HPLC法測定香砂平胃丸中橙皮苷的含量

陳艷梅 劉傳輝

（1河南省商丘市食品藥品檢驗(yàn)所，商丘 476000；2河南省商丘市畜產(chǎn)品質(zhì)檢中心，商丘 476000）

HPLC法測定香砂平胃丸中橙皮苷的含量

陳艷梅 劉傳輝

（1河南省商丘市食品藥品檢驗(yàn)所，商丘 476000；2河南省商丘市畜產(chǎn)品質(zhì)檢中心，商丘 476000）

目的建立香砂平胃丸中橙皮苷的含量測定方法。方法 采用Agilengt Eclipse Plus -C18色譜柱（150mm×4.6mm，5um）；流動相：甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）；流速：1.0m l·m in-1；檢測波長283n m。結(jié)果 橙皮苷在0.0438～0.438μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9996），平均回收率為97.83%，RSD=0.81%（n=6）。結(jié)論 方法簡便，靈敏，準(zhǔn)確，可靠，可以作為香砂平胃丸中橙皮苷的含量測定方法。

香砂平胃丸；橙皮苷；高效液相色譜

香砂平胃丸[1]由蒼術(shù)、陳皮、厚樸（姜制）、砂仁、木香、甘草加工制成。具健脾，舒氣、止痛之功效，用于胃腸衰弱、消化不良、胸膈滿悶、胃痛嘔吐。

陳皮為方中君藥，橙皮苷為陳皮特征成分[1-2]，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為簡單，無含量測定項(xiàng)，為了確保產(chǎn)品的質(zhì)量，采用HPLC建立了該制劑中橙皮苷的含量測定方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，重現(xiàn)性好，空白無干擾，可作為控制本制劑質(zhì)量的分析方法。

1 儀器與試藥

Agilengt 1260高效液相色譜儀（G1314F VWD檢測器） Eclipse Plus-C18色譜柱 （150mm×4.6mm，5um）；島津AUW220D電子分析天平 （精密至0.01mg） DSQ10260超聲儀（功率300W，頻率50HZ上海特惠電子儀器有限公司生產(chǎn)）。

橙皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110721-200512）；乙腈為色譜純，醋酸為分析純、水為重蒸餾水（本單位自制）。香砂平胃丸（商丘市金馬藥業(yè)有限公司提供：批號：13052221、13011101、12850121），陰性樣品自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性 色譜柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色譜柱 (4.6mm×100mm，5um)；流動相：甲醇-醋酸-水 （35∶4∶61）；流速：1.0ml·min-1；檢測波長283nm[2]；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為5μl；在上述條件下，黃橙皮苷峰出峰時間為4.7分鐘，橙皮苷峰與其他色譜峰分離度大于1.5，達(dá)到良好的分離效果，理論板數(shù)按橙皮苷峰計算不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品27.38mg，精密稱定，置于25ml棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲使完全溶解后，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液，進(jìn)樣前經(jīng)0.45um微孔濾膜濾過。

2.3 供試品及陰性對照溶液的制備 取本品約8.0g，研細(xì)，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，浸漬兩小時，超聲提取20分鐘[3]，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液，進(jìn)樣前經(jīng)0.45um微孔濾膜濾過。

另取按處方比例及生產(chǎn)工藝制備不含陳皮的陰性對照品約8.0g，同法制成陰性對照溶液。進(jìn)樣前經(jīng)0.45um微孔濾膜濾過。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 精密取對照品溶液，分別進(jìn)樣5μl，以2.1色譜條件，分別進(jìn)樣測定，記錄橙皮苷峰面積，以進(jìn)樣量（ug） （X） 對峰面積（Y） 進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=1800.92152X+2.29416 r=0.9996。橙皮苷在0.0438～0.438μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 干擾試驗(yàn) 精密取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各5μl，以甲醇-醋酸-水 （35：4：61）；流速：1.0ml.min-1；檢測波長283nm；柱溫為30℃；分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明陰性對照對橙皮苷的測定無干擾。

