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    宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變組織中HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立對(duì)宮頸癌防控的意義

    2015-01-23 13:55:54江蘇省揚(yáng)中市人民醫(yī)院江蘇揚(yáng)中212200
    關(guān)鍵詞:內(nèi)瘤石蠟乳頭

    夏 林 (江蘇省揚(yáng)中市人民醫(yī)院,江蘇 揚(yáng)中 212200)

    宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變組織中HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立對(duì)宮頸癌防控的意義

    夏 林 (江蘇省揚(yáng)中市人民醫(yī)院,江蘇 揚(yáng)中 212200)

    目的:研究宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中人乳頭瘤病毒(HPV)感染的基因型分布情況及其對(duì)宮頸癌防控的意義.方法:選取我院病理科2010-01/2014-03診斷為宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變的患者164例,其中,宮頸癌患者56例,宮頸上皮內(nèi)瘤變患者108例.所有患者采用基因擴(kuò)增結(jié)合基因芯片技術(shù)對(duì)所有患者的組織標(biāo)本進(jìn)行 HPV基因分型檢測(cè),共23種基因型,同時(shí)對(duì)患者進(jìn)行相關(guān)臨床資料的收集與整理,進(jìn)行HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立.結(jié)果:108例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的HPV總陽(yáng)性率為82.41%(89/108),一重感染陽(yáng)性率為42.59%(46/108),多重感染陽(yáng)性率為35.19%(38/108);56例宮頸癌患者 HPV總陽(yáng)性率為87.50%(49/56),一重感染陽(yáng)性率為64.29% (36/56),多重感染陽(yáng)性率為 21.43%(12/56).結(jié)論:宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變組織中 HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立對(duì)宮頸癌防控的意義重大,值得臨床推廣.

    宮頸癌;宮頸上皮內(nèi)瘤變;人乳頭瘤病毒;基因型;防控

    0 引言

    近年來(lái),宮頸癌的發(fā)病率逐年升高,尤其是在年輕婦女中的發(fā)生率更是明顯升高.研究顯示[1],2008年全世界宮頸癌總數(shù)約53萬(wàn),死亡27.5萬(wàn),發(fā)病率僅次于乳腺癌(138萬(wàn))及結(jié)直腸癌(57萬(wàn)),其中85%以上的宮頸癌發(fā)生于發(fā)展中國(guó)家.隨著宮頸細(xì)胞學(xué)檢查的廣泛開(kāi)展與應(yīng)用,宮頸癌及癌前病變的發(fā)病率明顯下降,在過(guò)去的60年間,發(fā)達(dá)國(guó)家宮頸癌死亡率減少70%~80%[2],但在發(fā)展中國(guó)家,至今仍是婦科惡性腫瘤第一位.目前我國(guó)的宮頸癌篩查遵循“三階梯”[3]的診療原則,即細(xì)胞學(xué)檢查(必要時(shí)HPV檢查)——陰道鏡檢查——宮頸活檢.液基細(xì)胞學(xué)的應(yīng)用明顯提高了宮頸癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性,對(duì)檢查陽(yáng)性的患者再行人乳頭瘤病毒(HPV)基因分型檢測(cè),則可以進(jìn)一步了解其類(lèi)型,更好地篩查出高危型患者.本文就宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中人乳頭瘤病毒(HPV)感染的基因型分布情況及其對(duì)宮頸癌防控的意義進(jìn)行研究,旨在更好地降低宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)生率,提高篩查率.

    1 資料和方法

    1.1 臨床資料 選取我院病理科 2010-01/2014-03診斷為宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變的患者164例,其中,宮頸癌患者 56例,宮頸上皮內(nèi)瘤變患者 108例.入選標(biāo)準(zhǔn)為:年齡21~83(平均45.4±15.5)歲,排除妊娠及急性生殖道炎癥,24 h內(nèi)無(wú)性生活,48 h內(nèi)無(wú)陰道用藥史,至少半年內(nèi)未進(jìn)行任何宮頸病變?cè)\斷和治療方法處理.

    1.2 方法

    1.2.1 儀器設(shè)備 基因擴(kuò)增儀:采用新加坡生產(chǎn)的Gene Amp PCR system 2004型;分子雜交儀:采用江蘇省興化市分析儀器廠生產(chǎn)的 FYY-3型;高速冷凍離心機(jī):采用德國(guó)生產(chǎn)的 Eppendorf 5810 R型;生物安全柜:采用江蘇省蘇州市安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 BHC-1300ⅡA2型;青島海爾有限公司生產(chǎn)的 -20°冰箱.

    1.2.2 標(biāo)本采集 標(biāo)本來(lái)源為從 56例宮頸癌患者和108例宮預(yù)上皮內(nèi)瘤變患者身體采集的石蠟組織,將每例患者的組織標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)的處理:首先除去其病變組織周邊多余的石蠟;然后將其石蠟組織切片,切片厚度約4μm,一般切 3~5片石蠟組織;其次用專(zhuān)用的鑷子夾取標(biāo)本放入小離心管中,這個(gè)過(guò)程需要小心謹(jǐn)慎操作.在切石蠟組織前,刀片及鑷子需要使用次氯酸鈉溶液分別擦拭 3次[4].

