脂肪干細胞分離純化方法研究進展

劉 琴，王麗平，陳 芳，張 宜

(解放軍廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院醫(yī)學實驗科，武漢 430070）

脂肪干細胞分離純化方法研究進展

劉 琴，王麗平，陳 芳，張 宜

(解放軍廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院醫(yī)學實驗科，武漢 430070）

脂肪干細胞作為種子細胞廣泛應用于組織工程中，而獲得足夠量的、活性高的、高純度的脂肪干細胞是其在組織工程中應用的前提。本文綜述近幾年來脂肪干細胞分離純化方法的研究進展，比較各方法的優(yōu)缺點，為分離純化出理想的脂肪干細胞提供理論依據(jù)。

脂肪干細胞;分離;純化;組織塊貼壁法;酶消化法;免疫磁珠分選法;密度梯度離心法

脂肪干細胞(adipose－derived stem cells）來源于脂肪組織，取材方便、對自體損傷較小，具有自我更新、多向分化能力、自體移植不發(fā)生排斥反應等特點，是組織工程中最有應用前景的種子細胞之一。然而有研究表明，脂肪組織中存在的脂肪干細胞含量很低，占3%左右，并且分離出來的細胞純度不理想［1］。因此如何獲得足夠量的、活性高的、高純度的細胞極為重要。隨著科研技術(shù)的不斷發(fā)展，研究者提出了脂肪干細胞不同的分離純化方法。本文就近年來脂肪干細胞分離純化方法的新研究進展作一綜述。

1 脂肪干細胞分離方法

1.1 組織塊貼壁法

組織塊貼壁法即將脂肪組織剪成適宜大小的組織塊，然后將組織塊貼壁到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)［2］。此法的核心是確保脂肪組織塊貼壁，但在實際操作中很難保證每塊組織塊貼壁，尤其是在換液過程中，組織塊很容易漂浮，導致脂肪組織的浪費。

Jing W等人［3］采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)8周齡BALB/c小鼠脂肪干細胞時，在脂肪組織剪碎之前，先吸取脂肪組織表面附著的多余水分，將脂肪組織塊接種到培養(yǎng)瓶后讓組織塊貼壁一段時間后再加入細胞培養(yǎng)液，這樣的處理可以使脂肪組織塊更加牢固地貼在培養(yǎng)瓶上。本實驗室采用此法分離脂肪干細胞時將組織塊接種到培養(yǎng)瓶后置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30 min后再加入培養(yǎng)液，使得組織塊貼壁更加牢固［4］。

1.2 酶消化法

酶消化法為原代細胞培養(yǎng)常用的方法之一，原理是利用新鮮離體組織的細胞生物學特性未發(fā)生明顯的變化，仍具有二倍體遺傳特性，通過消化液去除細胞間質(zhì)，使細胞能夠更好地吸收外界營養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物，短時間內(nèi)獲得大量的活細胞。脂肪組織酶消化法即脂肪組織被剪成碎塊置于酶中消化，再通過過濾、洗滌和離心等步驟去除漂浮在上層的脂肪細胞和油脂，從而得到脂肪干細胞。Jiang A等［5］通過酶消化法從人脂肪組織中分離出脂肪干細胞，所培養(yǎng)的細胞貼壁生長、細胞形態(tài)為典型的長梭形成纖維樣，表達脂肪干細胞特殊的表面標記物CD29、CD44、CD105，陰性表達造血干細胞相關(guān)的表面標記物CD34、CD45。

酶消化法實際上是一種費時、昂貴的方法，尤其是在需要分離大量脂肪組織的時候，其弊端顯得更為突出;在酶的種類、濃度、消化時間上存在很大差異，缺乏統(tǒng)一的標準，大多數(shù)研究者采用Ⅰ型膠原酶消化分離原代細胞［6］，少數(shù)采用Ⅱ型膠原酶［7］、IV型膠原酶、VIII型膠原酶［8］、胰酶［9］或者膠原酶聯(lián)合應用胰酶［10］進行消化分離，酶的使用濃度從0．05～2．5 g/L不等［11－14］，消化時間范圍為0．5～3 h［15－17］，從而使得分離出來細胞的活性、表型、潛能存在一定的差異;另一方面，市場上的膠原酶和胰酶純度不高，可能包含有色素、內(nèi)毒素、異種抗原、異種蛋白酶體［18－19］;消化法獲得的脂肪干細胞不純;人為操作過多，容易造成污染;此外，需要的脂肪組織量較大，當脂肪組織量較少時，采用此法無法擴增出足夠量的脂肪干細胞用于后續(xù)分析［20］。

