影響精子的環(huán)境因素與精液稀釋技術(shù)

焦萬(wàn)洪 （四川省鹽邊縣農(nóng)牧局畜牧站 617100）李莉 （四川省鹽邊縣桐子林鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 617100）

影響精子的環(huán)境因素與精液稀釋技術(shù)

焦萬(wàn)洪 （四川省鹽邊縣農(nóng)牧局畜牧站 617100）李莉 （四川省鹽邊縣桐子林鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 617100）

對(duì)環(huán)境因素的分析利于精液稀釋和保存，有利于延長(zhǎng)精子存活的時(shí)間和提高精子的受精能力，在動(dòng)物的繁育、育種和遺傳資源保護(hù)等領(lǐng)域意義重大。

1 影響精子的環(huán)境因素

1.1 溫度

精子在相當(dāng)于體溫即37～38℃時(shí)，可保持正常的代謝和運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，在精子活率檢查時(shí)，最好是在這一溫度下進(jìn)行。當(dāng)溫度繼續(xù)上升時(shí)，精子的代謝提高，運(yùn)動(dòng)加劇并很快死亡。低溫對(duì)精子的影響是比較復(fù)雜的：經(jīng)適當(dāng)稀釋的精液，當(dāng)溫度緩慢降低時(shí)，精子的代謝和運(yùn)動(dòng)會(huì)逐漸減弱，一般在5℃左右基本停止運(yùn)動(dòng)呈休眠狀態(tài)；但是，未經(jīng)處理的精液，即使驟然降低到15～10℃以下時(shí)，也會(huì)使精子遭到傷害，這一現(xiàn)象叫 “冷休克”。為防止這一現(xiàn)象的發(fā)生，對(duì)精液采用稀釋，加入防 “冷休克”物質(zhì) （卵黃、奶等）和緩慢降溫等措施。

1.2 滲透壓

是指由于細(xì)胞膜內(nèi)外的溶液濃度不同，而造成的膜內(nèi)外的壓力差。在高滲透壓溶液中，精子內(nèi)部的水分會(huì)向外滲出而脫水，而使精子干癟死亡；在低滲溶液 （蒸餾水、常水）中，外界溶液的水分會(huì)向精子內(nèi)部滲入，引起精子膨脹變形而死亡。精子最適宜的滲透壓是與精清相等的滲透壓，相當(dāng)于290～360mOsm分子濃度。

1.3 酸堿度

新鮮精液的pH為7，可用pH試紙或特殊的儀器測(cè)知。在一定的限度內(nèi)，酸性環(huán)境對(duì)精子有抑制作用；堿性環(huán)境則有激發(fā)作用。超過(guò)一定限度均會(huì)引起精子的死亡。對(duì)精子適宜的酸堿度應(yīng)為弱酸性、中性到弱堿性 （pH6.9～7.5）。常利用酸抑制的原理，將稀釋精液的pH調(diào)節(jié)到7以下，使精子的運(yùn)動(dòng)和代謝處于抑制狀態(tài)，將精液在室溫下得到保存。另外，在精液的常溫保存過(guò)程中，精子代謝產(chǎn)生的乳酸會(huì)使精液的pH降低，因此在精液的稀釋保存時(shí)要加一定量的緩沖物質(zhì)，以維持pH平衡。

1.4 光照

直射的陽(yáng)光對(duì)精子有激發(fā)作用，加速精子的運(yùn)動(dòng)和代謝，不利于精子的存活，所以精液應(yīng)盡量避免陽(yáng)光直射?；蛘哂米厣Ａ萜魇占唾A存精液。

1.5 常用的化學(xué)藥物

常用的消毒藥物，即使?jié)舛群艿?，也足以殺死精子，?yīng)避免接觸精液。但某些抗菌素類藥物 （青霉素、鏈霉素等以及磺胺類藥物），在適當(dāng)?shù)臐舛认拢坏珜?duì)精子無(wú)毒害作用，而且還可以抑制精液中細(xì)菌的繁殖，對(duì)精液的保存和受精有利。吸煙所產(chǎn)生的煙霧，對(duì)精子有強(qiáng)烈的毒害作用，在精液處理時(shí)要嚴(yán)禁吸煙。