    1.2.3 檢測(cè)方法 將石蠟組織切片放入離心管中,離心管規(guī)格為 1.5 mL,然后加入 150 μL裂解液,充分振蕩、混勻,在100℃金屬浴中加熱 10 min,隨后立即13 000 r/min離心10 min,待離心后取中間層DNA溶液待用[5].按說(shuō)明書(shū)對(duì) PCR擴(kuò)增、雜交、孵育以及顯色進(jìn)行規(guī)范操作[5].

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料的比較采用 t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),以 P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

    2 結(jié)果

    108例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的HPV總陽(yáng)性率為82.41%(89/108),一重感染陽(yáng)性率為42.59%(46/108),多重感染陽(yáng)性率為35.19%(38/108);56例宮頸癌患者HPV總陽(yáng)性率為 87.50%(49/56),一重感染陽(yáng)性率為 64.29%(36/56),多重感染陽(yáng)性率為21.43%(12/56).

    3 討論

    宮頸癌是最常見(jiàn)的女性惡性腫瘤,據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),現(xiàn)宮頸癌居?jì)D科惡性腫瘤第2位.宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有一個(gè)漸進(jìn)的演變過(guò)程[6]:增生期——不典型增生期——原位癌——宮頸癌早期——浸潤(rùn)性宮頸癌.此過(guò)程可能需要5年甚至10年或更長(zhǎng)時(shí)間,因此早發(fā)現(xiàn)、早治療,及時(shí)阻斷宮頸癌進(jìn)展顯得尤為重要.

    HPV是一種人乳頭多瘤病毒,是一組球形 DNA病毒,屬于乳頭瘤空泡病毒科 A亞群[3],其20面體立體對(duì)稱,無(wú)包膜,雙鏈閉環(huán) DNA基因組,呈嗜上皮性.自1977年 Laverty通過(guò)電鏡在宮頸癌組織中觀察到人乳頭瘤病毒顆粒以來(lái),許多學(xué)者開(kāi)始對(duì)宮頸癌進(jìn)行大量研究,包括它的發(fā)生、發(fā)展以及與HPV感染之間的關(guān)聯(lián)性[4-7],目前公認(rèn) HPV感染是宮頸癌的主要病因[3].

    本文通過(guò)對(duì)我院宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變患者采用基因擴(kuò)增結(jié)合基因芯片技術(shù)進(jìn)行組織標(biāo)本HPV 23種基因分型檢測(cè),同時(shí)對(duì)患者進(jìn)行相關(guān)臨床資料的收集與整理,進(jìn)行 HPV感染基因型別標(biāo)桿的建立.結(jié)果發(fā)現(xiàn),癌組織中 HPV感染的型別有所不同,既有單一型別,同時(shí)也有混合型別,但以一重感染為主,多重感染為輔,由此說(shuō)明在宮頸癌及其上皮內(nèi)瘤變中較豐富的是一重感染類(lèi)型,而多重感染呈現(xiàn)出不斷增加的趨勢(shì).

    綜上所述,宮頸癌的預(yù)防和篩查意義重大,它是一個(gè)系統(tǒng)工程.由于HPV感染屬于性傳播疾病,所以,對(duì) HPV陽(yáng)性的女性和男性進(jìn)行及時(shí)的管理和治療,并采取一些安全措施,如在性交時(shí)使用安全套等,這樣不但可以降低 HPV的感染率,而且可以在持續(xù)性高危型HPV感染階段采用一些行之有效的干預(yù)措施,同時(shí)在癌前期病變期進(jìn)早診斷早治療,就會(huì)大大造福廣大女性患者.

    [1]Arbyn M.Castellsague X,de Sanjose S,et al.Worldwide burden of cervical cancer in 2008[J].Ann Oncol,2011,22(12):2675-2686.

    [2]Atilgan R,Celik A,Boztosun A,et al.Evaluation of cervical cytological abnormalities in Turkish population[J].Indian J Pathol Microbiol,2012,55(1):52-55.

    [3]Saslow D,Castle PE,Cox JT,et al.American Cancer Society Guideline for Human Papillomavirus(HPV)vaccine use to prevent cervical Cancer and its precursors[J].CA Cancer J Clin,2007,57(1):7-28.

    [4]Middleton K,Peh W,Southern S,et al.Organization of human papillomavirus productive cycle during neoplastic progression provides a basis for selection of diagnostic markers[J].J ViroI,2003,77(19):10186-10201.

    [5]Peh WL,Middleton K,Christensen N,et a1.Life cycle heterogeneity in animal models of human papillomavirus-associated disease[J].J Virol,2002,76(20):10401-10416.

    [6]Kulmala SM,Syrj?nen SM,Gyllensten UB,et al.Early integration of high-copy HPV16 detectable in women with normal and low-grade cervical cytology and histology[J].J Clin Pathol,2006,59(5):513-517.

    [7]任曉慧,耿建祥,李 海,等.某市2109例女性宮頸細(xì)胞中HPV基因型別的研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(13):1542-1544.

    R737.33

    A

    2095-6894(2015)02-022-02

    2014-07-25;接受日期:2014-08-10

    夏 林.E-mail:xialin2010@163.com

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