冠心病老年男性患者雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數影響發(fā)病風險的臨床研究

馬和平 劉霞 劉越童 袁慧蕓

[摘要]目的 探討老年男性患者雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數對冠心病的發(fā)病風險影響。 方法 隨機選擇我院心血管內科收治的86例冠心病患者作為觀察組，100例體檢非冠心病患者作為對照組，采用聚合酶連反應（PCR）和直接測序法測定兩組研究對象外周血雄激素受體CAG重復序列的數目，并采用多因素Logistic回歸分析冠心病發(fā)病的危險因素。結果 觀察組與對照組在年齡、BMI、TT、E2四項指標上差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；但是在高血壓、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重復數<22、CAG重復數≥22指標上，兩組具有明顯的差異，且具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重復數<22是冠心病的危險因素；其中CAG重復數<22是CAG重復數≥22患冠心病的危險度增加4.421倍。 結論 罹患冠心病的危險因素很多，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數<22是患冠心病的主要危險因素之一。

[關鍵詞]雄激素受體；基因多態(tài)性；冠心病；發(fā)病風險

[中圖分類號]R541.4 [文獻標識碼]B [文章編號]2095-0616（2014）20-196-04

Study of androgen receptor CAG repeat polymorphism and coronary artery disease in elderly men

MA Heping LIU Xia LIU Yuetong YUAN Huiyun

Department of Medicine，Dongguan Liaobu Hospital，Dongguan 523400，China

[Abstract]Objective To investigate the relationship of androgen receptor CAG repeat polymorphism and coronary artery disease in elderly men. Methods 86 cases of coronary artery disease patients were randomly selected as the observation group，and 100 cases of medical non coronary heart disease were selected as control group，who were treated in our hospital department of cardiovascular internal medicine. Results Investigation of androgen receptor CAG repeat sequence number of the two groups of subjects peripheral was determined by polymerase chain reaction（PCR） and direct sequencing method.Risk factors of coronary heart disease were analyzed by multivariate logistic regression analysis.The observation group and the control group were no significant difference in the four indicators of age，BMI，TT， E2（P>0.05），but the hypertension，diabetes，hyperlipidemia，family history of diabetes，family history of coronary heart disease，CAG repeat numbers of<22，CAG repeat number≥22 of two groups had the obvious difference with statistical significance（P<0.05）.Smoking，hypertension，diabetes，hyperlipidemia，family history of coronary heart disease，CAG repeat number<22 were risk factors for coronary heart disease.Coronary heart disease risk of CAG repeat numbers<22 was 4.421 times greater than that of CAG repeat numbers≥22. Conclusion There are many risk factors of CHD.Androgen receptor gene CAG polymorphism repeat number<22 is one of the major risk factors of coronary heart disease.

[Key words]Androgen receptor；Gene polymorphism；Coronary artery disease；Onset risk

冠心病是臨床上常見的一種心血管疾病，多發(fā)于中老年群體，且隨著年齡的增長，冠心病的發(fā)生率有呈上升的趨勢[1]。該病發(fā)病機制復雜、病程長，容易并發(fā)多種合并癥，嚴重影響患者的生活質量。因此，對冠心病的早期發(fā)現和治療顯得尤為重要。臨床研究證實[2]，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數對老年男性冠心病的發(fā)生和發(fā)展具有一定的相關性。本研究主要以2011年1月～2012年12月我心血管內科收治的86例老年男性冠心病患者為研究對象，分析了老年男性患者雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數對冠心病的發(fā)病風險影響，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究86例老年男性冠心病患者來自于2011年1月～2012年12月我院心血管內科，100例正常研究對象來自于我院體檢中心。納入標準[3]：（1）老年男性冠心病患者要求經臨床體格檢查、患者主訴癥狀、心臟彩超或冠脈造影確診；（2）所有入選對象年齡均在60～82歲之間；（3）不合并其他內分泌疾病、臟器功能衰竭；（4）體檢正常者均為自愿參加此次研究。排除標準[4]：自身合并其他嚴重影響本次研究結果的疾病、依從性較差的研究對象。本次研究共納入186例研究對象。觀察組86例，年齡60～82歲，平均（67.4±8.4）歲，其中單支病變28例、雙支病變39例、3支及以上病變19例。對照組研究對象100例，年齡60～82歲，平均（66.4±7.9）歲，兩組研究對象在年齡比較上差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05），均在簽訂知情同意書后開始本次研究。

1.2 實驗儀器

液基因組DNA試劑盒由采用天根生化科技（北京）有限公司提供，ABI 3730xlDNA測序儀分析，北京六合華大基因科技股份有限公司提供的合成引物。

1.3 實驗方法

采用聚合酶連反應（PCR）：于清晨空腹抽取受檢者肘靜脈血3mL，采用肝素進行抗凝，用等體積的Hanks液稀釋靜脈血，以800r/s的速度進行分離操作，棄除上清液，將單個細胞放在溫度為-80℃的環(huán)境中保存。提取RNA，放置在Eppendorf管，加入5μgRNA，在溫度為70℃的恒溫箱中孵育5min，離心，加入1μL逆轉錄酶，在40℃的冰箱中孵育6min，合成第一鏈cDNA。由上海英峻生物技術有限公司合成CAG基因引物。內引物序列為：下游：5-GCAGcGAcTAccGcATcATcA-3，上游：5-GCTCTGGGACGCAACCTCTCT-3；外引物序列為下游：5-CTCTACGATGGGclTrGGGGAGAAc-3，上游：5-CGGGGTAAGGGAAGTAGGTGGAAG-3。反應條件：90℃ 30s；60℃ 40s；72℃ 60s，42個循環(huán)，最后72℃延伸300s。采用直接測序法測定兩組研究對象外周血雄激素受體CAG重復序列的數目，每個標本重復測序2次。

