硫化氫在低剪切應(yīng)力導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞自噬障礙中的作用

唐　蕙，唐志晗，任　重，彭　娟，危當(dāng)恒，任曉晴，肖衛(wèi)晉，劉錄山，姜志勝(南華大學(xué)心血管疾病研究所，動(dòng)脈硬化學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南衡陽(yáng)421001)

硫化氫在低剪切應(yīng)力導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞自噬障礙中的作用

唐蕙，唐志晗，任重，彭娟，危當(dāng)恒，任曉晴，肖衛(wèi)晉，劉錄山，姜志勝△
(南華大學(xué)心血管疾病研究所，動(dòng)脈硬化學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南衡陽(yáng)421001)

目的:探討硫化氫在低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)自噬障礙中的作用。方法: HUVECs經(jīng)培養(yǎng)傳代分為3組:對(duì)照組、低剪切應(yīng)力組(5 dyn/cm2)和正常剪切應(yīng)力組(15 dyn/cm2)。在平板流動(dòng)腔上對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行剪切應(yīng)力處理，Western blot檢測(cè)CSE蛋白水平，RT-PCR檢測(cè)CSE的mRNA含量，熒光顯微鏡MDC染色觀察自噬表泡，免疫熒光檢測(cè)LC3表達(dá)，Western blot檢測(cè)Beclin1LC3p62蛋白水平，以評(píng)估不同剪切應(yīng)力下，誘導(dǎo)HUVECs自噬障礙過(guò)程中內(nèi)源性H2S生成的變化。接下來(lái)用CSE干擾siRNA及CSE過(guò)表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HUVECs后，再分別用5/15 dyne/cm2處理1 h，測(cè)自噬表達(dá)情況。結(jié)果: WB結(jié)果顯示，與正常剪切應(yīng)力組相比，低剪切應(yīng)力組CSE表達(dá)明顯減少。Beclin1及LC3表達(dá)減少，p62表達(dá)增高，免疫熒光結(jié)果顯示低剪切應(yīng)力組LC3表達(dá)減少。提示低剪切應(yīng)力組自噬障礙。結(jié)論:低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞存在自噬障礙，其與CSE表達(dá)降低相關(guān)。

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