鹽酸芐絲肼化學(xué)穩(wěn)定性影響因素的研究

馬桂芝　李文英　王娟　賀鑫韜　馬文娜　滕亮

[摘要] 目的 考察影響鹽酸芐絲肼穩(wěn)定性的因素。 方法 建立用于測(cè)定鹽酸芐絲肼含量的高效液相色譜法。在此基礎(chǔ)上，考察溶劑pH、光線、氧氣、溫度、濕度對(duì)鹽酸芐絲肼穩(wěn)定性的影響。 結(jié)果 所建立的含量測(cè)定方法符合方法學(xué)要求?？疾旖Y(jié)果表明，溶劑的pH越大，鹽酸芐絲肼越不穩(wěn)定；光線對(duì)鹽酸芐絲肼穩(wěn)定性有影響，需遮光保存；在氧氣的作用下，鹽酸芐絲肼會(huì)發(fā)生氧化現(xiàn)象，加入相對(duì)于藥物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)25%的維生素C后，12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好；溫度與濕度的變化對(duì)鹽酸芐絲肼化學(xué)穩(wěn)定性有影響。 結(jié)論 通過(guò)控制外部條件，有望改善鹽酸芐絲肼的化學(xué)穩(wěn)定性。

[關(guān)鍵詞] 鹽酸芐絲肼；高效液相色譜法；化學(xué)穩(wěn)定性；影響因素

[中圖分類號(hào)] R971.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）12（b）-0004-05

帕金森?。≒arkinson's disease，PD）又稱為震顫麻痹，是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)錐體外系功能障礙的慢性進(jìn)行性疾病[1]。美國(guó)神經(jīng)協(xié)會(huì)對(duì)各種抗PD藥物進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果表明復(fù)方左旋多巴制劑（美多芭等）是所有PD藥物治療中最有效的藥物[2-3]。但是該片劑使用方法繁瑣，給藥頻率高，中老年患者的用藥順應(yīng)性差，同時(shí)左旋多巴的吸收主要發(fā)生在胃和小腸近端（主要在十二指腸和空腸部位）[4]，普通左旋多巴片劑在胃內(nèi)停留時(shí)間短，吸收量有限[5]，因此許多研究者都致力于復(fù)方左旋多巴緩釋制劑的研究[6-9]。因此課題組結(jié)合前期研究結(jié)果[10-11]，嘗試采用復(fù)合制劑技術(shù)將普通片研發(fā)成既可保證藥物的療效又能增加患者用藥順應(yīng)性的微囊胃漂浮片[12-14]，以滿足臨床用藥需求。該微囊胃漂浮片是由左旋多巴的微囊與鹽酸芐絲肼的固體分散體作為中間體，與適宜輔料壓制而成的片劑。

根據(jù)課題設(shè)計(jì)需要，制備的緩釋制劑應(yīng)滿足12 h連續(xù)釋放的要求，但是預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明鹽酸芐絲肼在稀鹽酸（9→1000 mL）中只能保證8 h內(nèi)穩(wěn)定。因此在進(jìn)行芐絲固分體制備工藝篩選之前，先考察了鹽酸芐絲肼穩(wěn)定性及其影響因素，為后續(xù)鹽酸芐絲肼固體分散體的處方篩選奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

數(shù)顯恒速攪拌器（上海梅穎浦儀器儀表制造有限公司，S312-60型）；高效液相色譜儀（日本島津，LC-20A型）；真空干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司，DZF-6090型）；電子天平（北京賽多利斯天平有限公司，BS110S型）。

1.2 試藥

鹽酸芐絲肼（湖北中和化工，批號(hào)：100511）；鹽酸芐絲肼對(duì)照品（Sigma-Aldrich，批號(hào)：SL09032）；抗壞血酸（上海山浦化工有限公司，批號(hào)：20100504）；無(wú)水乙醇（安徽安特生物化學(xué)有限公司，批號(hào)：0808073601）；聚維酮（PVP，新疆華世丹藥業(yè)，批號(hào)：060614）；鹽酸（烏魯木齊天岳化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：070917）；氫氧化鈉（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20090909）；司盤(pán)-80（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)：060907）。液狀石蠟（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào)：090703）；乙酸乙酯（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20100705）；鄰苯二甲酸二乙酯（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20101110）。十二烷基硫酸鈉（上海市四赫維化工有限公司，批號(hào)：20080415）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，其中一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程以lgC對(duì)t進(jìn)行直線回歸獲得。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 方法與結(jié)果

