命案中接觸類(lèi)DNA檢材的提取及檢驗(yàn)

宋凱亮 張 健

（云浮市公安局 廣東 云浮 527300）

命案中接觸類(lèi)DNA檢材的提取及檢驗(yàn)

宋凱亮 張 健

（云浮市公安局 廣東 云浮 527300）

通過(guò)成功檢出兩宗命案中接觸類(lèi)DNA檢材的基因分型，探討在命案檢材中如何有效提取和檢驗(yàn)接觸類(lèi)DNA檢材，為案件訴訟提供有力的證據(jù)。

法醫(yī)物證學(xué) 命案 接觸類(lèi) DNA檢材 提取檢驗(yàn)

隨著DNA檢驗(yàn)技術(shù)的快速發(fā)展，對(duì)接觸類(lèi)DNA檢材的提取檢驗(yàn)越來(lái)越被現(xiàn)場(chǎng)勘查人員寄予厚望，在命案發(fā)生后，勘查人員更是希望通過(guò)接觸類(lèi)DNA檢材的檢驗(yàn)鎖定作案人以及作案過(guò)程。但是，接觸類(lèi)DNA檢材由于接觸面廣、DNA含量少、易被污染，發(fā)現(xiàn)及提取的難度很大，加之由于提取和檢驗(yàn)的方法不盡恰當(dāng)，導(dǎo)致命案中接觸類(lèi)DNA檢材的檢出率往往不盡如人意。

1 案例資料

1.1 簡(jiǎn)要案情

案例1：某年12月4日，鄧某某（男，49歲）用木棒打擊鄧某（男，41歲）的頭部致鄧某顱腦損傷而死亡，勘查人員提取現(xiàn)場(chǎng)木棒、鄧某某和鄧某血樣等檢材送檢。

案例2：某年11月28日，彭某某（男，21歲）將曾某某（女，9歲）的頭部按入盛滿水的塑料桶中致曾某機(jī)械性窒息死亡，勘查人員提取現(xiàn)場(chǎng)塑料桶、彭某和曾某血樣等檢材送檢。

1.2 DNA提取及檢驗(yàn)

案例1木棒長(zhǎng)86c m，直徑6c m，該木棒一端有可疑血跡（按常規(guī)DNA檢材提取檢驗(yàn)），對(duì)該木棒另一端（作案人抓握部位）用膠片反復(fù)按壓分區(qū)粘??；案例2塑料桶桶高33c m，桶口直徑34c m，桶口邊沿寬1.8c m，對(duì)桶口邊沿采用兩步擦拭法（即先用去離子水濕潤(rùn)棉簽并甩干多余水份后，輕輕擦拭可疑部位，然后再用一根干棉簽擦拭同一部位）分區(qū)提取。對(duì)上述木棒另一端（嫌疑人抓握部位）和塑料桶桶口邊沿提取的接觸類(lèi)DNA檢材使用案件專(zhuān)用磁珠法DNA提取試劑盒（長(zhǎng)春市博坤生物科技有限公司）提取檢材DNA，使用Power-Plex16TM試劑盒（Promega公司，美國(guó)）12.5ul體系，模板量4ul，在9700型PCR擴(kuò)增儀（AB公司，美國(guó)）上進(jìn)行擴(kuò)增，ABI—310型遺傳分析儀（AB公司，美國(guó)）檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，GeneMapperIDV3.2軟件分析檢驗(yàn)結(jié)果。

1.3 檢驗(yàn)結(jié)果

案例1木棒上可疑血跡與死者鄧某血樣的基因分型一致，木棒另一端（嫌疑人抓握部位）檢材獲得一男性基因分型，與作案人鄧某某血樣的基因分型一致；案例2塑料桶桶口邊沿檢材獲得一女性基因分型，與死者曾某某血樣的基因分型一致。

2 討論

兩宗命案的接觸類(lèi)DNA檢材，采用分區(qū)提取微量DNA的方法，采用小體系、增大模板量擴(kuò)增的方法，檢出完整DNA基因分型，為案例1鎖定嫌疑人、為案例2鎖定作案過(guò)程提供了有力的支持，發(fā)揮了DNA檢驗(yàn)技術(shù)特有的作用。從檢材的基因分型圖譜來(lái)看，等位基因擴(kuò)增平衡、峰值適中無(wú)雜峰，這說(shuō)明上述接觸類(lèi)DNA檢材的提取及檢驗(yàn)方法是得當(dāng)?shù)?。在命案中要想有效提取和檢驗(yàn)接觸類(lèi)DNA檢材，要在以下3個(gè)方面引起重視。

