布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的影響

王 燁 司立洲 崔佳賓 張 楠 賀天遙 孫理婷

(佳木斯市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154002)

布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的影響

王 燁 司立洲 崔佳賓 張 楠 賀天遙 孫理婷

(佳木斯市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154002)

目的 觀察布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎(UC)大鼠腸道菌群和腸組織Toll樣受體(TLR)4及核因子(NF)-кB激活的影響。方法 采用硫酸葡聚糖鈉加乙酸復(fù)合方法制作UC大鼠模型，抽取40只大鼠為研究對(duì)象，隨機(jī)分為A組和B組，每組20只大鼠，A組單純接受布拉氏酵母菌散劑治療，B組大鼠接受布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪治療。結(jié)果 B組大鼠腸組織中TLR4與NF-κB p65的陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，且顯著低于A組(P<0.05)。結(jié)論 布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪可有效調(diào)節(jié)UC模型大鼠腸道菌群，并抑制腸組織TLR4、NF-κB p65的激活。

布拉氏酵母菌散劑；美沙拉嗪；潰瘍性結(jié)腸炎；腸道菌群

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)屬于一種病因機(jī)制還不明確的結(jié)腸慢性非特異性炎癥疾病，較難治愈〔1〕。傳統(tǒng)的類固醇皮質(zhì)激素、柳氮磺胺嘧啶等具有一定的臨床療效，但還不能夠達(dá)到理想的治療效果。本組試驗(yàn)觀察布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪UC模型大鼠腸道菌群和腸組織Toll樣受體(TLR)4及核因子(NF)-κB激活情況的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 取佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的清潔級(jí)40只成年SD大鼠為研究對(duì)象，將其隨機(jī)分為A組和B組，每組20只，雌雄各半。在A組中，雌鼠的體重為190～248 g，雄鼠的體重為301～430 g；在B組中，雌鼠的體重為191～249 g，雄鼠的體重為302～428 g。將40只大鼠放置于安靜的房間中，房間的面積約42 m2，室溫19℃～25℃，相對(duì)濕度60%～80%。將40只大鼠分別裝在10只等籠子里，定期清洗籠具和開窗通風(fēng)，同時(shí)每周對(duì)籠具和房間進(jìn)行常規(guī)消毒。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法 采用硫酸葡聚糖鈉加乙酸復(fù)合方法制作UC大鼠模型。A組大鼠單純接受布拉氏酵母菌散劑(saccharomyces bou-lardii，SB，億活)治療，將800 mg/kg的布拉氏酵母菌散溶于1 ml 生理鹽水中，灌胃給藥。在此基礎(chǔ)上，給予B組大鼠美沙拉嗪(惠迪)治療，每晚 1 次保留灌腸〔2〕。

1.2.2 檢測(cè)方法

1.2.2.1 腸道菌群檢測(cè) 處死大鼠后，將新鮮的糞便從肛門中擠出，并裝于無菌容器內(nèi)，到指定地點(diǎn)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，最后對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2.2 TLR4與NF-κB p65檢測(cè) 取出大鼠病變腸組織約3塊，每塊約0.6 m2，5%甲醛固定24 h后，包埋切片，行免疫組化染色。陽性細(xì)胞主要呈現(xiàn)黃棕色，TLR4陽性細(xì)胞為胞膜和胞質(zhì)著色，NF-κB p65陽性細(xì)胞主要是胞核和胞質(zhì)著色。每個(gè)切片中，選擇5個(gè)視野，要求其分布的區(qū)域較多，并在高倍鏡下計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，將平均值作為每張切片的陽性細(xì)胞數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS15.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組大鼠腸道菌群檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 造模后，大腸埃希菌的數(shù)量為(26.2±2.4)株，明顯多于造模前的(12.3±1.1)株(t=9.466，P=0.000)；但治療后，兩組大鼠中革蘭陽性桿菌的數(shù)量明顯增加，A組為(33.34±5.1)株，B組為(21.9±3.3)株，兩組之間比較差異顯著(t=6.249，P=0.013)。

2.2 兩組大腸組織TLR4與NF-κB p65陽性細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較 造模后，B組TLR4陽性細(xì)胞表達(dá)上升(29.10±7.27)，與A組(13.46±7.15)比較差異顯著(P<0.05)；且B組的NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá)顯著升高(28.66±5.61)，與A組(15.00±5.07)比較差異顯著(P<0.05)。