2.1 固體分散體中鹽酸芐絲肼的含量測(cè)定方法

2.1.1 測(cè)定波長(zhǎng)的確定 以稀鹽酸（9→1000 mL）為介質(zhì)配制0.1 mg/mL的鹽酸芐絲肼對(duì)照品溶液。精密量取鹽酸芐絲肼對(duì)照品溶液3 mL置于10 mL量瓶中，加稀鹽酸（9→1000 mL）至刻度，搖勻，在200～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示該溶液在220 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

2.1.2 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：三氟乙酸-甲醇-水=1∶20∶1000；流速：0.5 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30℃。在上述條件下，鹽酸芐絲肼達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，以鹽酸芐絲肼峰計(jì)算柱效，其理論塔板數(shù)（n）均在5000以上，取陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣，結(jié)果表明，陰性對(duì)照在主藥峰位置處沒(méi)有相應(yīng)峰出現(xiàn)。陽(yáng)性對(duì)照品、供試品和陰性樣品的高效液相色譜圖分別見(jiàn)圖1。

2.1.3 線性關(guān)系考察 精密稱取鹽酸芐絲肼標(biāo)準(zhǔn)品0.0125 g，用稀鹽酸（9→1000 mL）定容至50 mL容量瓶制成儲(chǔ)備液，分別精密吸取儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4 mL儲(chǔ)備液置于10 mL量瓶中，稀鹽酸（9→1000 mL）定容，搖勻。用高效液相色譜法于220 nm處測(cè)定各溶液的峰面積（A），以峰面積（A）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸，鹽酸芐絲肼回歸方程為A = 1.139 89×10-5C+0.7215，r = 0.9996（n = 8），表明吸光度與濃度在2.448～58.752 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果顯示鹽酸芐絲肼峰面積的RSD為1.29%。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品溶液分別在0、2、4、6、8 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果顯示鹽酸芐絲肼峰面積的RSD為1.04%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：該樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果顯示鹽酸芐絲肼峰面積的RSD為1.05%。

2.1.7 加樣回收率試驗(yàn) 分取已知含量供試品9份，分別精密加入高、中、低質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液各3份，按色譜條件，通過(guò)液相色譜儀測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果顯示鹽酸芐絲肼的平均回收率為99.66%，RSD為0.79%。見(jiàn)表1。

2.2 鹽酸芐絲肼化學(xué)穩(wěn)定性的影響因素

2.2.1 溶劑pH對(duì)穩(wěn)定性的影響 用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)制不同pH的水溶液作為溶劑溶解等量鹽酸芐絲肼[15-16]，考察不同pH下鹽酸芐絲肼含量隨時(shí)間變化的變化，結(jié)果見(jiàn)表2。數(shù)據(jù)處理結(jié)果表明不同pH下鹽酸芐絲肼含量變化規(guī)律可用一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程擬合。結(jié)果表明隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)，鹽酸芐絲肼含量增均呈降低趨勢(shì)。溶劑的pH越大，鹽酸芐絲肼越不穩(wěn)定，且由降解速率常數(shù)大可見(jiàn)pH對(duì)其化學(xué)穩(wěn)定性的影響較為顯著。而稀鹽酸（9→1000 mL）的pH為1.2，可以提供鹽酸芐絲肼較穩(wěn)定的pH環(huán)境。

2.2.2 光線對(duì)穩(wěn)定性的影響 用稀鹽酸（9→1000 mL）溶解2份等量鹽酸芐絲肼，1份在遮光條件下保存，2份在未遮光的條件下保存，平行實(shí)驗(yàn)3次，考察鹽酸芐絲肼含量隨時(shí)間的變化，結(jié)果見(jiàn)表3。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明當(dāng)放置時(shí)間達(dá)到12 h時(shí)兩種條件下的鹽酸芐絲肼含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。速率方程也表明光線對(duì)鹽酸芐絲肼穩(wěn)定有影響，隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)，鹽酸芐絲肼含量均呈降低趨勢(shì)，但是未遮光組鹽酸芐絲肼含量降低的速度更快。以上結(jié)果提示遮光保存有利于增加鹽酸芐絲肼的穩(wěn)定性。