圖1香砂平胃丸的高效液相色譜圖

2.6 精密度試驗(yàn) 精密取橙皮苷對照品溶液5ul，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄橙皮苷峰面積，結(jié)果6次進(jìn)樣測得峰面積分別為：453.12923、455.74632、450.15987、455.62477、454.46251、455.77483，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD=0.49%(n=6)，表明橙皮苷精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密取香砂平胃丸供試品溶液5ul，分別在0、2、4、8、12、16h進(jìn)樣測定，測得峰面積分別為：431.26608、430.56452、428.85475、429.62547、427、88340、429.62555，結(jié)果RSD=0.87%，表明供試品溶液在16小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號樣品（批號：13052221）5份，按2.3方法操作，并按上述色譜條件測定，測得峰面積并計算含量。結(jié)果橙皮苷含量平均1.308mg/g，RSD為1.31%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，稱取6份已知含量為1.308mg/g的樣品約2.0g，精密稱定，置250ml棕色容量瓶中，分別精密加入對照品溶液各2ml，按照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣5ul，分別測定回收率，結(jié)果見表1。

表1橙皮苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 （%）

2.10 樣品測定 按2.1色譜條件對5批香砂平胃丸樣品，分別進(jìn)行含量測定，按外標(biāo)法計算橙皮苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 5批樣品中橙皮苷的含量 （mg/g）

3 討論

香砂平胃丸經(jīng)多年臨床經(jīng)驗(yàn)證明對治療胃脘疼、心下痞滿、胃疼噯氣、惡心吐酸、淺表性胃炎、十二指腸球部炎及潰瘍等癥具有顯著療效，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有薄層鑒別項(xiàng)目，未有含量測定項(xiàng)目，為了較好地控制該制劑的質(zhì)量，保障人體用藥安全，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對香砂平胃丸中所含橙皮苷進(jìn)行了含量測定，方法簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，效果滿意。

橙皮苷提取方法的選擇：筆者對同一批香砂平胃丸進(jìn)行了加石油醚（60～90℃） 索氏提取[2]及加甲醇浸泡超聲兩種不同的提取方案比較，并對后種方案中浸漬，超聲時間進(jìn)行了考察結(jié)果見表3：

表3不同提取方法所得橙皮苷的含量 （mg/g）

由上表可見索氏提取和甲醇浸漬超聲提取對香砂平胃丸中橙皮苷含量測定無明顯區(qū)別，從操作方便，快捷、經(jīng)濟(jì)方面考慮筆者建議選擇浸漬2h超聲20分鐘。且索氏提取所得色譜峰雜質(zhì)峰較多，不建議采用索氏索氏提取法。

從樣品含量測定結(jié)果可以看出，橙皮苷的含量較高的為1.317mg/g，較低的為1.3000mg/g，綜合考慮原藥材的選擇及制劑生產(chǎn)工藝等多種因素的影響，建議將該制劑中橙皮苷含量含量指標(biāo)為含橙皮苷（C28H34O15） 不得少于1.30mg/g，另建議廠家考察不同產(chǎn)地，不同節(jié)氣，不同色澤陳皮原料中橙皮苷含量，以確保香砂平胃丸質(zhì)量，以保證其療效。

[1]WS1-B-2938-98.中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊[S].北京：中華人民共和國藥典委員會，1989.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版.一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3]史大軍，袁才瓊，邱海蘊(yùn).高效液相色譜法測定小兒吐瀉寧中橙皮苷含量[J].中國藥業(yè)，2011，20(12):36-37.

Content Determination of Hesperidin in Xiangsha Pingwei Pills by HPLC

CHEN Yanmei1,LIU Chuanhui2
（1 Shangqiu food and druginspection，shangqiu 476000,China;2.Shangqiu animalproducts quality in spection center,shangqiu 476000,China）

ObjectiveTo establish HPLC method for the determination of Hesperid in Xiangsha Pingwei Pills.Methods The chromatographic systemconsisted of C18 column （150mm×4.6mm，5um） ,amobile phase ofmethonal acetic acide-water(35：4：61).The content was detected at a waveleng of 283nm,the flow rate was 1.0 mol·min－1.Results The Baicalin have a good linear relatio in the range of 0.0438～0.438ug（r=0.9993） ,the average recovery was 98.61%，RSD=0.86%（n=6）.Conclusion The method is convenient accuracy.It can be used for content determination of Hesperidin in Xiangsha Pingwei Pills by HPLC.

Xiangsha Pingwei Pills;Hesperidin;HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.02.077

1672-2779（2015）-02-0144-03

楊 杰 本文校對：楊 杰

2014-12-02）