CD2AP相關(guān)作用的研究進(jìn)展

康麗霞　陳素枝　陳文軍

1.河北省中醫(yī)院腎病科，河北　石家莊　050011；

2.河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，河北　石家莊　050017；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津　300193

文獻(xiàn)綜述

CD2AP相關(guān)作用的研究進(jìn)展

康麗霞1陳素枝2陳文軍3

1.河北省中醫(yī)院腎病科，河北石家莊050011；

2.河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，河北石家莊050017；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193

【摘要】CD2AP首先是作為一個(gè)免疫分子被發(fā)現(xiàn)，其后又證實(shí)它也是一個(gè)足細(xì)胞分子，與其他各種足細(xì)胞相關(guān)蛋白的關(guān)系密切而復(fù)雜，并參與信號(hào)傳導(dǎo)，在腎臟病的發(fā)生中起重要作用。文中從CD2AP與蛋白質(zhì)的關(guān)系,中醫(yī)藥上調(diào)CD2AP研究的現(xiàn)狀等方面綜述CD2AP相關(guān)作用的研究進(jìn)展。

【關(guān)鍵詞】CD2AP；足細(xì)胞；蛋白尿；中醫(yī)藥

蛋白尿是腎小球疾病的基本表現(xiàn)之一, 是促使腎臟疾病進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,尤其足細(xì)胞損傷在腎病發(fā)展中更為重要，CD2AP作為一個(gè)足細(xì)胞分子，通過參與細(xì)胞免疫、細(xì)胞骨架組裝、維持裂孔隔膜的結(jié)構(gòu)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能與蛋白尿發(fā)生密切相關(guān), 是維持腎小球?yàn)V過屏障生理完整性的重要成分之一。CD2AP表達(dá)下降可引起足細(xì)胞損傷而致大量蛋白尿，研究發(fā)現(xiàn)中醫(yī)藥對(duì)上調(diào)CD2AP具有良效，能有效阻止腎臟病進(jìn)展。

1CD2AP與蛋白尿的關(guān)系

CD2相關(guān)蛋白(CD2-associated protein，CD2AP)是近年來發(fā)現(xiàn)的與蛋白尿發(fā)生密切相關(guān)的SD分子。CD2AP是足細(xì)胞裂孔隔膜上一種重要的蛋白質(zhì)，先天缺乏此蛋白的小鼠出生后不久即出現(xiàn)大量的蛋白尿[1], 并伴有足突的融合和消失, 表明CD2AP在蛋白尿的發(fā)生中有重要的作用。CD2AP水平的減少在兒童的微小病變和IgA腎病也已經(jīng)證實(shí)[2]。

1.1CD2AP的結(jié)構(gòu)和功能CD2AP是分子量為80kD的跨膜蛋白，含有639個(gè)氨基酸殘基。N端有3個(gè)連續(xù)的SH3結(jié)構(gòu)域，可與許多信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞骨架分子中的富含脯氨酸序列相互作用；C端有1個(gè)螺旋結(jié)構(gòu)域和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的結(jié)合位點(diǎn)，這樣的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)表明它對(duì)細(xì)胞骨架具有調(diào)節(jié)作用。

1.2CD2AP參與細(xì)胞免疫CD2AP作為一個(gè)免疫分子表達(dá)于T淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞的表面[3]，通過其SH3結(jié)構(gòu)與T細(xì)胞黏附蛋白CD2結(jié)合, 促進(jìn)T細(xì)胞與抗原呈遞細(xì)胞的黏附，起到促進(jìn)抗原識(shí)別和呈遞的作用。在T細(xì)胞激活后，又參與T細(xì)胞表面抗原識(shí)別受體的降解，起到避免過度免疫反應(yīng)、防止T細(xì)胞死亡的作用。CD2AP參與足細(xì)胞對(duì)免疫復(fù)合物的降解，其表達(dá)異?？芍伦慵?xì)胞清除功能下降，可引起蛋白尿和腎小球疾病。