Griesche N等［21］在常規(guī)膠原酶消化法分離脂肪干細胞的基礎(chǔ)上作了一些改進，在消化獲得的細胞接種培養(yǎng)60 min后馬上進行換液，與常規(guī)膠原酶消化法相比，此法可以明顯減少desmin、smA和 six2的表達，提高干細胞標記物nestin、oct－4和sall－1的表達。Carvalho PP等［22］使用臨床級的無異源蛋白的釋放酶消化人脂肪組織，消化獲得的脂肪干細胞活性和功能與使用科研級的膠原酶Ⅰ、膠原酶A、膠原酶NB4相比無明顯區(qū)別，表明高度純化的釋放酶可替代科研級的膠原酶，減少酶中異源蛋白對脂肪干細胞的污染。Güven S等［23］使用sepax裝置自動分離脂肪干細胞，方法是將樣品和膠原酶裝入轉(zhuǎn)移袋中，37℃孵育1 h后，轉(zhuǎn)移袋與CS－490．1試劑盒相接，在sepax裝置中啟動CS－490．1試劑盒開始自動消化，收集消化所得細胞，此裝置分離得到的脂肪干細胞比傳統(tǒng)的手動消化法效率高、細胞產(chǎn)量高、人為干預少。胡金靈等［24］分離SD大鼠脂肪干細胞時采用 0．25%Ⅰ型膠原酶消化脂肪組織30 min，離心，將獲得的細胞接種培養(yǎng)獲得所需的細胞，此法提高了膠原酶濃度，縮短消化時間，可減少膠原酶對細胞活性的影響;省略了傳統(tǒng)膠原酶消化法中篩網(wǎng)過濾和紅細胞裂解兩個步驟，降低人為操作、試劑對脂肪干細胞的損傷。

1.3 其他方法

近幾年來，除了傳統(tǒng)的脂肪干細胞分離方法，還有些尋求突破的新方法出現(xiàn)。

1．3．1 吸附柱法

Ito K等［25］于2010年首次使用由非織造織物組成的裝置從骨髓中成功分離出間充質(zhì)干細胞，分離出來的細胞表達間充質(zhì)干細胞細胞表型標記物，具有成脂成骨潛能。Doi K等［26］參照上述方法設(shè)計出一個由無紡纖維和聚乙烯織物組成的網(wǎng)格直徑為100 μm的吸附柱，此無紡纖維和聚乙烯織物對貼壁細胞具有親和力，具體方法是將抽脂產(chǎn)物的液體部分通過吸附柱，貼壁細胞吸附到吸附柱中，再通過逆行流沖洗出吸附柱中吸附的細胞，獲得的細胞接種培養(yǎng)，擴大的細胞表達脂肪干細胞相關(guān)的表面標記物，具有向脂肪細胞與成骨細胞分化的能力，成功從抽脂產(chǎn)物液體部分中分離出脂肪干細胞。此法可以避免酶的使用，但是僅適用于抽脂產(chǎn)物的液體部分，而且需要大量的樣品。

1．3．2 直接離心法

直接離心法的原理是通過離心收集吸脂時吸脂產(chǎn)物中混有的游離脂肪干細胞，將離心得到的脂肪干細胞接種培養(yǎng)。Shah FS等［27］將得到的吸脂產(chǎn)物用磷酸鹽緩沖液洗滌，離心，分別收集上層漂浮物和下層沉淀物，上層漂浮物加入磷酸鹽緩沖液再次洗滌，離心，此過程重復3～4次，將每次獲得的下層沉淀物接種到培養(yǎng)瓶則可獲得脂肪干細胞。此法僅適用于吸脂手術(shù)獲得的脂肪組織，并且需要大量的吸脂產(chǎn)物。