2 精液的稀釋與配制

2.1 稀釋液的組成成分

2.1.1 營(yíng)養(yǎng)類物質(zhì)

用于提供營(yíng)養(yǎng)以補(bǔ)充精子生存和運(yùn)動(dòng)所消耗的能量。常在稀釋液中加入的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有果糖、葡萄糖、卵黃和奶類 （鮮全奶、脫脂乳或純奶粉）等。

2.1.2 保護(hù)類物質(zhì)

2.1.2.1 緩沖物

保持精液適當(dāng)?shù)膒H，利于精子存活。常用緩沖物質(zhì)有檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀等，以及近年來(lái)應(yīng)用的三羥甲基氨基甲烷 （Tris）、乙二胺四乙酸 （EDTA）等。

2.1.2.2 抗凍物

在精液的低溫和冷凍保存過(guò)程中需降溫處理，精子易受冷刺激，常發(fā)生冷休克，造成不可逆的死亡，所以加入一些防冷刺激物質(zhì)有利于精子的生存。常用的抗凍劑為甘油、乙二醇、二甲基亞砜 （DMSO）等，此外卵黃、奶類也具有保護(hù)作用。

2.1.2.3 抗菌物

在精液稀釋液中加入一定劑量的抗生素，以利于抑制細(xì)菌的繁衍。常用的抗生素有青霉素、鏈霉素以及氨苯磺胺等。

2.1.3 其他添加劑

2.1.3.1 酶類

如過(guò)氧化氫酶能分解精子代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，消除其危害，維持精子活率；β-淀粉酶促進(jìn)精子獲能，提高受胎率。

2.1.3.2 激素類

添加催產(chǎn)素、前列腺素可促進(jìn)母畜生殖道的蠕動(dòng)，有利于精子向受精部位運(yùn)行而提高受胎率。

2.1.3.3 維生素類

如維生素B1、維生素B2、維生素B12、維生素C等，能改善精子活率。

2.2 稀釋液種類與配制

2.2.1 稀釋液配方

（1）為擴(kuò)大精液量，增加配種頭數(shù)為目的，將采集的新鮮精液，立即用簡(jiǎn)單的等滲糖類溶液或奶類、生理鹽水作為稀釋液稀釋進(jìn)行輸精的即用稀釋液。

（2）用于精液常溫短期保存，一般pH較低的常溫保存稀釋液。

（3）用于精液低溫保存，具有含卵黃和奶類為主的抗冷休克物質(zhì)的低溫保存稀釋液。

（4）用于精液冷凍保存，其稀釋液成分較為復(fù)雜，具有糖類、卵黃，還有甘油或二甲基亞砜等抗凍劑的冷凍保存稀釋液。

2.2.2 稀釋液的配制

配制稀釋液原則上是現(xiàn)用現(xiàn)配。如隔日使用和短期保存（1周），必須嚴(yán)格滅菌、密封，放在0～5℃冰箱中保存。但卵黃、抗生素、酶類、激素等物質(zhì)，必須在使用前添加。配制稀釋液用水應(yīng)為新鮮、無(wú)菌的蒸餾水或重蒸水。藥品最好用分析純，稱量藥品必須準(zhǔn)確，充分溶解，過(guò)濾，消毒。新鮮的雞蛋卵黃。所有配制用品都必須認(rèn)真清洗和嚴(yán)格消毒。卵黃及抗生素等必須在稀釋液冷卻后加入。

2.3 精液稀釋的方法

凡進(jìn)行保存的精液，必須稀釋，切忌原精保存，而且在采精后，應(yīng)立即稀釋。用于稀釋精液的稀釋液必須和精液是等滲的。精液在稀釋前首先檢查其活率和密度，然后確定稀釋倍數(shù)。將精液與稀釋液同時(shí)置于30℃左右的恒溫箱或水浴鍋內(nèi)，進(jìn)行短暫的同溫處理，稀釋時(shí)，將稀釋液沿器皿壁緩慢加入，并輕輕搖動(dòng)，使之混合均勻。如做高倍稀釋 （20倍以上）時(shí)，分兩步進(jìn)行，先加入稀釋液總量的1/3～1/2，混合均勻后再加入剩余的稀釋液。稀釋完畢后，再進(jìn)行活率密度檢查，如活率與稀釋前一樣，則可進(jìn)行分裝、保存。