RP－HPLC 法測(cè)定馬齒莧中木犀草素的含量

□郭曉宇

馬齒莧為馬齒莧科一年生草本植物。首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》?！侗静菥V目》記載:“其葉并比如馬齒，而性滑利似莧，故名?！币蛉~青、梗赤、花黃、根白、子黑又稱為五行草、五方草或五行菜。它又稱“長(zhǎng)壽菜”或“長(zhǎng)命菜”，含有非常豐富的人體必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有助于保護(hù)健康，延長(zhǎng)壽命。我國(guó)固有的馬齒莧屬植物共有6 種，即馬齒莧、毛馬齒莧、大花馬齒莧、四瓣馬齒莧、沙生馬齒莧和小琉球馬齒莧，其中馬齒莧最為常見(jiàn)。馬齒莧作為國(guó)家衛(wèi)生部認(rèn)定的既可藥用又可食用的野生植物之一，在我國(guó)各地分布比較廣泛。其有消炎、解暑、利濕、利尿等功能。

據(jù)研究，馬齒莧藥用、食用功能意義重大，使得應(yīng)用前景較為廣泛。目前，雖有文獻(xiàn)報(bào)道研究其化學(xué)成分，但采用高效液相色譜的方法測(cè)定其中成分的鮮有報(bào)道。為提高該物應(yīng)用的安全性，有必要對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。本研究采用RP －HPLC 法測(cè)定其木犀草素的含量，該方法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好，可為其的質(zhì)量監(jiān)測(cè)提供一定的理論依據(jù)。

一、儀器與試藥

(一)儀器。高效液相色譜儀。

(二)試藥。木犀草素對(duì)照品(批號(hào):111520 －200201)，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;馬齒莧(市售);甲醇為色譜純，磷酸為分析純，乙腈為色譜純，水為重蒸水。

圖1 對(duì)照品和樣品HPLC 圖

二、方法與結(jié)果

(一)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備。準(zhǔn)確稱量恒重的木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品10．12mg，放入50ml 容量瓶中，用甲醇作為溶劑進(jìn)行稀釋定容，濃度即為0．2024 mg/mL 的木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

(二)樣品溶液的制備。稱取經(jīng)干燥粉碎的馬齒莧約10g，精密稱定，放于三角瓶中，加入100ml 甲醇，攪拌均勻，超聲處理(250 W，50 kHz)提取30min，冷卻至室溫，加入甲醇補(bǔ)足量，過(guò)濾，留濾液。

(三)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。色譜柱:shim－pack VP－ODS C18(250 mm×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－0．2%磷酸水溶液(60:40);進(jìn)樣量:10 μL;流速1．0 mL/min。各主成分與相鄰峰之間的分離度大于1．5。

分別取對(duì)照品和供試品溶液注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定。(見(jiàn)圖1)

(四)線性關(guān)系。精密稱取木犀草素11．54 mg、放入10ml容量瓶中，定容用甲醇，之后精確吸取0．1 mL、0．5 mL、1 mL、2 mL、5 mL、10 mL 置10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。注入液相色譜儀分析，以峰面積對(duì)濃度做線性回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍表(n= 6)

(五)穩(wěn)定性試驗(yàn)。按照上述條件，取樣品每隔4h 進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣6 次，以測(cè)定其穩(wěn)定性能，測(cè)得木犀草素峰面積的RSD為1．2%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

(六)精密度試驗(yàn)。得出結(jié)果樣品的穩(wěn)定性能在24h 以內(nèi)是良好的。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表

(七)重復(fù)性試驗(yàn)。取樣品6 份，按樣品溶液的制備方法制備溶液并依法測(cè)定，結(jié)果木犀草素含量的RSD 為0．6%(n =6)，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

(八)回收率試驗(yàn)。準(zhǔn)確量取樣品適量，加入適量的標(biāo)準(zhǔn)品，按上述方法處理，計(jì)算回收率，得出本實(shí)驗(yàn)方具有較好的加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

(九)樣品含量測(cè)定。按樣品溶液項(xiàng)下制備方法和色譜條件對(duì)3 批樣品中木犀草素進(jìn)行分析，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品中各成分含量測(cè)定結(jié)果

三、結(jié)果與討論

(一)流動(dòng)相的選擇。本研究分別考察乙腈－水、甲醇－水以及乙腈－0．2%磷酸水溶液作為流動(dòng)相，結(jié)果顯示，乙腈－0．2%磷酸水溶液(60:40)作為流動(dòng)相，色譜峰峰形對(duì)稱，分離效果好，分離度大于1．5，理論塔板數(shù)高，木犀草素拖尾小且無(wú)雜峰干擾。

(二)檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇。本研究選用木犀草素成分的最大吸收波長(zhǎng)為設(shè)定波長(zhǎng)，采用該波長(zhǎng)方法檢測(cè)，分析簡(jiǎn)便、快捷。

(三)提取方法的選擇。本實(shí)驗(yàn)對(duì)提取溶劑、提取溶劑的溶度、提取時(shí)間、提取方法等進(jìn)行綜合考察。結(jié)果表明，樣品提取時(shí)，超聲儀采用功率為250 W，頻率為50 kHz，超聲30 min 提取完全，效果好，操作時(shí)間短，故供試品溶液采用上述制備方法。

［1］姚佳琪，孟娜，宋少江，丁懷偉．馬齒莧的化學(xué)成分［J］．沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007

［2］趙文惠，朱雅琪，李新霞． 反相高效液相色譜法測(cè)定昆侖雪菊中木犀草素的含量［J］．新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014

［3］張亞寧，吳博，楊吉?jiǎng)?，胥秀英，鄭一敏．HPLC 法測(cè)定石韋中木犀草素的含量［J］．藥學(xué)實(shí)踐雜志，2006

［4］梁春輝，張寒，李雪寧．HPLC 法測(cè)定青莢葉中的木犀草素和肉桂酸的含量［J］．應(yīng)用化工，2015