四項(xiàng)免疫組化標(biāo)志物在診斷甲狀腺乳頭狀癌中的臨床探討

陳桂軍 董 征

（1 錦州市衛(wèi)生學(xué)校，遼寧 錦州 121000；2 錦州市中心醫(yī)院，遼寧 錦州 121000）

甲狀腺乳頭狀癌是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤，其在甲狀腺癌發(fā)生率中占60%～70%[1]。甲狀腺乳頭狀癌的臨床診斷主要是依靠形態(tài)學(xué)特征，如具有毛玻璃樣核、核內(nèi)有包涵體等，但是一些甲狀腺的良性病變，如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、濾泡性甲狀腺腺瘤、橋本甲狀腺炎等均可能伴有不同程度的乳頭狀增生或者毛玻璃樣核等病變，給甲狀腺乳頭狀癌診斷帶來(lái)較大的難度[2]。本研究通過(guò)對(duì)錦州市中心醫(yī)院甲狀腺乳頭狀癌患者臨床資料進(jìn)行分析，擬探討四項(xiàng)免疫組化標(biāo)志物在診斷甲狀腺乳頭狀癌中的應(yīng)用效果，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取錦州市中心醫(yī)院2010年2月至2014年3月收治的甲狀腺乳頭狀癌患者50例作為觀察組進(jìn)行分析，男性7例，女性43例，年齡42～61歲，年齡（50.3±9.5）歲，50例患者均有不同程度的頸部腫大臨床表現(xiàn)，病灶位置：左側(cè)23例，右側(cè)22例，峽部3例，雙側(cè)2例。選取同期收治的良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者200例作為對(duì)照組，男性20例，女性180例，年齡43～62歲，年齡（51.7±8.1）歲，兩組觀察對(duì)象一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。

1.2 方法：兩組研究對(duì)象采集的標(biāo)本通過(guò)甲醛固定，通過(guò)乙醇脫水和石蠟包埋，進(jìn)行連續(xù)切片，切片厚度為4 μm，進(jìn)行HE染色，通過(guò)2名有豐富經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲獨(dú)立性評(píng)價(jià)。免疫組化染色通過(guò)S-P法進(jìn)行，參照定制的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行嚴(yán)格的操作。分別選擇Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu抗體均是鼠抗人的單克隆抗體。通過(guò)奧林巴斯光學(xué)顯微鏡進(jìn)行結(jié)果判定。TTF-1染色要在細(xì)胞核進(jìn)行定位，HER-2/neu在細(xì)胞質(zhì)或者細(xì)胞膜進(jìn)行定位。PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。每張病理學(xué)切片隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，通過(guò)半定量分析的方法對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞率進(jìn)行計(jì)算。陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：Ki67陽(yáng)性為細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒出現(xiàn)，陽(yáng)性細(xì)胞依據(jù)比例情況進(jìn)行分組，（-）：陽(yáng)性細(xì)胞比例＜1%；（+）：陽(yáng)性細(xì)胞比例1%～3%；（++）：陽(yáng)性細(xì)胞比例3.1%～5.0%；（+++）：陽(yáng)性細(xì)胞比例＞5.0%。對(duì)TTF-1、HBME-1和HER-2/neu進(jìn)行免疫組化評(píng)分。免疫組化評(píng)分中陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：0分：陽(yáng)性細(xì)胞比例＜10%，1分：陽(yáng)性細(xì)胞比例為10%～25%；2分：陽(yáng)性細(xì)胞比例（25%～50%），3分：陽(yáng)性細(xì)胞比例50%～75%，4分：陽(yáng)性細(xì)胞比例＞75%。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 觀察兩組研究對(duì)象Ki67、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1（TTF-1）、人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物（HBME-1）和HER-2/neu陽(yáng)性率情況。

