細胞因子誘導殺傷細胞免疫療法研究進展

黃泳立 田華琴 李宏良 楊耀林 梁貴文 陳學彰 黃小青 王 斌 王艷杰

(佛山市中醫(yī)院腫瘤科，廣東 佛山 528000)

細胞因子誘導的殺傷(CIK)細胞是一種新型免疫活性細胞，最早是 Schmidt-Wolf等〔1〕研究小組研制，通過干擾素(IFN)-γ，CD3單抗、白細胞介素(IL)-2誘導出CIK細胞進行抗腫瘤活性研究，發(fā)現(xiàn)在帶有彌漫性組織淋巴瘤細胞(SUDHL)-4和彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞(OCI-Ly)8淋巴瘤細胞株的C．B-17重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠上使用CIK細胞治療后，小鼠可以存活。本文對CIK細胞免疫療法的研究進展進行綜述。

1 CIK細胞療法的原理

惡性腫瘤細胞能在細胞毒素劑下生存的能力是治療惡性腫瘤的主要障礙。免疫效應細胞，如淋巴因子激活的殺傷(LAK)細胞〔2，3〕，腫瘤浸潤淋巴(TIL)細胞〔4〕或 CIK 細胞〔1，5〕，可能適合殺傷對化療抵抗的殘留細胞。

CIK細胞同時表達CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子，故又被稱為自然殺傷(NK)細胞樣T淋巴細胞，兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非主要組織相容性復合體(MHC)限制性殺瘤優(yōu)點。因此，應用CIK細胞被認為是新一代抗腫瘤過繼細胞免疫治療的首選方案?，F(xiàn)在這種潛在的抗腫瘤效應已經(jīng)通過動物模式實驗及臨床試驗得到很好的證實〔6〕。CIK細胞能夠通過三種途徑殺滅腫瘤細胞:①CIK細胞對腫瘤細胞具有直接殺傷能力:CIK細胞從形態(tài)學上與大的淋巴顆粒狀細胞相似。表現(xiàn)出具有豐富的細胞質(zhì)和包含大量粒酶和生孔素的顆粒〔7，8〕。Hock等〔9〕通過實驗證明當 T 細胞缺失后，CIK細胞將失去抗腫瘤活性，說明CIK細胞的殺傷性是通過T細胞來實現(xiàn)的。已有研究證實這些刺激和擴增的T細胞可能通過細胞與細胞相互為聯(lián)系而識別腫瘤標志，因通過抗體阻滯CD54、CD11c和NKG2D后(細胞與細胞的聯(lián)系通道)后，將會顯著減弱細胞因子毒性〔10〕。但利用抗體遮蓋MHC或者T細胞反應性(TCR)時并不影響細胞因子毒性，說明這是一種非MHC限制性、非TCR依賴性機制〔11〕。進一步研究發(fā)現(xiàn)這種抗腫瘤活性是通過NKG2D-NKG2D配位基相互作用來介導，釋放以穿孔素為基礎的細胞毒性顆粒，從而導致腫瘤細胞裂解〔10，12〕，研究證實表達T細胞標志和NK細胞受體NKG2D標志的CIK細胞，它們能夠識別并殺滅那些表達MHC相關Ⅰ類多肽(MIC)A和MICB，而MICA和MICB是一種在腫瘤微環(huán)境和病毒感染后表達的與應激相關的配體〔13〕。②CIK細胞的抗腫瘤效應的其中一個途徑是通過輔助T細胞(Th1)細胞因子釋放IFN-γ、腫瘤壞死因子(TNF)-α和白細胞介素(IL)-2等。這些因子不僅對腫瘤細胞生長有直接抑制作用，還可通過調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)反應性間接殺傷腫瘤細胞〔14〕。TNF-α是一種能夠刺激免疫應答的致炎細胞因子，同時也是急性期蛋白、黏附分子和廣泛的免疫介質(zhì)劑，與包括化學增活素和其他如INF-γ在內(nèi)的細胞因子一起具有協(xié)同作用。而IFN-γ是一種細胞因子，包含多重抗腫瘤效應，如直接抑制腫瘤生長，阻滯血管生成或刺激巨噬細胞。同時能夠誘導MHC-Ⅱ類復合體的表達，并促進抗原提呈。而MHC-Ⅱ類分子能夠增加具有對抗免疫效應細胞的腫瘤細胞的敏感性〔15〕。③誘導腫瘤細胞凋亡:Franceschetti等〔16〕研究發(fā)現(xiàn)CIK細胞表達Ⅱ型跨膜糖蛋白(FasL)。一方面增強了其對FasL(+)腫瘤細胞引發(fā)的Ⅰ型跨膜糖蛋白(Fas)-FasL凋亡的抵抗性，還可通過對Fas(+)腫瘤細胞誘導凋亡使其發(fā)揮慢性殺傷作用，保證抗腫瘤活性的長期持久〔17〕。

2 CIK細胞的療效研究

Schmidt-Wolf等〔1〕研制的 CIK細胞在治療 SU-DHL-4和OCI-Ly8淋巴瘤細胞株的C．B-17 SCID小鼠上獲得成功。研究者通過種植SU-DHL-4和OCI-Ly8淋巴瘤細胞株在SCID小鼠上，成功模擬了人類淋巴瘤模型，并通過這個模型評價CIK細胞的療效，發(fā)現(xiàn)CIK細胞能夠殺滅淋巴瘤。而Lu等〔18〕發(fā)現(xiàn)LAK細胞在SCID老鼠-人類淋巴瘤模型上無效。因此，在與LAK細胞對比上，CIK細胞具有更強的細胞殺傷性及增殖率高的特點〔19〕，是新一代抗腫瘤過繼細胞免疫治療的首選方案。Hongeng等〔20〕通過對比兒童腫瘤患者自身培養(yǎng)的CIK細胞與外周血單核細胞進行細胞毒性試驗發(fā)現(xiàn)，CIK細胞的溶解活性更強(45．5% ～64．5%vs 8% ～12%)。

