾馬林溶液進(jìn)行嚴(yán)格固定，然后常規(guī)石蠟包埋,切片經(jīng)過HE染色檢測證實(shí)臨床診斷后，分為正常皮膚組、瘢痕交界處組、增生性瘢痕組，每組20例。所選標(biāo)本都符合以下實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)［2］：①病變未超過損傷范圍；②病程中瘢痕組織具有持續(xù)性生長、表面發(fā)紅、疼痛及瘙癢等臨床癥狀；③未經(jīng)過口服激素藥物、冷凍、激光等非手術(shù)治療；④供者無遺傳性疾病及全身系統(tǒng)性疾病。

1.2 試劑來源及染色方法 鼠抗人CD90單克隆抗體、SP通用型免疫組化試劑盒(武漢博士德生物工程公司)。將新鮮的組織標(biāo)本用10%中性甲醛固定，制成3 μm厚度石蠟切片后HE染色。根據(jù)染色結(jié)果，通過觀察組織標(biāo)本中成纖維細(xì)胞的分布特征及膠原含量情況，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。分成增生性瘢痕組(A組)、瘢痕交界處組(B組)、正常皮膚組(C組)。選取三組組織蠟塊的標(biāo)本，根據(jù)標(biāo)本HE切片染色及形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果確定其典型病變部位，從每例標(biāo)本中選取1個(gè)典型部分進(jìn)行采樣，構(gòu)建包括60個(gè)典型組織標(biāo)本的芯片蠟塊，陣列均為10×6。將組織芯片蠟塊切片，制成3 μm厚度。

1.3 觀察方法 通過觀察組織切片中成纖維細(xì)胞CD90的表達(dá)情況，CD90以細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，由兩名高年資病理科醫(yī)師在光學(xué)顯微鏡下觀察并照相，評估其免疫組化結(jié)果。

1.4 評分標(biāo)準(zhǔn) 在400倍光鏡下隨機(jī)觀察5個(gè)視野，每張切片由2名觀察者雙盲交換判斷，采用半定量記分法，根據(jù)細(xì)胞膜或細(xì)胞漿的染色強(qiáng)度及染色細(xì)胞百分比進(jìn)行綜合評分［3］。陽性細(xì)胞數(shù)評分標(biāo)準(zhǔn)：＞50%為3分；26%～50%為2分；≤25%為1分；無細(xì)胞染色記為0分，染色強(qiáng)度評分：3分為棕褐色；2分為棕黃色；1分為淺黃色；0分為無色。結(jié)合每張切片染色程度和陽性細(xì)胞數(shù)百分比進(jìn)行綜合評分，兩者相加為其最后得分：判定0～2分為陰性，3～6分為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

20例標(biāo)本中，A組有13例可以觀測到有少量CD90陽性表達(dá)的成纖維細(xì)胞分布在管周，真皮中CD90陽性表達(dá)的成纖維細(xì)胞相對較多，且體積肥大，C組中CD90陽性表達(dá)的成纖維細(xì)胞相對較少，且體積也較小。B組中CD90的陽性表達(dá)(50.00%)介于A組(61.11%)與C組(16.67%)之間。A組與B組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，A組與C組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

CD90是最小的免疫球蛋白超家族成員，一般都貼附在細(xì)胞膜的胞漿面，它作為一種細(xì)胞的粘附結(jié)構(gòu)，是細(xì)胞與細(xì)胞之間，細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)之間相互作用的重要調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)［1］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞CD90陽性的表達(dá)情況，在A組中表達(dá)最高，而在B組及其C組中表達(dá)量依次遞減，這說明CD90在增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中表達(dá)明顯，而且與瘢痕形成密切相關(guān)。

為了減少實(shí)驗(yàn)誤差，本實(shí)驗(yàn)中作者采用組織芯片技術(shù)檢測成纖維細(xì)胞CD90的陽性表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞CD90在A組與B組中的陽性表達(dá)均較高，兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而在C組的陽性表達(dá)較低，其與上述兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這些都提示成纖維細(xì)胞CD90在增生性瘢痕中的確存在異常表達(dá)，推測CD90可能是增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的特異標(biāo)記，它在瘢痕異常增生過程中起作用,如能針對CD90進(jìn)行干預(yù)和調(diào)控，有望在增生性瘢痕的防治中發(fā)揮積極的作用。

［1］ Hagood JS，Prabhakaran P，Kumbla P，et al.Loss of fibroblast Thy-1 expression correlates with lung fibrogenesis.Am J Pathol，2005，167(2):365-379.

［2］ 李薈元，魯開花，郭樹忠.新編瘢痕學(xué).西安:第四軍醫(yī)大學(xué)出版社，2003:9-25.

［3］ Mattern J，Koomagi R，Volm K.Association of vascular endothelial growth factor expression with intratumoral microvessel density and tumour cell proliferation in human epidermoid lung cancer.Br J Cancer，1996，73(7):931-934.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.29.018

2015-04-29］

000000 福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明第一醫(yī)院乳腺外科(楊炳林 肖堅(jiān) 陳文新 王合兵)；鄭州市第一人民醫(yī)院整形外科(李永林 蘇衛(wèi)國)