茶條槭葉石油醚部位化學(xué)成分研究△

畢武，何春年*，彭勇，劉延澤，肖培根*

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193)

·基礎(chǔ)研究·

茶條槭葉石油醚部位化學(xué)成分研究△

畢武1，2，何春年1，2*，彭勇1，2，劉延澤1，2，肖培根1，2*

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193)

目的：研究苦津茶來源植物茶條槭葉石油醚部位的化學(xué)成分。方法：應(yīng)用多種色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和波譜參數(shù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從茶條槭葉80%乙醇提取物的石油醚萃取部位中分離得到9個(gè)化合物，分別鑒定為蒲公英賽醇(1)，豆甾醇-β-D-葡萄糖苷(2)，胡蘿卜苷(3)，L-2-O-chiro-肌醇(4)，楊梅萜二醇(5)，豆甾醇(6)，沒食子酸乙酯(7)，羽扇豆醇(8)，β-谷甾醇(9)。結(jié)論：化合物1、2、5、8為首次從該屬植物中分離得到，化合物1-3、5、6、8為首次從該植物中分離得到。

苦津茶；茶條槭；化學(xué)成分

茶條槭AcerginnalaMaxim為槭樹科槭屬植物，資源豐富，分布廣泛，主要分布于華北、東北及陜西、甘肅、河南等地，其嫩葉在民間作為苦津茶飲用?？嘟虿栉段⒖?、微甘，性寒，歸肝經(jīng)，具有清肝明目的功效，主治風(fēng)熱頭痛、肝熱目赤、視物昏花等癥[1]。

苦津茶作為茶飲使用已經(jīng)有2000多年的歷史，目前仍在民間廣泛應(yīng)用，安徽南部、河南、江蘇和東北等地市場上現(xiàn)有流通。苦津茶的化學(xué)成分和藥理活性研究報(bào)道相對(duì)較少，研究也不夠深入。苦津茶主要含有多酚類成分，包括鞣質(zhì)和黃酮等類化合物；主要有抗氧化、抗腫瘤、降血糖和抗菌作用。此外，在工業(yè)上它還是提取沒食子酸的重要資源[1]。

本課題組基于大鼠正常腺上皮經(jīng)畸變隱窩灶(ACF)模型，實(shí)驗(yàn)12周后發(fā)現(xiàn)，通過給予苦津茶能夠顯著減少結(jié)腸部位ACF的發(fā)生，包括顯著減少變性隱窩總數(shù)(AC)和平均隱窩數(shù)/病灶，表明苦津茶對(duì)結(jié)直腸癌癌前病變有較好的干預(yù)作用，對(duì)結(jié)直腸癌的預(yù)防有潛在價(jià)值(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表)。為了充分利用這一植物資源以及明確該茶飲發(fā)揮保健作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，我們對(duì)苦津茶來源植物茶條槭葉的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，從其80%乙醇提取物的石油醚萃取部位中分離并鑒定了9個(gè)化合物，報(bào)道如下。

1 儀器與材料

Bruker AV-600型核磁共振波譜儀；X6型顯微熔點(diǎn)測定儀(北京泰克儀器有限公司)。柱色譜硅膠(200～300，300～400目)及薄層色譜硅膠GF254(青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20(瑞典Pharmacia公司)；所用試劑及溶劑均為分析純。

茶條槭于2010年8月采自吉林省，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所肖培根研究員鑒定為槭樹科植物茶條槭AcerginnalaMaxim.的干燥葉。植物標(biāo)本保存于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所親緣學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室(樣品編號(hào)：2012-KJC-09)。

2 提取與分離

稱取茶條槭的干燥葉2.4 kg，用5倍量80%乙醇水溶液冷浸提取4次，提取液減壓濃縮至無醇味，加適量水使浸膏分散溶解，用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，分別得到石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水等部位，對(duì)各組分進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，結(jié)果顯示石油醚部位具有較好的活性，因此，對(duì)石油醚部位進(jìn)行了分離純化。