CIK細胞療法具有廣譜的抗瘤優(yōu)點，對常見的惡性腫瘤包括肝癌、肺癌、胃癌、腎癌、淋巴瘤及白血病等均有強大的抗癌作用。周啟明等〔21〕微創(chuàng)治療(血管介入及射頻消融)聯(lián)合CIK細胞療法治療肝癌患者，數(shù)據(jù)顯示微創(chuàng)治療聯(lián)合CIK細胞療法能夠明顯減低 1、1．5 年的復發(fā)率(8．89%vs 30%，15．56%vs 40%，P＜0．05)。而進一步研究〔22〕表明CIK細胞輔助免疫療法可以有效提高原發(fā)性肝癌患者經(jīng)導管動脈化學栓塞術(shù)(TACE)術(shù)后的無進展生存期(PFS)及總生存期(OS)(mPFS 11 vs 5 個月，mOS 31vs 10 個月，P ＜0．05)。Hui等〔23〕研究顯示，接受CIK細胞輔助免疫治療的術(shù)后肝癌患者的1、3及5年生存率明顯高于不接受治療的對照組，但接受6個周期CIK細胞療法比3個周期治療并未顯示出更好的療效。Wu等〔24〕一個前瞻性隨機對照研究表明，化療聯(lián)合CIK細胞療法治療晚期肺癌患者比單純化療，從疾病控制率(DCR)(89．7%vs．65．5%，P=0．030)、PFS 及 OS(mPFS 6．65 vs 4．67 個月 mOS 15 vs 11 個月 P＜0．05)上比較均有提高。Su等〔25〕收集了16例術(shù)后復發(fā)的腎癌患者，均接受CIK細胞治療。結(jié)果表明3例完全緩解(CR)，1例部分緩解(PR)，6例疾病穩(wěn)定(SD)。結(jié)果提示CIK細胞過繼免疫治療安全有效，能增強轉(zhuǎn)移復發(fā)的腎癌患者免疫功能。

Shi等〔26〕收集了151例已行胃切除術(shù)的Ⅲ/Ⅳ胃癌患者，隨機分為免疫治療組和對照組(不使用免疫療法)。研究發(fā)現(xiàn)免疫治療組的5年無疾病生存率比對照組高(28．3%vs 10．4%，P=0．044)。對于伴有腸型腫瘤的患者，5年總生存率及5年無疾病生存率較對照組提高(PFS 42．4%vs 15．7%，OS 46．8%vs 31．4%，P ＜0．05)。對于免疫治療組，在第一次 CIK細胞治療后的 1 w，CD3(+)、CD4(+)、CD4(+)/CD8(+)比率的水平分別增加了50．8%，26．5%和0．9%。2個月內(nèi)逐漸降到基線水平，分別為62．6%，35．0%和1．4%。而在3個周期的免疫治療后，免疫功能在2個月內(nèi)能維持在高水平，分別達到(60．7 ±8．2)%，(34．2 ±7．1)%，(1．3 ±0．3)%。結(jié)論認為使用CIK細胞療法作為輔助免疫治療可以延長晚期胃癌患者的無疾病生存期(DFS)，并顯著地提高伴有腸內(nèi)腫瘤型患者的OS。也許腸內(nèi)腫瘤型是CIK細胞免疫療法的其中一個重要適應證。

Hontscha等〔27〕回顧性分析了11個有關CIK細胞療法的臨床研究共426例患者，包含肝癌、胃癌、霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤等惡性腫瘤。其中10個研究使用了自體CIK細胞回輸治療方法，一共回輸?shù)募毎麛?shù)量為21．9×109/L～5．2×1010/L，每次回輸7．2×109/L～2．1×1010/L。其中 389例患者的療效評價如下:24例CR、27例PR、40例輕度緩解(MR)、161例SD和129例疾病進展(PD)，另有3例只描述了腫瘤體積縮小，相對危險度(RR)率23．7%，DCR率65．6%，而不良反應報道不多。Pievani等〔28〕在研究CIK細胞療法治療B細胞淋巴瘤時發(fā)現(xiàn)，利妥昔單抗及GA101(抗CD20單抗藥物)可以分別提高CIK細胞15%和35%的細胞毒性。提示分子靶向藥物聯(lián)合CIK細胞療法治療惡性腫瘤可能獲得更好的療效。Tettamanti等〔29〕研究中誘導一種CD123嵌合抗原抗體的CIK細胞能有效地殺傷CD123+細胞和急性髓系白血病(AML)細胞，提示抗CD123嵌合抗原抗體能夠有效地增強CIK細胞對AML細胞的殺傷性。這種治療手段融合了CIK細胞和嵌合抗原抗體，對AML的治療及CIK的進一步開發(fā)利用提供了寶貴經(jīng)驗。

3 CIK細胞療法應用的展望

CIK細胞具有增殖快、殺瘤活性強、殺瘤譜廣的優(yōu)點，大量的循證醫(yī)學證據(jù)表明CIK細胞療法可以多次反復使用，對殘留、轉(zhuǎn)移、耐藥的腫瘤有很好的緩解和控制作用，對化療耐藥的腫瘤細胞株亦有殺傷作用，特別適用于術(shù)后或疾病緩解后殘留的腫瘤灶，疾病控制率達到65．6% ～89．7%，能延長 PFS及OS，可以提高患者的生活質(zhì)量及機體的免疫功能，同時不出現(xiàn)嚴重的不良反應。

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