3 討 論

腸道菌群參與了UC的發(fā)病，有研究學(xué)者對(duì)部分炎癥性腸病患者的腸黏膜細(xì)菌進(jìn)行全面的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與普通患者比較，其腸黏膜細(xì)菌的濃度較高〔3〕。在UC形成過程中，腸道細(xì)菌起著關(guān)鍵性的作用。通過對(duì)UC患者進(jìn)行益生菌治療，發(fā)現(xiàn)患者的臨床癥狀和病理均得到有效的改善〔4〕。在本研究中，造模后腸內(nèi)菌群發(fā)生病變化，其中大腸埃希菌的數(shù)量不斷增加，并成為腸內(nèi)致病菌的主要條件之一，并反復(fù)發(fā)作腸道炎癥，其遷延的面積越來越大。通過給予布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪治療，大腸埃希菌的數(shù)量不斷減少，顯然在抑制腸道炎方面發(fā)揮著重要的作用〔1，2〕。

Aldemir等〔5〕研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于腸道炎癥而言，如果腸道菌群發(fā)生變化，則需要對(duì)信號(hào)的介導(dǎo)進(jìn)行有效的識(shí)別，細(xì)胞膜表面受體的介導(dǎo)信號(hào)主要是TLR。對(duì)于正常者而言，在腸道上皮細(xì)胞中會(huì)有微量的TLR4表達(dá)，但沒有表達(dá)CD14 mRNA、CD14蛋白、MD2，而對(duì)于UC患者，TLR4在整個(gè)結(jié)腸上皮存在較高的表達(dá)，且多數(shù)TLR4分布在上皮基底部位。從本組試驗(yàn)看大鼠腸組織內(nèi)的NF-κB的激活與很多方面存在著密切的聯(lián)系，如腸道內(nèi)大腸埃希菌的含量、腸組織內(nèi)TLR4的激活等，且TLR4的激活在很大程度上與大腸埃希菌的含量存在著一定的相關(guān)性〔6〕。通過接受布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪治療，黏膜下層TLR4/NF-κB陽性巨噬細(xì)胞數(shù)量大大減少，顯然布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪在抑制TLR4、NF-κB的激活方面起著關(guān)鍵性的作用。本次研究結(jié)果表明，布拉氏酵母菌散劑聯(lián)合美沙拉嗪治療UC具有較大的可行性，為臨床治療UC提供了新的模式與思路，具有較高的推廣價(jià)值。

1 李建軍,郭連鳳,李建平,等.美沙拉秦、布拉氏酵母菌散和康復(fù)新液三聯(lián)療法治療潰瘍性結(jié)腸炎的效果〔J〕.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014;35(22):166-9.

2 李建軍,司淑偉,李建平,等.美沙拉秦灌腸液聯(lián)合布拉氏酵母菌散治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效觀察〔J〕.臨床合理用藥雜志,2014;23(33):241-2.

3 劉宏晶,劉茂坤,苗德芳,等.中藥灌腸聯(lián)合美沙拉嗪及布拉氏酵母菌治療潰瘍性結(jié)腸炎34例〔J〕.環(huán)球中醫(yī)藥,2013;13(12):943-6.

4 張曉明,王曉娟,徐洪雨,等.布拉氏酵母菌散對(duì)TNBS-大鼠潰瘍性結(jié)腸炎IL-8、IFN-γ的表達(dá)影響〔J〕.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2013;24(10):993-6.

5 Aldemir M，K?kog lu OF，Geyik MF，etal.Effect of octreotide acetate and saccharomyces boulardii on bacterial translocation in an experimen-tal intestinal loop obstruction model of rats〔J〕.Tohoku J Exp Med，2012;198(1):11-9.

6 袁瓊瓊.美沙拉嗪聯(lián)合布拉酵母菌治療潰瘍性結(jié)腸炎的臨床療效觀察〔J〕.中國藥物與臨床,2013;10(8):1359-61.

〔2013-12-10修回〕

(編輯 李相軍)

王 燁(1977-)，男，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，主要從事消化系統(tǒng)疾病臨床及消化內(nèi)鏡治療的研究。

R574.62

A

1005-9202(2015)12-3271-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.037