石油醚浸膏(77.6 g)經(jīng)硅膠柱色譜(200～300目)，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(100∶0～1∶1)，流分經(jīng)TLC檢測后合并得到AF1～AF17等17個(gè)組分以及化合物1(200 mg)、2(20 mg)和3(30 mg)。AF17組分繼續(xù)經(jīng)硅膠柱色譜(300～400目)，石油醚-乙酸乙酯(8∶2～1∶1)梯度洗脫，所得亞組分經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜純化，三氯甲烷-甲醇(5∶5)洗脫，得到化合物4(30 mg)。AF7組分經(jīng)硅膠柱色譜(300～400目)，石油醚-乙酸乙酯(9∶1～1∶1)梯度洗脫，所得亞組分經(jīng)乙酸乙酯反復(fù)洗滌和三氯甲烷重結(jié)晶得到化合物5(25 mg)、6(20 mg)、8(23 mg)。AF16組分繼續(xù)經(jīng)硅膠柱色譜(300～400目)，石油醚-乙酸乙酯(8∶2～1∶1)梯度洗脫，然后經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜純化，甲醇洗脫，最后得到化合物7(50 mg)。AF12組分繼續(xù)經(jīng)硅膠柱色譜(300～400目)，石油醚-乙酸乙酯(9∶1～1∶1)梯度洗脫，乙酸乙酯重結(jié)晶，得到化合物9(21 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ：0.80(3H，s，H-23)，0.82(3H，s，H-24)，0.91(3H，s，H-30)，0.93(3H，s，H-28)，0.95(3H，s，H-29)，0.98(3H，s，H-26)，1.09(3H，s，H-25)，3.20(1H，dd，J=4.2，11.4 Hz，H-3)，5.53(1H，dd，J=3.0，8.4 Hz，H-15)；13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ：15.6(C-24)，15.6(C-25)，17.7(C-11)，19.0(C-6)，21.5(C-30)，26.1(C-27)，27.4(C-2)，28.2(C-23)，29.0(C-20)，30.0(C-28)，30.1(C-26)，33.3(C-22)，33.6(C-29)，33.9(C-21)，35.3(C-7)，36.0(C-12)，36.9(C-16)，37.8(C-10)，37.9(C-13)，38.0(C-17)，38.2(C-1)，39.0(C-8)，39.2(C-4)，41.6(C-19)，49.0(C-9)，49.5(C-18)，55.8(C-5)，79.3(C-3)，117.1(C-15)，158.3(C-14)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物1為蒲公英賽醇(taraxerol)。

化合物2：白色粉末。1H-NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ：0.65(3H，s，H-18)，0.74～0.91(12H，m，H-21，26，27，29)，0.96(3H，s，H-19)，3.42(1H，m，H-3)，4.22(1H，d，J=7.2 Hz，Glc-H-1)，5.03(1H，dd，J=8.4，15 Hz，H-23)，5.15(1H，dd，J=8.4，15 Hz，H-22)，5.33(1H，d，J=4.8 Hz，H-6)；13C-NMR(DMSO-d6，150 MHz)δ：11.8(C-29)，12.1(C-18)，18.8(C-26)，19.1(C-19)，19.7(C-27)，20.9(C-21)，21.1(C-11)，23.8(C-15)，25.5(C-28)，28.7(C-16)，31.3(C-25)，31.3(C-8)，31.4(C-7)，36.2(C-10)，36.2(C-23)，36.8(C-1)，39.1(C-12)，40.1(C-20)，41.7(C-4)，41.8(C-13)，49.6(C-24)，50.5(C-9)，55.3(C-17)，55.4(C-23)，56.2(C-14)，61.1(Glc-C-6)，70.1(Glc-C-4)，73.4(Glc-C-2)，76.7(Glc-C-3)，76.7(Glc-C-5)，76.9(C-3)，100.8(Glc-C-1)，121.2(C-6)，128.8(C-23)，138.0(C-22)，140.4(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物2為豆甾醇-β-D-吡喃葡萄糖苷(stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物3：白色粉末。1H-NMR(DMSO-d6，600 MHz)和13C-NMR(DMSO-d6，150 MHz)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物3為胡蘿卜苷(daucosterol)。

