GS環(huán)保固定與傳統(tǒng)固定染色在冷凍切片中應(yīng)用

林紅

[摘要]目的 探討GS環(huán)保固定在冷凍切片中應(yīng)用價(jià)值。 方法 選取標(biāo)本300例，150例進(jìn)行GS固定，150例使用傳統(tǒng)固定液，比較兩組在使用上出現(xiàn)刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例，并對(duì)骨組織脫鈣和肺癌TIF-1+固定效果進(jìn)行比較。 結(jié)果 GS固定染色套液臨床使用上出現(xiàn)刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例顯著低于常規(guī)組（P<0.05）。 結(jié)論 GS環(huán)保套液效果滿意，具有在病理技術(shù)工作中推廣應(yīng)用的價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]GS環(huán)保固定；傳統(tǒng)固定；冷凍切片

[中圖分類號(hào)]R446.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]2095-0616（2014）20-139-03

GS environmental fixed and traditional fixed for stained in frozen sections

LIN Hong

Department of Pathology，the First Peoples Hospital of Shenyang City，Shenyang 110041，China

[Abstract]Objective To study the effect of GS environmental fixed and traditional fixed for stained in frozen sections. Methods 300 cases specimen were choosed，150 parts were used GS environmental fixed，150 cases were used conventional fixed，then pungent odor appeared and poor staining of fixed effects and the effect of the proportion of lung cancer and bone decalcification and TIF-1+ fixed effects in the two groups were comparedd. Results Appear pungent odor liquid fixed and stained for clinical use on GS sets，poor results and poor staining of fixed effects were significantly lower than conventional group（P<0.05）. Conclusion GS environmental fixed is satisfactory，it can huge promotion and application of technical work in the pathological value.

[Key words]GS environmental fixed；Conventional fixed；Frozen sections

醫(yī)生可利用冷凍切片進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，而固定與染色是決定冷凍切片是否能達(dá)到高水準(zhǔn)的關(guān)鍵，所以應(yīng)重視固定液與染液的選擇和應(yīng)用。目前常見(jiàn)的固定液類目廣泛，但都達(dá)不到環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)，且部分固定液，固定耗時(shí)長(zhǎng)，顯示效果差，對(duì)比度差，且易造成細(xì)胞腫脹、變形、空泡，易導(dǎo)致漏診、誤診，延誤治療[1]。同時(shí)95%乙醇長(zhǎng)時(shí)間固定無(wú)法保證組織細(xì)胞的形態(tài)，將固定時(shí)間縮短后，使用GS染色套液染色能夠避免以上缺點(diǎn)，制片效果良好。傳統(tǒng)固定液HE套液雖具有較好的臨床效果，但其包含的二甲苯會(huì)導(dǎo)致人體神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)受損，且汞成分的使用也達(dá)不到環(huán)保排放的要求[2]。故本研究主要采用GS固定染色套液對(duì)病理切片進(jìn)行冰凍切片處理，并與傳統(tǒng)固定染色套液進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2013年6～12月我院手術(shù)標(biāo)本300例，其中有甲狀腺、肝、腎、子宮、輸卵管、腦、卵巢以及腸道等，隨機(jī)選擇其中150例進(jìn)行GS固定染色套液固定（哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司研制并生產(chǎn)），另150例則使用傳統(tǒng)固定液（主要成分為二甲苯）進(jìn)行固定。

1.2 GS固定染色套液制片法及使用制劑

通過(guò)無(wú)醛型固定液對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行浸泡，并分別于固定后1、3、6、12、24h提取組織標(biāo)本進(jìn)行處理，使用的設(shè)備為SHANDON全自動(dòng)病理組織固定切片機(jī)，依次使用組織固定劑、醫(yī)用酒精、無(wú)水酒精、組織脫水劑、組織透明劑、浸蠟處理以及石蠟包埋等過(guò)程。對(duì)病理標(biāo)本進(jìn)行切片、HE染色、免疫組化染色和熒光原位雜交檢測(cè)等。

1.3 研究方法及觀察指標(biāo)

所有標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)，并按照數(shù)字隨機(jī)法分為兩組，比較兩組使用上出現(xiàn)刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例，并對(duì)骨組織脫鈣和肺癌TIF-1+固定效果進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行，計(jì)量資料以（x±s）表示，兩組間均數(shù)的比較使用t檢驗(yàn)，組間率的比較采用x2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

GS固定染色套液臨床使用上出現(xiàn)刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例顯著低于常規(guī)組（P<0.05）。見(jiàn)表1，圖1～4。