1.3.2 觀察Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu診斷甲狀腺乳頭狀癌的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)和陰性預(yù)測(cè)的情況：敏感性又稱(chēng)真陽(yáng)性率，即實(shí)際甲狀腺乳頭狀癌而按該篩檢實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)被正確判斷為甲狀腺乳頭狀癌的百分比，它反映篩檢實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌的能力。特異性又稱(chēng)真陰性率，即實(shí)際無(wú)甲狀腺乳頭狀癌按該診斷標(biāo)準(zhǔn)被正確地判斷為無(wú)病的百分比。它反映篩檢實(shí)驗(yàn)確定非甲狀腺乳頭狀癌的能力。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值指篩檢實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性者不患目標(biāo)甲狀腺乳頭狀癌的可能性。陰性預(yù)測(cè)值指篩檢實(shí)驗(yàn)陰性者患甲狀腺乳頭狀癌的可能性。敏感性=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）；特異性=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陽(yáng)性）；陰性預(yù)測(cè)值=真陰性/（真陰性+假陰性）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)，針對(duì)計(jì)數(shù)資料通過(guò)百分比表示，采用卡方檢驗(yàn)分析，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組研究對(duì)象Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu陽(yáng)性率情況：見(jiàn)表1。觀察組Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，P＜0.05，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩組研究對(duì)象Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu陽(yáng)性率情況

2.2 Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu診斷甲狀腺乳頭狀癌的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)和陰性預(yù)測(cè)的情況：見(jiàn)表2。HER-2/neu診斷甲狀腺乳頭狀癌的敏感性最高92%，TTF-1特異性最高96%。

表2 Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu診斷甲狀腺乳頭狀癌的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)和陰性預(yù)測(cè)的情況

3 討 論

甲狀腺乳頭狀癌作為甲狀腺最為常見(jiàn)的惡性腫瘤，其主要特征是具有乳頭狀結(jié)構(gòu)和特征性的細(xì)胞核，其臨床病例特征往往不是十分明顯[3]。結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是臨床常見(jiàn)的增生性疾病，其往往伴有乳頭狀增生，并且當(dāng)乳頭狀增生復(fù)雜、細(xì)胞層次較多、細(xì)胞核具有一定的異型性，進(jìn)而和乳頭狀癌十分相似，影響了臨床診斷的準(zhǔn)確率[4]。Ki67是一種和細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白質(zhì)，其異常表達(dá)可以覆蓋除了G0期以外的細(xì)胞各個(gè)增殖周期，在G1晚期、S期、G2期和M期持續(xù)性的存在，并且隨著細(xì)胞周期的不斷發(fā)展，抗原的表達(dá)明顯增高，一直到G2期和M期達(dá)到表達(dá)的高峰，對(duì)于細(xì)胞增殖的活性可以明顯的反映[5]。另外Ki67在低分化腺癌組織中的表達(dá)往往高于中、高分化腺癌，其可以客觀的反映腫瘤的性質(zhì)和惡性程度，也可以應(yīng)用細(xì)胞增殖的活性、周期和生長(zhǎng)方式等探討，是腫瘤診斷和預(yù)后判定的重要生物標(biāo)志物[6]。TTF-1是調(diào)控基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子之一，其主要在甲狀腺濾泡、甲狀旁腺等組織器官表達(dá)，并且參與甲狀腺的分化發(fā)育和功能的維持。TTF-1和甲狀腺癌是互為因果的關(guān)系，甲狀腺癌對(duì)TTF-1表達(dá)和活性造成影響，同時(shí)TTF-1突變和活性降低又會(huì)促使甲狀腺細(xì)胞分化、成熟受到損傷，誘發(fā)惡性病變[7]。甲狀腺癌組織中存在著TTF-1表達(dá)量的異常，同時(shí)也存在著基因的突變[8]。TTF-1大多數(shù)定位在細(xì)胞核內(nèi)，也有少量定位在細(xì)胞質(zhì)，當(dāng)出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)型TTF-1時(shí)提示甲狀腺細(xì)胞可能出現(xiàn)了惡化，可能由于TTF-1蛋白在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的過(guò)量表達(dá)，且累及TTF-1蛋白進(jìn)入細(xì)胞核信號(hào)肽序列。HER-2/neu位于人體染色體的17q-12-21.3，是人體重要的細(xì)胞癌基因，HER-2/neu編碼的產(chǎn)物和表皮生長(zhǎng)因子受體具有一半是同源的，參與細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)，是酪氨酸激酶受體的一種。HER-2/neu正常狀態(tài)下處于非激活的狀態(tài)，其通過(guò)影響細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)參與到細(xì)胞的增殖、分化和凋亡過(guò)程中，進(jìn)而促使細(xì)胞惡變。Her-2/neu蛋白由胞外的配體結(jié)合區(qū)、單鏈跨膜區(qū)及胞內(nèi)的蛋白酪氨酸激酶區(qū)三部分組成，由于目前尚未發(fā)現(xiàn)能與Her-2/neu蛋白直接結(jié)合的配體，其主要通過(guò)與家族中其他成員包括EGFR（HERl/erbBI），HER3/erbB3[9]。HBME-1是間皮細(xì)胞表面微絨毛的抗原，其是酸性氨基酸多聚糖蛋白，主要成分是透明質(zhì)酸。為單克隆抗體，是間皮細(xì)胞微絨毛表面特異性標(biāo)志物，在腫瘤血管的形成、腫瘤的生長(zhǎng)以及腫瘤的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。有資料顯示，HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌中呈現(xiàn)較高的表達(dá)，然而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、乳頭狀的良性病變則表現(xiàn)為陰性[10]。本研究通過(guò)分析錦州市中心醫(yī)院2010年2月至2014年3月收治的甲狀腺乳頭狀癌患者50例臨床資料，作為觀察組，選取同期良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者200例作為對(duì)照組。結(jié)果表明，觀察組Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組， HER-2/neu診斷甲狀腺乳頭狀癌的敏感性最高92%，TTF-1特異性最高96%。提示HER-2/neu聯(lián)合TTF-1可能明顯的提高診斷甲狀腺乳頭狀癌準(zhǔn)確率，值得臨床推廣應(yīng)用。