1.4 觀察指標

采用統(tǒng)一的自制調查問卷的方式對兩組研究對象進行調查，調查內容包括：患者的一般個人信息、BMI、危險因素（吸煙史、高血壓、血脂、糖尿病史）、家族遺傳史等。實驗室檢測的激素指標總睪酮（TT）、雌二醇（E2）。

1.5 統(tǒng)計方法

所有收集數據錄入Excel2003，在SPSS10.0中進行統(tǒng)計分析。計量資料以（x±s）表示，采用兩獨立樣本t檢驗，計數資料采用x2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 對兩組研究對象的一般資料進行統(tǒng)計分析

對兩組研究對象的年齡、BMI、吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、TT、E2、CAG重復數<22、CAG重復數≥22指標進行單因素分析，結果：觀察組與對照組在年齡、BMI、TT、E2四項指標上差異不顯著（P>0.05）；但是在高血壓、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重復數<22、CAG重復數≥22指標上，兩組具有明顯的差異，且具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。兩組各種指標的單因素比較結果，見表1。

2.2 冠心病多因素分析

以是否患有冠心病作為應變量，CAG重復數（<22 vs≥22）、是否吸煙、是否患有高血壓、是否患有糖尿病、是否有冠心病家族史、是否患有糖尿病家族史、是否具有高血脂進行多因素Logistic回歸分析，結果發(fā)現：吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重復數<22是冠心病的危險因素；其中CAG重復數<22是CAG重復數≥22患冠心病的危險度增加4.421倍。各種危險因素的OR值及P值，見表2。

3 討論

冠心病是臨床上常見的一種心血管疾病，多發(fā)于中老年群體，且男性發(fā)病數量多于女性，隨著年齡的增長，冠心病的發(fā)生率有呈上升的趨勢。該病發(fā)病機制復雜、病程長，容易并發(fā)多種合并癥，具有較大的治療難度。因此，對冠心病的發(fā)病機制和影響因素的研究顯得尤為重要。近年來，臨床上加大了對老年男性冠心病患者影響因素的研究力度，并取得了一定的進展。經研究證實[5]，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數對老年男性冠心病的發(fā)生和發(fā)展具有一定的相關性。

AR是介導雄激素生理效應的主要蛋白，其3個主要結構域由不同的外顯子編碼，其周中，CAG重復序列多態(tài)是其中的一個外顯子主要組成部分[6]。AR的功能和表達受到受到外顯子CAG重復序列多態(tài)性的調控，而AR基因中的CAG重復序列多態(tài)和冠心病的關系密切相關。近年來，國內外大量研究證實[7]，雄激素具有抗缺血的功效，且雄激素水平和男性冠心病的發(fā)生呈負相關，其中，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數，22是老年男性冠心病發(fā)生和發(fā)展的重要危險因素。老年男性冠心病患者的血循環(huán)睪酮水平降低，而睪酮水平的降低會一定程度上增加動脈粥硬化的風險。因此，老年男性高血壓患者通過長期口服高劑量睪酮制劑對心肌缺血和心絞痛癥狀的改善具有一定的效果。此外，老年男性群體容易發(fā)生動脈粥樣硬化，而老年男性的血循環(huán)睪酮水平會降低，表明動脈粥樣硬化和睪酮的水平具有一定程度的相關性。臨床研究發(fā)現[8-9]，內源性睪酮的濃度以及雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數和冠心病等心血管病死亡率呈負相關，其中，血清中睪酮含量每降低6nmol/L，校正多變量后老年男性冠心病的死亡率會上升約10%。

本研究通過對86例冠心病患者以及100例體檢非冠心病患者采用聚合酶連反應（PCR）和直接測序法測定外周血雄激素受體CAG重復序列的數目，并采用多因素Logistic回歸分析冠心病發(fā)病的危險因素，結果顯示，觀察組與對照組在年齡、BMI、TT、E2四項指標上差異不顯著，但是在高血壓、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重復數，22、CAG重復數≥22指標上，兩組具有明顯的差異，吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重復數，22是冠心病的危險因素，其中CAG重復數，22是CAG重復數≥22患冠心病的危險度增加4.421倍，表明雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數，22是患冠心病的主要危險因素之一，這一結果和相關文獻報道的數據相吻合[10]。因此，我們認為，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數，22對是導致老年男性冠心病發(fā)生的重要因素。

綜上所述，罹患冠心病的危險因素很多，包括吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病家族史等，但雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數，22是患冠心病的主要危險因素之一，高血壓臨床診治時，應當對患者的雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復數進行測定，以提高診斷正確率，有效預防老年男性冠心病的發(fā)生。

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（收稿日期：2014-08-08）