2.2.3 氧氣對(duì)芐絲肼穩(wěn)定性的影響 稀鹽酸（9→1000 mL）溶解3份等量鹽酸芐絲肼，其中1份空白，1份加入相對(duì)于藥物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的抗氧劑抗壞血酸（維生素C），1份加入25%的維生素C，平行實(shí)驗(yàn)3次，考察鹽酸芐絲肼含量隨時(shí)間變化的變化，結(jié)果見(jiàn)表4。加入相對(duì)于藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%維生素C，12 h后與不加抗氧劑的空白溶液相比，鹽酸芐絲肼平均含量有提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。加25%維生素C，10、12 h后與不加抗氧劑的空白溶液相比，鹽酸芐絲肼平均含量明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。速率方程也表明氧氣含量對(duì)鹽酸芐絲肼穩(wěn)定有影響，隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)，鹽酸芐絲肼含量均呈降低趨勢(shì)，但是加25%維生素C的鹽酸芐絲肼含量降低的速度最慢。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，鹽酸芐絲肼會(huì)發(fā)生氧化現(xiàn)象，加入了25%抗氧劑后維生素C，12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4 溫度對(duì)穩(wěn)定性的影響 分別將等量鹽酸芐絲肼原藥粉放在60、40、25℃ 3個(gè)溫度環(huán)境下遮光干燥保存10 d，于第5、10天取樣溶于等量稀鹽酸（9→1000 mL）中測(cè)其百分含量變化。見(jiàn)表5。結(jié)果顯示溫度的變化對(duì)鹽酸芐絲肼有影響，溫度越高穩(wěn)定性越差。

2.2.5 濕度對(duì)穩(wěn)定性的影響 將等量鹽酸芐絲肼原藥粉分別放在室溫下，相對(duì)濕度為75%、60%、0%的環(huán)境下遮光保存10 d，于第5、10天取樣溶于等量稀鹽酸（9→1000 mL）測(cè)其百分含量。見(jiàn)表6。結(jié)果顯示鹽酸芐絲肼對(duì)濕度很敏感，在干燥環(huán)境下較穩(wěn)定。

3 討論

鹽酸芐絲肼為脫羧酶抑制藥，易溶于水，微溶于乙醇，不溶于丙酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)決定該化合物有可能對(duì)空氣、光線、溫度、濕度等敏感。因此本研究選擇其標(biāo)示百分含量為穩(wěn)定性考察指標(biāo)，建立了體外測(cè)定芐絲肼含量的高效液相色譜法，方法學(xué)考察結(jié)果表明該方法符合專屬、準(zhǔn)確、靈敏、精密的要求，可用于考察不同影響因素對(duì)芐絲肼化學(xué)穩(wěn)定性的影響。

穩(wěn)定性是藥物的基本屬性之一。藥物的化學(xué)穩(wěn)定性是指藥物由于水解、氧化等化學(xué)降解反應(yīng)，使藥物含量（或效價(jià)）、色澤產(chǎn)生變化。采用合適的分析方法，考察不同條件（如溫度、濕度、光線等）下藥品主要質(zhì)量指標(biāo)隨時(shí)間的變化情況，為藥物制劑的處方設(shè)計(jì)提供依據(jù)，是藥物制劑處方前期研究的重要內(nèi)容。因此本研究在前期預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上結(jié)合制劑的設(shè)計(jì)要求（所設(shè)計(jì)的漂浮制劑要求在胃液中可持續(xù)漂浮12 h），考察了溶劑pH、光線、氧氣、溫度、濕度在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)鹽酸芐絲肼穩(wěn)定性的影響。

研究結(jié)果提示：①溶劑的pH越大，鹽酸芐絲肼越不穩(wěn)定，說(shuō)明將鹽酸芐絲肼制備成胃內(nèi)漂浮片對(duì)其化學(xué)穩(wěn)定性影響較小。②光線對(duì)鹽酸芐絲肼穩(wěn)定性有影響，提示在制備鹽酸芐絲肼固體分散體的過(guò)程中需要避光，同時(shí)該漂浮片需遮光保存。③在氧氣的作用下，鹽酸芐絲肼會(huì)發(fā)生氧化現(xiàn)象，加入了25%抗氧劑維生素C后，12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，提示在固體分散體的處方優(yōu)選過(guò)程中需要考慮引入抗氧劑以增加制劑的化學(xué)穩(wěn)定性。④溫度的變化對(duì)鹽酸芐絲肼有一定影響。⑤濕度的變化會(huì)造成鹽酸芐絲肼化學(xué)穩(wěn)定性的顯著改變，這可能是因?yàn)辂}酸芐絲肼為水溶性化合物，具有較強(qiáng)的吸水性，吸水后液層中的鹽酸芐絲肼極易發(fā)生化學(xué)改變。對(duì)各影響因素的影響程度進(jìn)行初步分析，可認(rèn)為環(huán)境濕度、溶液pH對(duì)鹽酸芐絲肼的化學(xué)穩(wěn)定性影響較為顯著，其次為氧氣的影響，影響較小的因素為光照與環(huán)境溫度，因此在后續(xù)固體分散體處方設(shè)計(jì)時(shí)尤其要關(guān)注影響較為顯著的因素。

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（收稿日期：2014-09-07 本文編輯：衛(wèi) 軻）