參芎葡萄糖注射液安全性試驗(yàn)研究

鄭　林，董永喜，謝玉敏，張曉紅，董　莉，李勇軍

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院;2.貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;3.民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心，貴州貴陽　550004)

Safety evaluation of Shenxiong glucose injection

ZHENG Lin1，2，DONG Yong-xi1，3，XIE Yu-min1，2，ZHANG Xiao-hong1，2，DONG Li1，2，LI Yong-jun1，3(1.School of Pharmacy，Guiyang Medical College;2.Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics; 3.Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and TCM，Ministry of Education，Guiyang 550004，China)

中國圖書分類號: R-332; R282.71; R541.405

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參芎葡萄糖注射液安全性試驗(yàn)研究

鄭林1，2，董永喜1，3，謝玉敏1，2，張曉紅1，2，董莉1，2，李勇軍1，3

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院;2.貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;3.民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心，貴州貴陽550004)

Safety evaluation of Shenxiong glucose injection

ZHENG Lin1，2，DONG Yong-xi1，3，XIE Yu-min1，2，ZHANG Xiao-hong1，2，DONG Li1，2，LI Yong-jun1，3
(1.School of Pharmacy，Guiyang Medical College;2.Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics; 3.Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and TCM，Ministry of Education，Guiyang 550004，China)

中國圖書分類號: R-332; R282.71; R541.405

關(guān)鍵詞:參芎葡萄糖注射液;安全性;過敏性;刺激性;溶血性;異常毒性

Key words:Shenxiong glucose injection; safety; hypersensitivity; irritation; hemolysis;abnormal toxicity

參芎葡萄糖注射液是由丹參和鹽酸川芎嗪配伍組成的中藥注射劑，臨床用于冠心病心絞痛等缺血性血管疾病的治療［1］。結(jié)合國家SFDA《關(guān)于開展中藥注射劑安全性再評價(jià)工作的通知》，為評價(jià)參芎葡萄糖注射液安全性，本文參照《中藥、天然藥物免疫毒性(過敏性、光變態(tài)反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》、《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》和有關(guān)文獻(xiàn)［2－3］對其過敏性、刺激性、溶血性以及異常毒性進(jìn)行了研究，為做好參芎葡萄糖注射液的安全性再評價(jià)工作奠定基礎(chǔ)。

1　材料

1.1試藥與試劑參芎葡萄糖注射液(規(guī)格100 ml:鹽酸川芎嗪100 mg，丹參相當(dāng)于丹參素20 mg，貴州景峰注射劑有限公司提供，批號20130979，20131104，20131211)，參芎葡萄糖濃溶液(規(guī)格100 ml:鹽酸川芎嗪1800 mg，丹參相當(dāng)于丹參素360 mg，貴州景峰注射劑有限公司提供，批號

20131103)，卵蛋白(Sigma公司，批號A5253)，5%葡萄糖溶液(貴州科倫藥業(yè)有限公司，批號B130321)。

1.2實(shí)驗(yàn)動物日本大耳白兔，體質(zhì)量2.5～3.0 kg; SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g;豚鼠，體質(zhì)量300～400 g; KM小鼠，體質(zhì)量18～22 g;貴陽醫(yī)學(xué)院動物中心提供，使用許可證號: SCXK(黔) 2012－001。

2　方法［2－3］

2.1主動全身過敏試驗(yàn)取豚鼠40只，隨機(jī)分4組，陰性對照組(5%葡萄糖溶液)、陽性對照組(0.5%卵蛋白，2.5 mg/只)、參芎葡萄糖濃溶液高劑量組(鹽酸川芎嗪30 mg·kg－1，丹參素6 mg·kg－1)、參芎葡萄糖濃溶液低劑量組(鹽酸川芎嗪15 mg·kg－1，丹參素3 mg·kg－1)。腹腔注射相應(yīng)藥物致敏，各0.5 ml，共注射3次。然后將其均分為2組，分別在末次注射后第14日和第21日，由足背靜脈注射相應(yīng)藥物各1 ml，檢驗(yàn)受試物的過敏反應(yīng)。

2.2被動皮膚過敏試驗(yàn)取8只大鼠，隨機(jī)分成4組，分組同“主動全身過敏試驗(yàn)”。腹腔注射相應(yīng)藥物致敏，制備含IgE的血清。另取40只大鼠，同前隨機(jī)分成4組。取上述含IgE的血清，用生理鹽水稀釋為1∶2、1∶8，分別注射于各組大鼠去毛各點(diǎn)。48 h后，各組尾靜脈注射進(jìn)行激發(fā)。30 min后處死動物，剪下背部皮膚測量藍(lán)斑大小，并測定藍(lán)斑OD值，判斷過敏情況。

2.3血管刺激性試驗(yàn)取日本大耳白兔4只，每只白兔右側(cè)耳緣靜脈注射參芎葡萄糖濃溶液，左側(cè)耳緣靜脈注射等容積5%葡萄糖溶液做陰性對照，給藥體積2.5 ml·kg－1，每天1次，連續(xù)5 d。末次給藥后48 h對動物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察，處死2只動物，取注射部位血管和周圍組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。剩下2只動物繼續(xù)觀察14 d后再處死，同上進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

2.4肌肉刺激性試驗(yàn)取日本大耳白兔4只，每只白兔右側(cè)股四頭肌處注射參芎葡萄糖濃溶液1 ml;另側(cè)相應(yīng)部位注射等容積5%葡萄糖溶液作為對照。48 h后處死家兔，解剖股四頭肌，觀察注射部位肌肉刺激反應(yīng)。并剪取肌肉組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2.5溶血性試驗(yàn)日本大耳白兔心臟取血20 ml，制備2%的紅細(xì)胞混懸液。取潔凈試管分別加入紅細(xì)胞混懸液、5%葡萄糖溶液、蒸餾水和參芎葡萄糖注射液，在37℃恒溫水浴中溫育3 h，觀察溶血與紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象。