化合物4：白色粉末。1H-NMR(D2O，600 MHz)δ：4.28(1H，t，J=3.6 Hz，H-1)，4.07(1H，t，J=3.6 Hz，H-6)，3.75(1H，dd，J=3，9.6Hz，H-5)；3.62(2H，m，H-3，4)，3.46(3H，s，H-OCH3)，3.41(1H，dd，J=3，9 Hz，H-2)；13C-NMR(D2O，150 MHz)δ：67.1(C-1)，80.1(C-2)，71.9(C-3)，72.8(C-4)，70.3(C-5)，71.3(C-6)，56.9(-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物4為L-2-O-甲基-chiro-肌醇(L-2-O-methyl-chiro-inositol)。

化合物5：白色粉末。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ：5.56(1H，dd，J=3，8.4 Hz，H-15)，3.22(1H，dd，J=11.4，4.2 Hz，H-3)，1.12(3H，s)，1.01(3H，s)，0.98(3H，s)，0.96(3H，s)，0.94(3H，s)，0.90(3H，s)，0.83(3H，s)；13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ：158.3(C-14)，117.1(C-15)，79.3(C-3)，63.3(C-28)，55.7(C-5)，49.5(C-18)，48.9(C-9)，41.5(C-19)，40.5(C-4)，39.2(C-8)，39.0(C-17)，38.0(C-13)，37.9(C-1)，37.8(C-10)，36.0(C-7)，33.5(C-21)，33.3(C-29)，33.0(C-16)，30.1(C-12)，29.9(C-26)，29.0(C-20)，28.2(C-22)，27.3(C-2)，26.1(C-23)，25.9(C-27)，21.5(C-30)，19.0(C-6)，17.7(C-11)，15.6(C-25)，15.6(C-24)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物5為楊梅萜二醇(myricadiol)。

化合物6：白色針晶。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ：5.38(1H，H-6)，5.18(1H，dd，J=15，8.4 Hz，H-22)，5.04(1H，dd，J=15，9 Hz，H-23)，3.55～3.56(1H，m，H-3)，0.71(1H，s，H-18)，1.06(1H，s，H-29)；13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ：141.0(C-5)，138.5(C-22)，129.5(C-23)，121.9(C-6)，72.0(C-3)，57.0(C-14)，56.3(C-17)，51.4(C-24)，50.3(C-9)，42.5(C-4)，42.4(C-13)，39.9(C-12)，37.5(C-1)，36.7(C-10)，36.3(C-20)，32.1(C-7，8)，31.9(C-2，25)，29.1(C-16)，28.4(C-28)，24.5(C-15)，23.3(C-27)，21.4(C-26)，21.3(C-11，21)，19.2(C-19)，12.2(C-18)，12.1(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物6為豆甾醇(stigmasterol)。

化合物7：無色羽毛狀結(jié)晶。1H-NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ：9.24(2H，s，-OH)，8.93(1H，s，-OH)，6.94(2H，d，H-2，6)，4.20(2H，q，J=7.2 Hz，-CH2-)，1.27(3H，t，J=7.2 Hz，-CH3)；13C-NMR(DMSO-d6，150 MHz)δ：165.8(-COOH)，145.5(C-3，C-5)，138.3(C-4)，119.6(C-1)，108.4(C-2，C-6)，60.0(-CH2-)，14.2(-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物7為沒食子酸乙酯(ethyl gallate)。