1．3．3 膠原酶消化法結(jié)合組織塊貼壁法

候曉琳等［28］分離C57BL/6J小鼠脂肪干細胞時將Ⅰ型膠原酶消化獲得的單細胞以及未消化完全的脂肪組織塊一起接種到培養(yǎng)皿中，8～9 d時細胞即鋪滿皿底。此法將膠原酶消化法與組織塊貼壁法兩種方法有機結(jié)合起來，在短時間內(nèi)適度消化降低膠原酶對細胞活力損傷，同時把剩余未消化的脂肪組織塊一起接種，可以充分利用脂肪組織。不足之處是此法未與單獨采用Ⅰ型膠原酶消化法、組織塊貼壁法所獲得的脂肪干細胞在細胞產(chǎn)量、活性、分化潛能等方面進行比較。

2 脂肪干細胞純化方法

為獲得純度較高的脂肪干細胞，目前有學者在分離的基礎(chǔ)上結(jié)合相應的純化方法，以獲得研究需要的細胞，現(xiàn)有的脂肪干細胞純化方法如下。

2.1 免疫磁珠分選法

免疫磁珠分選法分離純化細胞的原理是基于細胞表面抗原與連在磁珠上相應的特異性單抗結(jié)合，當單細胞懸液通過特定的外加磁場時，與磁珠相結(jié)合的細胞被吸附滯留在磁場中，未與磁珠結(jié)合的細胞則不能被吸附在分選柱內(nèi)，從而使細胞得以分離。免疫磁珠分選法將細胞生物學、磁力學和免疫學等知識融于一體，具有高度特異性分選細胞的特點。Gierloff M等［29］使用免疫磁珠分離法從培養(yǎng)的大鼠脂肪干細胞中分離純化出CD29+、CD71+、CD73+、CD90+各脂肪干細胞亞群，各干細胞亞群均具向脂肪細胞分化的能力，但是CD29+干細胞亞群的成脂能力強于CD71+、CD73+、CD90+各干細胞亞群。

免疫磁珠分選法純化脂肪干細胞順利進行的重點側(cè)重于標記磁珠時相應抗體的選擇，若只用單一特異性標記物原則上會造成其他脂肪干細胞亞群的丟失。目前有報道用 CD29、CD44、CD49d、CD73、CD105等作為純化脂肪干細胞的表面標記物［30］。然而，至今為止研究者們對于脂肪干細胞的特異性標記物還存在一定的爭議，尤其是CD34。2006年國際細胞治療協(xié)會規(guī)定CD34為脂肪干細胞的陰性標記物［31］。隨后許多研究者也同樣認為脂肪干細胞不表達CD34。最近幾年，越來越多的研究者發(fā)現(xiàn)早期培養(yǎng)的脂肪干細胞表達 CD34［32－35］。Baer PC［36］認為脂肪干細胞的細胞表型在體外是動態(tài)的，隨著傳代次數(shù)的增多有的細胞表型消失，有的細胞表型增加。故采用免疫磁珠法純化脂肪干細胞時選擇的抗體和細胞傳代次數(shù)很重要。此外，常用的免疫磁珠分選法如親和吸附柱、FACS組織培養(yǎng)瓶鋪展貼壁、MACS都存在一些不足之處，如實驗設(shè)備昂貴、試驗成本高、技術(shù)要求高、分離出來的細胞容易污染、對細胞活力有一定的損傷等。重要的是分離出來的細胞仍然具有人工修飾的非自身的lg片段，進行細胞移植治療時可能會引發(fā)一系列宿主反應，尤其是會產(chǎn)生活性氧，活性氧進一步引起炎癥反應，同時影響脂肪干細胞自身的修復能力［37］。

2.2 密度梯度離心法

密度梯度離心法是根據(jù)不同顆粒之間的沉降系數(shù)不同，在一定離心力作用下，不同顆粒以自己的速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶，從而不同密度的細胞得到分離。杜明昌等［38］采用密度梯度離心法分離由真空負壓抽脂法吸取的豬皮下脂肪50 g，可獲得(2．1～2．7）×106個脂肪干細胞。