[1]婁欣,張全武,趙紅梅,等.甲狀腺乳頭狀癌與乳頭狀增生的免疫組化特征[J].腫瘤基礎(chǔ)與臨床,2011,24(2)：103-105.

[2]Prasad ML,Huang Y,Pellegata NS,et al.Hashimotos thyroiditis with papillary thyroid carcinoma(PTC)-Like nuclear alterations express molecular markers of PTC[J].Histopathology,2004,45(1)：39-46.

[3]楊曉斌,歐陵斌,肖古月.細(xì)針吸取結(jié)合液基細(xì)胞學(xué)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的免疫組化分析[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2011,21(27)：3380-3382.

[4]Dipasqual M,Rothstein JL,Palazzo JP.Pathologic features of Hashimotos-associated papillary thyroid carcinomas[J].Hum Pathol,2001,32(1)：24-30.

[5]李天一,吳鋼,蔡端.四項(xiàng)免疫組化標(biāo)志物在診斷甲狀腺乳頭狀癌中的臨床意義[J].上海醫(yī)藥,2014,35(10)：24-27.

[6]Liu LH,Bakhos R,Wojcik EM.Concomitant thyroid carcinoma and Hoshimotos thyroiditis[J].Semin Diagn Pathol,2001,18(2)：99-103.

[7]楊玉清,姚宏.CK19 Galectin-3 HBME-1 S-100及Ki67在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)的意義[J].中國(guó)藥物與臨床,2012,12(9)：1144-1146.

[8]Bruwer M,Schmid K W,Senninger N,et al.Immunohisto-chemical expression of P53 and oncogenes in ulcerative colitis-associated color-ectal carcinoma[J].World J Surg,2002,26(3)：390-396.

[9]Papale F,Cafiero G,Grimaldi A,et al.Galectin-3 expression in thyroid fine needle cytology (t-FNAC) uncertain cases：validation of molecular markers and technology innovation[J].J Cell Physiol,2013,228(5)：968-974.

[10]Kazaure HS,Roman SA,Sosa JA.Aggressive variants of papillary thyroid cancer： incidence, characteristics and predictors of survival among 43,738 patients[J].Ann Surg Oncol, 2012,19(6)：1874-1880.