化合物8：白色針晶。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ：0.76(3H，s，H-24)，0.79(3H，s，H-28)，0.83(3H，s，H-25)，0.943(3H，s，H-27)，0.98(3H，s，H-23)，1.03(3H，s，H-26)，1.68(3H，s，H-30)，2.38(1H，td，J=10.8 Hz，6.0 Hz，H-19)，3.19(1H，dd，J=11.4，4.8 Hz，H-3)，4.57(1H，s，H-29a)，4.68(1H，s，H-29b)；13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ：151.2(C-20)，109.5(C-29)，79.2(C-3)，55.5(C-5)，50.7(C-9)，48.5(C-18)，48.2(C-19)，43.2(C-17)，43.0(C-14)，41.1(C-8)，40.2(C-22)，39.1(C-4)，38.9(C-1)，38.3(C-13)，37.4(C-10)，35.8(C-16)，34.5(C-7)，29.8(C-21)，28.2(C-23)，27.7(C-2)，27.6(C-15)，25.4(C-12)，21.1(C-11)，19.5(C-30)，18.5(C-6)，18.2(C-28)，16.3(C-25)，16.2(C-26)，15.6(C-24)，14.8(C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8-9]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物8為羽扇豆醇(lupeol)。

化合物9：白色針晶，10%硫酸乙醇溶液顯紫色。其TLC與β-谷甾醇對(duì)照品的Rf值一致，且混合后熔點(diǎn)不下降。13C-NMR(CDCl3，150 MHz)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物9為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

4 結(jié)果與討論

鑒定的9個(gè)化合物中，1、2、5、8為首次從該屬植物中分離得到，化合物1-3、5、6、8為首次從該植物中分離得到。

近年來研究表明，一些五環(huán)三萜類化合物具有較好的抗腫瘤活性[11-12]。本文從茶條槭葉中分離得到的兩個(gè)蒲公英賽烷類五環(huán)三萜化合物蒲公英賽醇(1)和楊梅萜二醇(5)的抗腫瘤活性研究僅有初步報(bào)道：蒲公英賽醇對(duì)由對(duì)苯二甲酸(TPA)所致EB病毒早期抗原(EBV-EA)腫瘤細(xì)胞系顯示出很強(qiáng)的細(xì)胞毒活性[13]；對(duì)胃癌AGS細(xì)胞增殖具有顯著的抑制活性[14]。楊梅萜二醇對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖具有一定的抑制活性[15]。因此，為了進(jìn)一步明確茶條槭葉及其所含化合物的抗腫瘤活性，我們對(duì)化合物1和5進(jìn)行了初步的抗腫瘤活性篩選?；衔?在濃度為50 μmol·L-1時(shí)，對(duì)肺癌A549細(xì)胞和乳腺癌BT20細(xì)胞增殖的抑制率分別為-9.8%和29.6%，濃度為100 μmol·L-1時(shí)，抑制率分別為-1.1%和39.5%；化合物5在濃度為50 μmol·L-1時(shí)，對(duì)這兩種細(xì)胞增殖的抑制率分別為5.3%和37.1%，濃度為100 μmol·L-1時(shí)，抑制率分別為11.8%和45.1%。結(jié)果表明，化合物1和5對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制作用較弱，對(duì)BT20細(xì)胞增殖均具有較好的抑制作用。

此外，在分離過程中，我們發(fā)現(xiàn)茶條槭葉中化合物1的含量較高，可作為提取該化合物的重要資源。對(duì)茶條槭葉其他萃取部位(三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水)的化學(xué)成分分離鑒定也正在進(jìn)行中。

[1] 何春年，彭勇，肖偉，等.苦津茶的研究進(jìn)展及應(yīng)用歷史[J].中國現(xiàn)代中藥，2012，14(12)：68-72.

[2] 韻小娟.海南厚皮樹的化學(xué)成分及藥理活性研究[D].?？冢汉Ｄ蠋煼洞髮W(xué)，2012：32.

[3] 郭盛，段金廒，趙金龍，等.酸棗果肉資源化學(xué)成分研究[J].中草藥，2012，43(10)：1905-1909.