密度梯度離心法能夠順利進行在于介質(zhì)的選擇和介質(zhì)最佳密度的確定上，目前常用的離心介質(zhì)為聚蔗糖(Ficoll）和經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮處理的硅膠顆粒混懸液(Percoll）。Chang等［39］研究發(fā)現(xiàn)利用Ficoll分離純化出來的人骨髓間充質(zhì)干細胞在成核細胞數(shù)目及集落形成率均高于Percoll法，且Ficoll法純化出來的細胞顯著高表達 CD90+、CD105+、CD166+和SH3+，認為Ficoll更適用于制備人骨髓間充質(zhì)干細胞。Bourzac等［40］的研究表明采用Percoll法分離純化馬骨髓間充質(zhì)干細胞的細胞產(chǎn)量及自我更新潛能優(yōu)于 Ficoll法。Grisendi等［41］用1．073 g/mL、1．077 g/mL兩種不同密度的Ficoll分離純化骨髓間充質(zhì)干細胞，結(jié)果顯示，前者所得細胞在免疫熒光表達實驗中更具有活力，成纖維細胞集落形成單位高出后者1．5倍，細胞產(chǎn)量高出后者1．8倍。上述研究表明使用不同介質(zhì)、不同密度的同一種介質(zhì)體外分離純化骨髓間充質(zhì)干細胞時對細胞的活性、產(chǎn)量、表型有著不同程度的影響，然而密度梯度離心常用介質(zhì)是否對脂肪干細胞的各方面存在影響還不得而知。

3 小結(jié)

尋找一種操作簡單、可控性強、經(jīng)濟的脂肪干細胞分離方法一直是學者們研究的重要內(nèi)容?，F(xiàn)有脂肪干細胞的分離方法種類較多，都存在一些缺點。組織塊貼壁法在操作中保證脂肪組織塊牢固貼壁是一個難題。酶消化法需要在酶的種類、濃度、消化時間上制定統(tǒng)一標準。有研究表明采用組織塊貼壁法分離出來的脂肪干細胞產(chǎn)量高于酶消化法，所得細胞活性、細胞表型、成脂成骨分化能力與酶消化法相比無明顯區(qū)別［3，20］。若能解決組織塊貼壁法組織塊貼壁難的問題，那么組織塊貼壁法將是一種前景可觀的脂肪干細胞分離方法，因為組織塊貼壁法既可避免酶的使用對細胞各方面造成的潛在影響，又具有經(jīng)濟實惠、可控性比酶消化法強的特點。其他脂肪干細胞的分離方法雖然在一定程度上可以彌補傳統(tǒng)方法的一些缺點，但是仍然不能解決現(xiàn)有脂肪干細胞分離方法存在的不足。要獲得高純度的脂肪干細胞，緊接細胞分離后即可進行細胞純化，免疫磁珠分選法所使用的設(shè)備和抗體比較昂貴，不適用于一般的科研試驗和臨床研究。密度梯度離心法所使用的試劑和設(shè)備比免疫磁珠分選法所采用的試劑和設(shè)備相對來說便宜很多，而且分離出來的脂肪干細胞純度較高，若能弄清楚離心介質(zhì)是否對脂肪干細胞各方面造成影響，則密度梯度離心法將是比較理想的脂肪干細胞純化方法。

［1］Fraser JK，Zhu M，Wulur I，et al．Adipose－derived stem cells［J］．Methods Mol Biol，2008，449：59－67．

［2］Priya N，Sarcar S，Majumdar AS，et al．Explant culture：a simple，reproducible，efficient and economic technique for isolation of mesenchymal stromal cells from human adipose tissue and lipoaspirate［J］．J Tissue Eng Regen Med，2012，27：1－9．

［3］Jing W，Xiao J，Xiong Z，et al．Explant culture：an efficient method to isolate adipose－derived stromalcells fortissue engineering［J］．Artif Organs，2011，35(2）：105－112．

［4］劉琴，王麗平，喻晶，等．組織塊貼壁法擴增兔脂肪干細胞［J］．中國組織工程研究，2014，18(1）：88－93．

［5］Jiang A，Li M，Duan W，et al．Improvement of the survival of human autologous fat transplantation by adipose－derived stemcells－assisted lipotransfer combined with bFGF［J］．Scientific World Journal，2015，2015：968057．

［6］Kim DS，Lee MW，Yoo KH，et al．Gene expression profiles of human adipose tissue－derived mesenchymalstem cellsare modified by cell culture density［J］．PLoS One，2014，9 (1）：e83363．

［7］Cakici C，Buyrukcu B，Duruksu G，et al．Recovery of fertility in azoospermia rats after injection of adipose－tissue－derived mesenchymal stem cells：the sperm generation［J］．Biomed Res Int，2013，2013：529589．

