宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變組織中HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立對(duì)宮頸癌防控的意義

夏 林 （江蘇省揚(yáng)中市人民醫(yī)院，江蘇 揚(yáng)中 212200）

宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變組織中HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立對(duì)宮頸癌防控的意義

夏 林 （江蘇省揚(yáng)中市人民醫(yī)院，江蘇 揚(yáng)中 212200）

目的：研究宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中人乳頭瘤病毒（HPV）感染的基因型分布情況及其對(duì)宮頸癌防控的意義．方法：選取我院病理科2010-01／2014-03診斷為宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變的患者164例，其中，宮頸癌患者56例，宮頸上皮內(nèi)瘤變患者108例．所有患者采用基因擴(kuò)增結(jié)合基因芯片技術(shù)對(duì)所有患者的組織標(biāo)本進(jìn)行 HPV基因分型檢測(cè)，共23種基因型，同時(shí)對(duì)患者進(jìn)行相關(guān)臨床資料的收集與整理，進(jìn)行HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立．結(jié)果：108例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的HPV總陽(yáng)性率為82．41%（89／108），一重感染陽(yáng)性率為42．59%（46／108），多重感染陽(yáng)性率為35．19%（38／108）；56例宮頸癌患者 HPV總陽(yáng)性率為87．50%（49／56），一重感染陽(yáng)性率為64．29% （36／56），多重感染陽(yáng)性率為 21．43%（12／56）．結(jié)論：宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變組織中 HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立對(duì)宮頸癌防控的意義重大，值得臨床推廣．

宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；人乳頭瘤病毒；基因型；防控

0 引言

近年來(lái)，宮頸癌的發(fā)病率逐年升高，尤其是在年輕婦女中的發(fā)生率更是明顯升高．研究顯示［1］，2008年全世界宮頸癌總數(shù)約53萬(wàn)，死亡27．5萬(wàn)，發(fā)病率僅次于乳腺癌（138萬(wàn)）及結(jié)直腸癌（57萬(wàn)），其中85%以上的宮頸癌發(fā)生于發(fā)展中國(guó)家．隨著宮頸細(xì)胞學(xué)檢查的廣泛開(kāi)展與應(yīng)用，宮頸癌及癌前病變的發(fā)病率明顯下降，在過(guò)去的60年間，發(fā)達(dá)國(guó)家宮頸癌死亡率減少70%～80%［2］，但在發(fā)展中國(guó)家，至今仍是婦科惡性腫瘤第一位．目前我國(guó)的宮頸癌篩查遵循“三階梯”［3］的診療原則，即細(xì)胞學(xué)檢查（必要時(shí)HPV檢查）——陰道鏡檢查——宮頸活檢．液基細(xì)胞學(xué)的應(yīng)用明顯提高了宮頸癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性，對(duì)檢查陽(yáng)性的患者再行人乳頭瘤病毒（HPV）基因分型檢測(cè)，則可以進(jìn)一步了解其類(lèi)型，更好地篩查出高危型患者．本文就宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中人乳頭瘤病毒（HPV）感染的基因型分布情況及其對(duì)宮頸癌防控的意義進(jìn)行研究，旨在更好地降低宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)生率，提高篩查率．

1 資料和方法

1．1 臨床資料 選取我院病理科 2010-01／2014-03診斷為宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變的患者164例，其中，宮頸癌患者 56例，宮頸上皮內(nèi)瘤變患者 108例．入選標(biāo)準(zhǔn)為：年齡21～83（平均45．4±15．5）歲，排除妊娠及急性生殖道炎癥，24 h內(nèi)無(wú)性生活，48 h內(nèi)無(wú)陰道用藥史，至少半年內(nèi)未進(jìn)行任何宮頸病變?cè)\斷和治療方法處理．

1．2 方法

1．2．1 儀器設(shè)備 基因擴(kuò)增儀：采用新加坡生產(chǎn)的Gene Amp PCR system 2004型；分子雜交儀：采用江蘇省興化市分析儀器廠生產(chǎn)的 FYY-3型；高速冷凍離心機(jī)：采用德國(guó)生產(chǎn)的 Eppendorf 5810 R型；生物安全柜：采用江蘇省蘇州市安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 BHC-1300ⅡA2型；青島海爾有限公司生產(chǎn)的 －20°冰箱．

1．2．2 標(biāo)本采集 標(biāo)本來(lái)源為從 56例宮頸癌患者和108例宮預(yù)上皮內(nèi)瘤變患者身體采集的石蠟組織，將每例患者的組織標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)的處理：首先除去其病變組織周邊多余的石蠟；然后將其石蠟組織切片，切片厚度約4μm，一般切 3～5片石蠟組織；其次用專(zhuān)用的鑷子夾取標(biāo)本放入小離心管中，這個(gè)過(guò)程需要小心謹(jǐn)慎操作．在切石蠟組織前，刀片及鑷子需要使用次氯酸鈉溶液分別擦拭 3次［4］．