2.1 充分了解案情，準(zhǔn)確分析接觸類(lèi)DNA檢材提取的重點(diǎn)部位

有實(shí)驗(yàn)證明，人體只要接觸物體5秒，就可能有細(xì)胞遺留在物體表面。[1]兩宗命案的接觸類(lèi)DNA檢材送到實(shí)驗(yàn)室后，并沒(méi)有急于檢驗(yàn)，而是向勘查人員詳細(xì)了解案件發(fā)生經(jīng)過(guò)。案例1中的木棒，經(jīng)向勘查人員了解，嫌疑人手持木棒打擊死者頭部形成創(chuàng)口，而且木棒一端粘有可疑血跡，經(jīng)分析在木棒的另一端便是嫌疑人抓握的部位，由于該木棒表皮疏松，嫌疑人抓握過(guò)的部位出現(xiàn)表皮脫落的痕跡，故該表皮脫落的部位便是接觸類(lèi)DNA檢材提取的重點(diǎn)部位。案例2作案人供述為防止死者呼救，作案人從死者身后抓住死者頭發(fā)將死者的頭部按入盛滿水的塑料桶中致其死亡，經(jīng)過(guò)分析死者頸部與塑料桶桶口邊沿會(huì)有廣泛接觸，故桶口邊沿便是接觸類(lèi)DNA檢材提取的重點(diǎn)部位。案例1木棒上表面相對(duì)粗糙，采用膠片反復(fù)按壓分區(qū)粘取，案例2塑料桶桶口邊沿表面相對(duì)光滑，采用兩步擦拭法分區(qū)擦取，結(jié)果證明采用這兩種方法提取DNA是有效的。需要說(shuō)明的是，分區(qū)提取時(shí)區(qū)域劃分要適當(dāng)，區(qū)域劃分過(guò)小會(huì)導(dǎo)致單位面積提取的DNA量太少而檢不出有效基因分型，區(qū)域劃分過(guò)大有可能提取到多人的DNA致檢出混合基因分型而達(dá)不到認(rèn)定的目的。兩宗命案正是充分了解案情，準(zhǔn)確分析接觸類(lèi)DNA檢材的接觸部位，并采用相應(yīng)的提取方法才提取到有效的DNA，為下一步檢出DNA基因分型打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

2.2 具體檢材具體分析，根據(jù)檢材情況采用相應(yīng)的檢驗(yàn)方法

Chelex-100法操作簡(jiǎn)單快速，是常規(guī)檢材（如血跡等）檢驗(yàn)的首選方法，但該方法不能有效去除檢材中的雜質(zhì)以及檢材中含有的PCR抑制物，會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增時(shí)容易出現(xiàn)等位基因擴(kuò)增不平衡、甚至大片段等位基因缺失的現(xiàn)象，不易獲得滿意的基因分型，而接觸類(lèi)DNA檢材在提取時(shí)不可避免地會(huì)連同客體表面的雜質(zhì)以及客體表面含有的PCR抑制物一并提取，故該法不太適宜接觸類(lèi)DNA檢材中微量DNA的提取。磁珠法是在高濃度的焦性鹽的存在的條件下，磁珠特異性地吸附檢材中的DNA，吸附DNA的磁珠經(jīng)過(guò)反復(fù)漂洗可將檢材中的雜質(zhì)以及檢材中含有的PCR抑制物有效去除，漂洗后的磁珠在去離子水的條件下又可以把DNA釋放出來(lái)，此種方法提取到的DNA比較純，適合接觸類(lèi)DNA檢材中微量DNA的提取。從案例1木棒另一端和案例2中的塑料桶桶口邊沿的接觸類(lèi)DNA檢材的基因分型圖譜來(lái)看，等位基因擴(kuò)增平衡、未出現(xiàn)小片段優(yōu)勢(shì)擴(kuò)增的情況、峰值適中無(wú)雜峰，說(shuō)明用磁珠法提取接觸類(lèi)DNA檢材中微量DNA的方法是得當(dāng)?shù)摹?/p>

2.3 嚴(yán)防污染，提取檢驗(yàn)過(guò)程要做好相應(yīng)的質(zhì)控措施

DNA污染（DNA Contamination)是指生物物證檢材在提取或檢驗(yàn)過(guò)程中混有含DNA的外源生物物質(zhì)，造成DNA檢驗(yàn)的結(jié)果發(fā)生改變。[2]由于接觸類(lèi)DNA檢材中的所含DNA是微量的，極易被污染，所以提取及檢驗(yàn)接觸類(lèi)DNA檢材必須要嚴(yán)防污染。防止污染要從現(xiàn)場(chǎng)開(kāi)始，隨著DNA知識(shí)的普及，現(xiàn)場(chǎng)勘查人員防止污染的意識(shí)在不斷增強(qiáng)，勘查人員在提取接觸類(lèi)DNA檢材時(shí)能夠做到戴頭套、戴手套、戴腳套和戴口罩，防止接觸類(lèi)DNA檢材被污染。檢驗(yàn)人員在檢驗(yàn)接觸類(lèi)DNA檢材時(shí)也會(huì)采取相應(yīng)的質(zhì)控措施，檢驗(yàn)時(shí)穿實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用的工作服、工作鞋，戴一次性手套、戴頭套和戴口罩，提取檢材時(shí)采用一次性用具，在擴(kuò)增及電泳過(guò)程中均設(shè)置空白對(duì)照，以確定是否存在污染，獲得基因分型結(jié)果后認(rèn)真分析，與勘查人員和檢驗(yàn)人員的基因分型進(jìn)行比對(duì)，確定是否存在勘查人員和檢驗(yàn)人員污染的可能。兩宗命案的接觸類(lèi)DNA檢材檢出的DNA基因分型非常純，而且空白對(duì)照結(jié)果正常，經(jīng)比對(duì)不存在勘查人員和檢驗(yàn)人員污染的可能，結(jié)果可靠，故兩宗命案的接觸類(lèi)DNA檢材的檢驗(yàn)結(jié)果成功鎖定作案人以及作案過(guò)程，并為案件訴訟提供了有力的證據(jù)。

[1]鄭秀芬．法醫(yī)DNA分析[M]．北京：中國(guó)人民公安大學(xué)出版社，2003：332-334．

[2]陳松．法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室的DNA污染和防范分析[J]．刑事技術(shù)，2007，（3）：16-20．

（責(zé)任編輯：于 萍）

DF765．2

A

2095-7939(2015)04-0074-02

2015-01-20

宋凱亮（1975-），男，山西靈石人，廣東省云浮市公安局主檢法醫(yī)師，學(xué)士，主要從事法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究。