［8］Huang SJ，F(xiàn)u RH，Shyu WC，et al．Adipose－derived stem cells： isolation，characterization，and differentiation potential［J］．Cell Transplant，2013，22(4）：701－709．

［9］Markarian CF，F(xiàn)rey GZ，Silveira MD，et al．Isolation of adiposederived stem cells：a comparison among different methods［J］．Biotechnol Lett，2014，36(4）：693－702．

［10］He F，Pei M．Extracellular matrix enhances differentiation of adipose stem cells from infrapatellar fat pad toward chondrogenesis［J］．J Tissue Eng Regen Med，2013，7(1）：73－84．

［11］Razmkhah M，Jaberipour M，Ghaderi A．Downregulation of MMP2 and Bcl－2 in Adipose Derived Stem Cells(ASCs） following Transfection with IP－10 Gene［J］．Avicenna J Med Biotechnol，2014，6(1）：27－37．

［12］Sunay O，Can G，Cakir Z，et al．Autologous rabbit adipose tissue－derived mesenchymal stromal cells for the treatment of bone injuries with distraction osteogenesis［J］．Cytotherapy，2013，15 (6）：690－702．

［13］Fu BC，Gao JH，Lu F，et al．Experimental study of the effect of adipose stromal vascular fraction cells on the survival rate of fat transplantation［J］．Zhonghua Zheng Xing Wai Ke Za Zhi，2010，26(4）：289－94．

［14］Pak J，Lee JH，Lee SH．Regenerative repair of damaged meniscus with autologous adipose tissue－derived stem cells［J］．Biomed Res Int，2014，2014：436029．

［15］Bhang SH，Park J，Yang HS，et al．Platelet－rich plasma enhances the dermal regeneration efficacy of human adiposederived stromal cells administered to skin wounds［J］．Cell Transplant，2013，22(3）：437－445．

［16］Jiang M，Wang X，Liu H，et al．Bone formation in adiposederived stem cells isolated from elderly patients with osteoporosis： a preliminary study［J］．Cell Biol Int，2014，38(1）：97－105．

［17］Hoke NN，Salloum FN，Kass DA，et al．Preconditioning by phosphodiesterase－5 inhibition improves therapeutic efficacy of adipose－derived stem cells following myocardial infarction in mice［J］．Stem Cells，2012，30(2）：326－335．

［18］Jahr H，Pfeiffer G，Hering BJ，et al．Endotoxin－mediated activation of cytokine production in human PBMCs by collagenase and Ficoll［J］．J Mol Med，1999，77(1）：118－120．

［19］Yamamoto T，Ricordi C，Messinger S，et al．Deterioration and variability of highly purified collagenase blends used in clinical islet isolation［J］．Transplantation，2007，84(8）：997－1002．

［20］Ghorbani A，Jalali SA，Varedi M．Isolation of adipose tissue mesenchymal stem cells without tissue destruction：a nonenzymatic method［J］．Tissue Cell，2014，46(1）：54－58．

［21］Griesche N，Luttmann W，Luttmann A，et al．A simple modification of the separation method reduces heterogeneity of adipose－derived stem cells［J］．Cells Tissues Organs，2010，192 (2）：106－115．

［22］Carvalho PP，Gimble JM，Dias IR，et al．Xenofree enzymatic products for the isolation of human adipose－derived stromal/stem cells［J］．Tissue Eng Part C Methods，2013，19(6）：473－478．

［23］Güven S，Karagianni M，Schwalbe M，et al．Validation of an automated procedure to isolate human adipose tissue－derived cells by using the Sepax? technology［J］．Tissue Eng Part C Methods，2012，18(8）：575－582．

［24］胡金靈，邵世飚，梁廷波．脂肪干細胞提取方法的改良［J］．浙江臨床醫(yī)學，2015，17(2）：215－217．

［25］Ito K，Aoyama T，F(xiàn)ukiage K，et al．A novel method to isolate mesenchymal stem cells from bone marrow in a closed system using a device made by nonwoven fabric［J］．Tissue Eng Part C Methods，2010，16(1）：81－91．

［26］Doi K，Kuno S，Kobayashi A，et al．Enrichment isolation of adipose－derived stem/stromal cells from the liquid portion of liposuction aspirates with the use of an adherent column［J］．Cytotherapy，2014，16(3）：381－391．