1.3CD2AP穩(wěn)定足細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)F-actin對(duì)維持足突的結(jié)構(gòu)與功能有著重要作用。研究表明[4]，CD2AP參與了多種細(xì)胞生理過程中actin骨架的構(gòu)建，對(duì)骨架結(jié)構(gòu)起穩(wěn)定作用。Lehtonen等[5]在培養(yǎng)的小鼠腎小管上皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn), CD2AP與F-actin部分聯(lián)合定位, 且肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的斷裂可導(dǎo)致內(nèi)源性CD2AP結(jié)構(gòu)的破壞，Gaidos等[6]通過F-actin結(jié)合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這種聯(lián)合通過CD2AP羧基端直接與F-actin結(jié)合實(shí)現(xiàn)。黃松明等[7]研究顯示腎小球CD2AP表達(dá)量的改變與F-actin含量變化呈顯著正相關(guān)(P<0.01), 腎小球CD2AP表達(dá)量的下降過程中伴隨著F-actin 含量的減少。Synaptopodin是足細(xì)胞分化的標(biāo)志蛋白，也是重要的與F-actin結(jié)合的骨架蛋白之一，Synaptopodin過表達(dá)可引起F-actin纖維骨架重建，部分區(qū)域呈點(diǎn)塊狀濃聚; 而synaptopodin表達(dá)沉默可導(dǎo)致足細(xì)胞內(nèi)F-actin纖維骨架消失。CD2AP可通過蛋白氨基端3個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域直接與synaptopodin結(jié)合[8]，推測(cè)CD2AP的SH3結(jié)構(gòu)域突變可能會(huì)影響CD2AP與synaptopodin 的結(jié)合，進(jìn)而對(duì)synaptopodin與F-actin的結(jié)合產(chǎn)生影響，最終導(dǎo)致足細(xì)胞內(nèi)F-actin纖維骨架的改變。

1.4CD2AP維持裂孔隔膜正常濾過nephrin特異性地表達(dá)于足細(xì)胞裂孔膜上, 與足細(xì)胞的成熟及裂孔隔膜的形成有關(guān)，其表達(dá)下降是引起蛋白尿的原因，而非蛋白尿所致的一繼發(fā)性改變。Shih等[1]研究表明CD2AP可通過其C端與nephrin胞內(nèi)C區(qū)相互連接，兩者在足細(xì)胞中一起表達(dá)，分布部位基本一致，在nephrin和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架間起橋梁作用，起到穩(wěn)定SD的作用。podocin為脂質(zhì)筏相關(guān)蛋白家族的新成員，電鏡下可見podocin面對(duì)裂孔隔膜, 兩末端插于足突的胞質(zhì)中。CD2AP可與podocin在足細(xì)胞內(nèi)SD處發(fā)生連接，正常情況下它們?cè)谧阃缓土严犊啄さ男纬芍邪l(fā)揮著協(xié)同作用，CD2AP蛋白表達(dá)的減少，可同時(shí)伴podocin蛋白表達(dá)降低[9]，它們的減少導(dǎo)致了足細(xì)胞發(fā)育停滯。Asanuma等[10]研究表明, CD2AP、nephrin與podocin定位于SD區(qū)。CD2AP是使nephrin、podocin與足細(xì)胞細(xì)胞骨架相連的重要組成部分，三者通過彼此間的相互作用形成nephrin-CD2AP-podocin復(fù)合物，將裂孔隔膜鉚釘于足細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架上，以維持濾過膜正常濾過功能，三者僅一種成分的改變即可導(dǎo)致大量蛋白尿。

1.5CD2AP參與信號(hào)傳導(dǎo)目前研究表明與SD有關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)通路主要有PI3K/AKT和MAPK通路，MAPK家族成員主要有p38MAPK及ERK1/2，PI3K/AKT和ERK1/2活性增加可以抑制細(xì)胞凋亡, 而p38MAPK則促細(xì)胞凋亡。在正常足細(xì)胞、GTF-β刺激下CD2AP通過增加PI3K/AKT和ERK1/2的活性抑制足細(xì)胞的凋亡[11];CD2AP基因敲除小鼠足細(xì)胞在TGF-β刺激下足細(xì)胞AKT活性明顯降低而p38MAPK活性顯著增加及足細(xì)胞更易凋亡[8]。

2中醫(yī)藥上調(diào)CD2AP研究的現(xiàn)狀

減少CD2AP表達(dá)的下降，或上調(diào)CD2AP可減少足細(xì)胞損傷，延緩腎臟病進(jìn)展。中醫(yī)藥治療對(duì)于上調(diào)CD2AP的研究有民間驗(yàn)方、藥食同源、中藥復(fù)方、成方中藥等方面，研究證實(shí)中醫(yī)藥能上調(diào)CD2AP。

2.1民間驗(yàn)方蟾蜍作為民間驗(yàn)方有使腎病模型大鼠CD2AP上調(diào)的作用。林麗等[12]用蟾蜍干預(yù)阿奇霉素腎病大鼠，造模出現(xiàn)三高一低腎病綜合征表現(xiàn)后發(fā)現(xiàn)CD2AP在腎小球足細(xì)胞的表達(dá)明顯下降，蟾蜍及蟾蜍加強(qiáng)的松干預(yù)后其表達(dá)上調(diào)，同時(shí)蛋白尿亦明顯減少。

2.2藥食同源祖國(guó)醫(yī)學(xué)有藥食同源之說，王鑫等[13]研究發(fā)現(xiàn)鯉魚赤小豆湯干預(yù)阿霉素腎病大鼠后發(fā)現(xiàn)Nephrin與CD2AP的蛋白表達(dá)均有不同程度上升，并有一定的量效關(guān)系，高劑量組上調(diào)Nephrin與CD2AP更加明顯。徐常杰等[14]研究發(fā)現(xiàn)阿霉素腎病大鼠CD2AP和Nephrin蛋白的表達(dá)較正常大鼠明顯減少，經(jīng)鯉魚湯干預(yù)后，其表達(dá)均有不同程度上調(diào)，還提高了血清總蛋白、白蛋白水平，減少了尿中蛋白質(zhì)排泄。