[4] Díaz M，González A，Castro-Gamboa I，et al.First record of L-quebrachitol inAllophylusedulis(Sapindaceae)[J].Carbohydr Res，2008，343(15)：2699-2700.

[5] 廖華衛(wèi)，劉恩桂，王定勇.楊梅樹皮的化學(xué)成分研究[J].中南藥學(xué)，2006，4(3)：196-199.

[6] 潘光玉，李雯霏，羅培，等.四方藤中甾體及三萜類成分研究[J].中藥材，2013，36(8)：1274-1277.

[7] 劉延麟.沒食子單體化合物分離鑒定及其藥理活性研究[D].長春：吉林大學(xué)，2009：21.

[8] 白永花，宋啟示.馬比木根的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，26(2)：197-201.

[9] 陳睿.尼泊爾榿木和崖角藤的化學(xué)成分研究[D].成都：中國科學(xué)院成都生物研究所，2007：19.

[10] 石磊，王微，姬志強(qiáng)，等.飛龍掌血石油醚部位的化學(xué)成分研究[J].中國藥房，2012，23(27)：2531-2532.

[11] Shanmugam MK，Nguyen AH，Kumar AP，et al.Targeted inhibition of tumor proliferation，survival，and metastasis by pentacyclic triterpenoids：potential role in prevention and therapy of cancer[J].Cancer Lett，2012，320(2)：158-170.

[12] 胡曉玉，羅應(yīng)剛，陳睿，等.蒲公英賽烷型五環(huán)三萜成分及波譜特征研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007，19(增刊)：170-178.

[13] Taskasaki M，Konoshima T，Tokuda H，et al.Anti-carcinogenic activity of taraxacum plant Ⅱ[J].Biol Pharm Bull，1999，22：606-610.

[14] 譚寶，石海蓮，季光，等.蒲公英萜醇和乙酰蒲公英萜醇對(duì)胃癌細(xì)胞株AGS細(xì)胞周期和凋亡的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2011，9(6)：638-642.

[15] 王斌，姜登釗，李國強(qiáng)，等.檉柳抗腫瘤萜類成分研究[J].中草藥，2009，40(5)：697-701.

ChemicalConstituentsfromPetroleumEtherFractionofAcerginnalaLeaves

BIWu1，2，HEChunnian1，2*，PENGYong1，2，LIUYanze1，2，XIAOPeigen1，2*

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience，PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；2.KeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandResourcesUtilizationofChineseHerbalMedicine，Beijing100193，China)

Objective：To investigate the chemical constituents of the petroleum ether fraction ofAcerginnala.Methods：The chemical constituents were isolated by silica gel and Sephadex LH-20 chromatography，and the structure were identified by NMR and physicochemical properties.Results：Nigh compounds were isolated from the petroleum ether fraction of 80% ethanol extracts of theAcerginnalaleaves and identified as follows：taraxerol(1)，stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside(2)，daucosterol (3)，L-2-O-methyl-chiro-inositol (4)，myricadiol (5)，stigmasterol (6)，ethyl gallate (7)，lupeol (8)，β-sitosterol (9).Conclusion：Compounds1，2，5and8were obtained from the genus of this plant for the first time；compounds1-3，5，6and8were obtained from this plant for the first time.

Ku jin Tea；Acerginnala；chemical constituents.

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.006

2014-11-25)

“十二五”科技部項(xiàng)目支撐計(jì)劃(2012BAI28B002)；“協(xié)和青年基金”和“中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金”(3332013077)

*

肖培根，院士，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥資源與藥用植物親緣學(xué)；Tel：(010)57833166，E-mail：pgxiao@implad.ac.cn；何春年，副研究員，研究方向：藥用植物親緣學(xué)及天然產(chǎn)物化學(xué)；Tel：(010)57833165，E-mail：cnhe@implad.ac.cn