3 討論

對(duì)手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行組織處理時(shí)，組織固定會(huì)直接影響染色的效果。傳統(tǒng)的固定組織以甲醛為主。它能有效穿透組織，較好的保持了組織原有形態(tài)，且使用成本低，所以至今仍被廣泛應(yīng)用。甲醛的主要缺點(diǎn)：（1）揮發(fā)性強(qiáng)，刺激性和腐蝕性很強(qiáng)，環(huán)境危害嚴(yán)重，且難以防護(hù)。研究表明[3]，甲醛接觸皮膚會(huì)引發(fā)皮膚過(guò)敏等癥狀。長(zhǎng)期使用甲醛還會(huì)誘發(fā)慢性呼吸道疾病、癌癥發(fā)生，白細(xì)胞數(shù)量減少，記憶力和智力下降。（2）長(zhǎng)時(shí)間存放的甲醛會(huì)部分轉(zhuǎn)化為三聚甲醛，導(dǎo)致固定組織標(biāo)本效果不佳[4]；（3）甲醛易氧化成甲酸，在進(jìn)行固定染色時(shí)會(huì)使標(biāo)本酸化，導(dǎo)致染色效果不佳[5]；在對(duì)陳舊組織固定時(shí)，易在組織內(nèi)形成甲醛色素，從而影響病理診斷；（4）無(wú)法固定肝糖原和尿酸；（5）廢液需要進(jìn)行出來(lái)才能排放，處理成本較高。（6）醛類固定液在處理標(biāo)本時(shí)會(huì)引發(fā)組織內(nèi)蛋白質(zhì)交聯(lián)，不利于DNA的保存。隨著對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境安全要求的提高，研發(fā)沒(méi)有毒性的甲醛替代品已經(jīng)迫在眉睫[6]。目前國(guó)外已經(jīng)在這方面有相關(guān)研究報(bào)道，但國(guó)內(nèi)仍處于落后狀態(tài)[7]。本文選擇了國(guó)產(chǎn)GS固定液。GS組織標(biāo)本固定脫水試劑不但能夠有效軟化組織，且穿透性高。在固定組織的同時(shí)還能進(jìn)行脫水和脫脂。酸性溶液能夠較好的保存DNA[8]。與常規(guī)制片效果相似，符合某些腫瘤分子生物學(xué)研究要求。因此其能較好應(yīng)用于組織標(biāo)本，無(wú)毒無(wú)害，符合環(huán)保要求。

本研究常規(guī)固定法使用的二甲苯被用于傳統(tǒng)組織處理和染色中，它揮發(fā)性強(qiáng)，對(duì)人體危害極大。會(huì)嚴(yán)重刺激中樞神經(jīng)和植物神經(jīng)，長(zhǎng)時(shí)間接觸會(huì)引發(fā)頭昏目眩、肢體顫抖、免疫功能減退等，并有致癌效果。二甲苯還會(huì)對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重的污染，如大量廢棄二甲苯進(jìn)入下水道會(huì)導(dǎo)致城市水污染。為克服二甲苯的缺陷，有學(xué)者嘗試使用替代品：如脫色汽油、硬脂酸、異丙醇、松節(jié)油等，但最終效果仍然不理想。本組選擇的GS環(huán)保型固定染色套液，這些試劑都是無(wú)非苯無(wú)毒型，完全避免了二甲苯造成的人體傷害及環(huán)境污染。GS脫蠟劑，脫蠟完全，時(shí)間少。GS透明劑穿透組織能力強(qiáng)，處理組織觸感好，即使是長(zhǎng)時(shí)間浸泡組織標(biāo)本也不會(huì)引發(fā)收縮和硬化現(xiàn)象，不會(huì)脆化組織。本研究如圖1～4所示，圖2及圖4相對(duì)于圖1和圖3，其示片更為清晰，且所耗時(shí)間短，臨床診斷更明確。

GS脫水液能做到恰當(dāng)脫水，不會(huì)出現(xiàn)脫水不足或過(guò)度的問(wèn)題，可同時(shí)處理多個(gè)大小組織。GS環(huán)保套液無(wú)醛、無(wú)苯、不易揮發(fā)，生物降解難度低，不會(huì)造成環(huán)境污染[9]。其主要特點(diǎn)：（1）能輕易透過(guò)組織，節(jié)省脫水時(shí)間；（2）不會(huì)破壞組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，保持細(xì)胞膜完好；（3）在固定、脫水、脫脂和硬化方面表現(xiàn)良好，不會(huì)造成組織收縮過(guò)度、細(xì)胞空泡消失與核固縮小等問(wèn)題[10]；（4）保持了大體標(biāo)本的觸感，有助于有針對(duì)性的分離并切取組織塊，避免脂肪組織標(biāo)本出現(xiàn)粘滑感及粘稠性，能夠快速有效清潔[11-12]；（5）避免了組織抗原與蛋白質(zhì)DNA的破壞；（6）DNA和RNA保存完整，利于細(xì)胞顯示和生物學(xué)研究[12]；（7）廢液回收處理方便；（8）染色步驟簡(jiǎn)化，節(jié)省時(shí)間。相比傳統(tǒng)方法制片，GS套液環(huán)保效果令人滿意，適用于臨床病理診斷，避免了甲醛和二甲苯產(chǎn)生的負(fù)面影響，達(dá)到了實(shí)驗(yàn)室環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)，在病理技術(shù)工作中推廣應(yīng)用的價(jià)值巨大。

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（收稿日期：2014-07-14）