1．2．3 檢測(cè)方法 將石蠟組織切片放入離心管中，離心管規(guī)格為 1．5 mL，然后加入 150 μL裂解液，充分振蕩、混勻，在100℃金屬浴中加熱 10 min，隨后立即13 000 r／min離心10 min，待離心后取中間層DNA溶液待用［5］．按說(shuō)明書(shū)對(duì) PCR擴(kuò)增、雜交、孵育以及顯色進(jìn)行規(guī)范操作［5］．

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用 SPSS17．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料的比較采用 t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以 P＜0．05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

2 結(jié)果

108例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的HPV總陽(yáng)性率為82．41%（89／108），一重感染陽(yáng)性率為42．59%（46／108），多重感染陽(yáng)性率為35．19%（38／108）；56例宮頸癌患者HPV總陽(yáng)性率為 87．50%（49／56），一重感染陽(yáng)性率為 64．29%（36／56），多重感染陽(yáng)性率為21．43%（12／56）．

3 討論

宮頸癌是最常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，現(xiàn)宮頸癌居?jì)D科惡性腫瘤第2位．宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有一個(gè)漸進(jìn)的演變過(guò)程［6］：增生期——不典型增生期——原位癌——宮頸癌早期——浸潤(rùn)性宮頸癌．此過(guò)程可能需要5年甚至10年或更長(zhǎng)時(shí)間，因此早發(fā)現(xiàn)、早治療，及時(shí)阻斷宮頸癌進(jìn)展顯得尤為重要．

HPV是一種人乳頭多瘤病毒，是一組球形 DNA病毒，屬于乳頭瘤空泡病毒科 A亞群［3］，其20面體立體對(duì)稱，無(wú)包膜，雙鏈閉環(huán) DNA基因組，呈嗜上皮性．自1977年 Laverty通過(guò)電鏡在宮頸癌組織中觀察到人乳頭瘤病毒顆粒以來(lái)，許多學(xué)者開(kāi)始對(duì)宮頸癌進(jìn)行大量研究，包括它的發(fā)生、發(fā)展以及與HPV感染之間的關(guān)聯(lián)性［4－7］，目前公認(rèn) HPV感染是宮頸癌的主要病因［3］．

本文通過(guò)對(duì)我院宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變患者采用基因擴(kuò)增結(jié)合基因芯片技術(shù)進(jìn)行組織標(biāo)本HPV 23種基因分型檢測(cè)，同時(shí)對(duì)患者進(jìn)行相關(guān)臨床資料的收集與整理，進(jìn)行 HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立．結(jié)果發(fā)現(xiàn)，癌組織中 HPV感染的型別有所不同，既有單一型別，同時(shí)也有混合型別，但以一重感染為主，多重感染為輔，由此說(shuō)明在宮頸癌及其上皮內(nèi)瘤變中較豐富的是一重感染類(lèi)型，而多重感染呈現(xiàn)出不斷增加的趨勢(shì)．

綜上所述，宮頸癌的預(yù)防和篩查意義重大，它是一個(gè)系統(tǒng)工程．由于HPV感染屬于性傳播疾病，所以，對(duì) HPV陽(yáng)性的女性和男性進(jìn)行及時(shí)的管理和治療，并采取一些安全措施，如在性交時(shí)使用安全套等，這樣不但可以降低 HPV的感染率，而且可以在持續(xù)性高危型HPV感染階段采用一些行之有效的干預(yù)措施，同時(shí)在癌前期病變期進(jìn)早診斷早治療，就會(huì)大大造福廣大女性患者．

［1］Arbyn M．Castellsague X，de Sanjose S，et al．Worldwide burden of cervical cancer in 2008［J］．Ann Oncol，2011，22（12）：2675－2686．

［2］Atilgan R，Celik A，Boztosun A，et al．Evaluation of cervical cytological abnormalities in Turkish population［J］．Indian J Pathol Microbiol，2012，55（1）：52－55．

［3］Saslow D，Castle PE，Cox JT，et al．American Cancer Society Guideline for Human Papillomavirus（HPV）vaccine use to prevent cervical Cancer and its precursors［J］．CA Cancer J Clin，2007，57（1）：7－28．

［4］Middleton K，Peh W，Southern S，et al．Organization of human papillomavirus productive cycle during neoplastic progression provides a basis for selection of diagnostic markers［J］．J ViroI，2003，77（19）：10186－10201．

［5］Peh WL，Middleton K，Christensen N，et a1．Life cycle heterogeneity in animal models of human papillomavirus-associated disease［J］．J Virol，2002，76（20）：10401－10416．

［6］Kulmala SM，Syrj?nen SM，Gyllensten UB，et al．Early integration of high-copy HPV16 detectable in women with normal and low-grade cervical cytology and histology［J］．J Clin Pathol，2006，59（5）：513－517．

［7］任曉慧，耿建祥，李 海，等．某市2109例女性宮頸細(xì)胞中HPV基因型別的研究［J］．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（13）：1542－1544．

R737．33

A

2095-6894（2015）02-022-02

2014-07-25；接受日期：2014-08-10

夏 林．E-mail：xialin2010＠163．com