［27］Shah FS，Wu X，Dietrich M，et al．A non－enzymatic method for isolating human adipose tissue－derived stromal stem cells［J］．Cytotherapy，2013，15(8）：979－985．

［28］侯曉琳，郁衛(wèi)東，崔梅花，等．小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及腸道歸巢［J］．中國組織工程研究，2015，19(6）： 854－860．

［29］Gierloff M，Petersen L，Oberg HH，etal．Adipogenic differentiation potential of rat adipose tissue－derived subpopulations of stromal cells［J］．J Plast Reconstr Aesthet Surg，2014，67(10）：1427－1435．

［30］Rada T，Reis RL，Gomes ME．Distinct stem cells subpopulations isolated from human adipose tissue exhibit different chondrogenic and osteogenic differentiation potential［J］．Stem Cell Rev，2011，7(1）：64－76．

［31］Dominici M，Le Blanc K，Mueller I，et al．Minimal criteria for defining multipotentmesenchymalstromalcells［J］．The international Society for Cellular Therapy position statement［J］．Cytotherapy，2006，8(4）：315－317．

［32］Mitchell JB，McIntosh K，Zvonic S，et al．Immunophenotype of human adipose－derived cells： temporal changes in stromalassociated and stem cell－associated markers［J］．Stem Cells 2006，24：376－385

［33］Yoshimura K，Shigeura T，Matsumoto D，et al．Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates［J］．J Cell Physiol，2006，208：64－76

［34］Varma MJ，Breuls RG，Schouten TE，et al．Phenotypical and functional characterization of freshly isolated adipose tissuederived stem cells［J］．Stem Cells Dev，2007，16：91－104．

［35］Scherberich A，Di Maggio ND，McNagny KM．A familiar stranger：CD34 expression and putative functions in SVF cells of adipose tissue［J］．World J Stem Cells，2013，5：1－8．

［36］Baer PC．Adipose－derived mesenchymal stromal/stem cells：An update on their phenotype in vivo and in vitro［J］．World J Stem Cells，2014，6(3）：256－265．

［37］Hunt JA，F(xiàn)ok M，Bryan N．Impact of cell purification technique of autologous human adult stem cells on inflammatory reaction［J］．Biomaterials，2013，34(31）：7626－7631．

［38］杜明昌，劉憲民，祖啟明，等．自體脂肪干細胞復合不同初始濃度誘導支架修復豬膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的初步觀察［J］．中華臨床醫(yī)師雜志(電子版），2013，7(6）：2523－2527

［39］Chang Y，Hsieh PH，Chao CC．The efficiency of Percoll and Ficoll density gradient media in the isolation of marrow derived human mesenchymal stem cells with osteogenic potential［J］．Chang Gung Med J，2009，32(3）：264－275．

［40］Bourzac C，Smith LC，Vincent P，et al．Isolation of equine bone marrow－derived mesenchymal stem cells：a comparison between three protocols［J］．Equine Vet J．2010，42(6）：519－527．

［41］Grisendi G，Annerén C，Cafarelli L，et al．GMP－manufactured density gradient media for optimized mesenchymal stromal/stem cell isolation and expansion［J］．Cytotherapy，2010，12(4）： 466－477．

Progress in the isolation and purification methods of adipose-derived stem cells

LIU Qin，WANG Li－ping，CHEN Fang，ZHANG Yi
(Department of Medical Experiments，Wuhan General Hospital of Guangzhou Military Command，Wuhan 430070，China）

Adipose－derived stem cells(ASCs）as potential seeded cells have been widely used in tissue engineering．Thus to obtain enough，high activity，high purity adipose－derived stem cells is the particular important premise of the application in tissue engineering．In this paper，the isolation and purification methods of ASCs were reviewed and the merit and demerit of different methods were compared in order to provide theoretical basis for safe and high－effective isolation and purification of ASCs．

Adipose－derived stem cells;Isolation;Purification;Explants culture method;Enzymatic digestion method;Immunomagnetic beads sorting method;Density gradient centrifugation

R－332

A

1671－7856(2015）07－0069－05

10．3969．j．issn．1671．7856．2015．007．015

劉琴(1986－），女，技師，碩士，從事細胞生物學和分子生物學方面的研究，E－mail：liuqin_0629@163．com

張宜(1965－），男，碩士，主任藥師，從事藥學信息研究，E－mail：abcd1566@sina．com

2015－06－10