2.6異常毒性檢查取小鼠15只，分為3組。依法(《中國藥典》2010年版一部附錄XIII E)檢查，分別尾靜脈注射3個(gè)批號參芎葡萄糖注射液各0.5 ml，觀察記錄小鼠即時(shí)反應(yīng)及72 h內(nèi)動物所發(fā)生的異常反應(yīng)及死亡情況。

3　結(jié)果

3.1主動全身過敏試驗(yàn)陽性對照組豚鼠均出現(xiàn)明顯的過敏反應(yīng)，過敏反應(yīng)呈極強(qiáng)陽性。參芎葡萄糖濃溶液高、低劑量組和陰性對照組豚鼠均未出現(xiàn)過敏反應(yīng)。

3.2被動皮膚過敏試驗(yàn)參芎葡萄糖濃溶液高、低劑量組和陰性對照組大鼠背部皮膚均未見明顯藍(lán)斑。而陽性對照組出現(xiàn)明顯藍(lán)斑。

3.3血管刺激性試驗(yàn)給藥過程中，家兔左耳和右耳注射局部血管均未見明顯紅腫現(xiàn)象，組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示各組家兔注射部位血管及周圍血管組織結(jié)構(gòu)完整，未見組織變性、壞死、炎細(xì)胞浸潤、血栓及膿腫形成等病變。

3.4肌肉刺激性試驗(yàn)家兔給藥部位股四頭肌未見明顯異常。病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示對照側(cè)和給藥側(cè)注射部位肌纖維呈均勻分布，未見充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤。

3.5溶血性試驗(yàn)蒸餾水陽性對照組溶液完全溶血，溶液呈紅色透明，其余各組上清液無色澄明，紅細(xì)胞全部下沉，經(jīng)振搖后紅細(xì)胞能均勻分散。

3.6異常毒性檢查全部小鼠在給藥后72 h內(nèi)未見死亡，也未見明顯生理異常表現(xiàn)。

4　討論

2009年國家食品藥品監(jiān)督管理局以“完善研究”、“規(guī)范提高”、“淘汰落后”為原則，在全國啟動了中藥注射劑安全性再評價(jià)工作。參芎葡萄糖注射液為90年代末研制的中藥注射劑，由于受當(dāng)時(shí)科研水平和技術(shù)條件的限制，該品的生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和安全性評價(jià)存在欠規(guī)范和不完善方面，因此，有必要開展產(chǎn)品的上市后再評價(jià)研究。貴州景峰注射劑有限公司現(xiàn)已對參芎葡萄糖注射液生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制進(jìn)行了完善提高［4］。本文參照中藥、天然藥物非臨床安全性評價(jià)的相關(guān)指導(dǎo)原則，進(jìn)一步開展了該品的安全性試驗(yàn)研究，結(jié)果表明本品無過敏性、局部刺激性和溶血性，異常毒性檢查也未見異常，說明參芎葡萄糖注射液在其臨床使用劑量下是安全的，為臨床安全用藥提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn):

［1］陳興堅(jiān)，劉建紅.參芎葡萄糖注射液的臨床應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2010，5(13) :247－9.

［1］Chen X J，Liu J H.Clinical application of Shenxiong glucose injection［J］.China Prac Med，2010，5(13) :247－9.

［2］原歡歡，張繼芬，王琴，等.梓葛凍干粉針的局部刺激性、過敏性、溶血性和急性毒性研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2013，29 (6) :880－1.

［2］Yuan H H，Zhang J F，Wang Q，et al.Focal irritant，allergia，haemolyticus and acute toxicity of Catalpol and Puerarin for injection［J］.Chin Pharmacol Bull，2013，29(6) :880－1.

［3］王永勝，張輝，李金玲，等.銀鈴含片的安全性試驗(yàn)研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2012，28(2) :295－6.

［3］Wang Y S，Zhang H，Li J L，et al.Study on toxicity of Yin-Ling troche［J］.Chin Pharmacol Bull，2012，28(2) :295－6.

［4］鄭林，龐秀清，蘭燕宇，等.UFLC法同時(shí)測定參芎葡萄糖注射液中6種主要成分［J］.中成藥，2012，34(7) :1276－9.

［4］Zheng L，Pang X Q，Lan Y Y，et al.Simultaneous determination of six essential components in Shenxiong Glucose Injection by UFLC ［J］.Chin Tradit Patent Med，2012，34(7) :1276－9.

作者簡介:鄭林(1981－)，女，博士生，副教授，研究方向:中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制，Tel: 0851-6908468，E-mail: mailofzl@126.com;李勇軍(1973－)，男，教授，研究方向:中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及新藥開發(fā)，通訊作者，Tel: 0851-6908468，E-mail: liyongjun026@126.com

基金項(xiàng)目:國家科技支撐計(jì)劃課題(No 2013BAI11B01) ;貴州省科技重大專項(xiàng)項(xiàng)目(黔科合重大專項(xiàng)字［2011］6019號) ;貴陽市科技計(jì)劃項(xiàng)目(筑科合同［2011401］社6－2號)

收稿日期:2015－01－05，修回日期:2015－02－20

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號:1001－1978(2015) 06－0887－02

doi:10.3969/j.issn.1001－1978.2015.06.031