2.3中藥復(fù)方郭明慧等[15]在誘導(dǎo)的阿霉素腎病大鼠中發(fā)現(xiàn)其腎小球CD2AP、Cortactin、Arp2/3復(fù)合體的表達(dá)均減少，進(jìn)而可能影響了足細(xì)胞骨架蛋白，出現(xiàn)足細(xì)胞融合，而在溫陽(yáng)活血利水方治療4周后改善了CD2AP、Cortactin、Arp2/3復(fù)合體表達(dá)的下降，療效與強(qiáng)的松組類似。這些蛋白表達(dá)與分布的改善，有助于actin骨架蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，改善足突融合，維持腎小球?yàn)V過屏障的形態(tài)和功能完整，減少蛋白尿。袁軍等[16]用阿霉素誘導(dǎo)一種類似人類微小病變腎病模型后分別用溫陽(yáng)活血方和強(qiáng)的松治療,治療4周后模型組較正常組CD2AP、synaptopodin表達(dá)顯著下降(均P<0.01)，而中藥組和強(qiáng)的松組較模型組CD2AP、synaptopodin表達(dá)顯著上升(CD2AP與模型組比較P<0.05；synaptopodin與模型組比較P<0.05)，提示中藥組和強(qiáng)的松組可以在一定程度上減少CD2AP、synaptopodin表達(dá)的下降。王竹等[17]研究發(fā)現(xiàn)阿霉素腎病大鼠中Desmin mRNA、CD2AP mRNA及蛋白表達(dá)均升高，經(jīng)祛風(fēng)通絡(luò)方干預(yù)后，Desmin mRNA、CD2AP mRNA及相關(guān)蛋白表達(dá)均出現(xiàn)了下調(diào)，并呈一定的量效關(guān)系，高劑量組下調(diào)更明顯。

2.4成方中藥王立范等[18]研究亦表明阿霉素腎病大鼠模型組中Nephrin mRNA、CD2AP mRNA均高于正常組的表達(dá)，治療組分為洛汀新組、腎炎消白顆粒低劑量組、腎炎消白顆粒高劑量組，干預(yù)后而各治療組腎組織中Nephrin mRNA、CD2AP mRNA均較模型組表達(dá)減少，表明腎炎消白方及洛汀新可能通過穩(wěn)定足細(xì)胞上的nephrin、CD2AP蛋白分子，維護(hù)腎小球?yàn)V過膜的正常結(jié)構(gòu)，從而達(dá)到治療蛋白尿的作用。趙宗江[19]在研究糖腎平對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞nephrin與CD2AP蛋白及其mRNA表達(dá)的影響時(shí)，將造模成功后的大鼠隨機(jī)分為模型組、厄貝沙坦組、糖腎平小、大劑量組干預(yù)14周。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組與正常組相比nephrin和CD2AP蛋白及其mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)(P<0.01);與模型組相比厄貝沙坦、糖腎平干預(yù)后糖尿病大鼠腎小球足細(xì)胞nephrin和CD2AP蛋白及其mRNA水平表達(dá)明顯增加(P<0.05)，提示糖腎平可能通過維持足細(xì)胞裂孔隔膜蛋白nephrin和CD2AP的穩(wěn)定性，從而發(fā)揮對(duì)DN腎臟的保護(hù)作用。耿建國(guó)等[20]研究芪衛(wèi)顆粒對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞CD2AP表達(dá)的影響時(shí)，將造模成功后的大鼠隨機(jī)分為模型組、西藥組以及芪衛(wèi)顆粒組干預(yù)24周。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，模型組腎組織足細(xì)胞CD2AP表達(dá)顯著下降，24h尿微量白蛋白濃度顯著升高；藥物干預(yù)后各給藥組腎組織CD2AP表達(dá)明顯上調(diào)，24h尿微量白蛋白濃度明顯下降，說明芪衛(wèi)顆粒能夠上調(diào)CD2AP在腎組織的表達(dá)，降低DN大鼠尿微量白蛋白排泄，延緩DN的發(fā)生發(fā)展。

3展望

CD2AP在蛋白尿發(fā)生及腎臟病緊張中起重要作用，中醫(yī)藥能夠上調(diào)CD2AP的表達(dá)，延緩或阻止腎臟病進(jìn)展，但其作用機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，充分發(fā)揮中醫(yī)藥治療腎臟病的優(yōu)勢(shì)，將會(huì)取得更好的臨床治療效果。

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(收稿日期：2015.09.06)

【中圖分類號(hào)】R692

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2015)24-0019-02