延胡索總生物堿類有效部位的研究進(jìn)展

施婷婷，王建新，李希,3

·綜述進(jìn)展·

延胡索總生物堿類有效部位的研究進(jìn)展

施婷婷1，王建新2，李希1,3

延胡索為罌粟科植物Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥根莖，主要有效部位為生物堿類，本文對(duì)延胡索總生物堿在提取、純化、含量測定、藥理學(xué)現(xiàn)代研究方面進(jìn)行綜述，以期為延胡索總生物堿類有效部位的繼續(xù)研究提供一定的參考。

延胡索；有效部位；生物堿

延胡索為罌粟科植物Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥根莖[1]，味辛、苦，性溫，入心、肝、脾經(jīng)；其主要化學(xué)成分為生物堿類，具有活血散瘀、理氣止痛的功效，現(xiàn)代研究表明延胡索總生物堿還具有抗腫瘤、催眠、抗氧化、抗心肌缺血等廣泛的藥理作用[2]。

中藥的療效既不是任何單一活性成分的作用，也不是多種成分活性的簡單相加，與某有效部位綜合作用密不可分，故近年來在中藥材延胡索的研究中，對(duì)總生物堿類有效部位的研究逐漸增多；現(xiàn)有文獻(xiàn)中延胡索乙素作為單一指標(biāo)性成分研究報(bào)道較多，而以延胡索總生物堿類有效部位作為研究指標(biāo)方面總結(jié)較少，本文針對(duì)延胡索總生物堿在提取、純化、含量測定、藥理學(xué)現(xiàn)代研究方面進(jìn)行歸納總結(jié)，為延胡索總生物堿類有效部位的繼續(xù)研究提供參考。

1 延胡索總生物堿的提取

元胡總生物堿的提取常采用乙醇為溶媒，主要方法包括超聲提取法、加熱回流法、動(dòng)態(tài)逆流提取法等[3]，以延胡索總生物堿、干膏收率、延胡索乙素、原阿片堿等為考察指標(biāo)，優(yōu)選各提取法最佳提取工藝。

謝彩娟等[4]以延胡索乙素、原阿片堿二者的含量為指標(biāo)，采用單因素輪換試驗(yàn)法，考察超聲時(shí)間、溫度、功率以及提取溶媒的酸度、用量、體積分?jǐn)?shù)等因素提取的影響，結(jié)果表明超聲時(shí)間60 min，提取溫度40℃，超聲功率350 W，提取溶媒用量30倍，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，醋酸調(diào)pH 3.5時(shí)，延胡索總生物堿提取率較高，而且超聲提取法具有溫度低，時(shí)間短，提取工藝簡便等優(yōu)點(diǎn)，在工業(yè)生產(chǎn)中可以降低耗能，提高經(jīng)濟(jì)效益；與常規(guī)的水煮法、粉末溫浸（80℃）法比較，用粉末超聲法提取延胡索中的有效成分，不僅節(jié)能省時(shí)提取率高，同時(shí)能避免生物堿中熱敏性成分延胡索乙素的破壞[5]。

在實(shí)際生產(chǎn)及實(shí)驗(yàn)研究過程中乙醇加熱回流法提取總生物堿最為常用，侯曉琳等[6]以延胡索乙素為總生物堿的考察指標(biāo)，以正交試驗(yàn)優(yōu)選延胡索總生物堿的最佳提取方法，結(jié)果表明延胡索總生物堿的最佳提取工藝為6倍量80% 的乙醇提取3次 ，每次

1.5小時(shí)；呂子明等[7]以延胡索總生物堿和延胡索乙素為檢測指標(biāo)，采用紫外分光光度法和高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，結(jié)果表明延胡索總生物堿的最佳提取工藝為8倍量60%的乙醇提取 3 次，每次 1.5小時(shí)；陳洪艷等人[8]采用有定性因素的均勻設(shè)計(jì)法，以干膏收率和延胡索乙素的提取率為指標(biāo)，考察乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間、粉碎度五個(gè)因素對(duì)提取效果的影響，結(jié)果表明延胡索提取的最佳工藝為藥材粉碎成最粗粉，用4倍量70%乙醇提取 2 次，每次1h；王緒穎等[9]以延胡索乙素和總生物堿的含量為指標(biāo)，以正交試驗(yàn)優(yōu)選延胡索總生物堿的提取方法，得出延胡索的最佳工藝條件為6倍量50%乙醇，加熱回流提取 3 次，每次 2 h。

現(xiàn)代常用動(dòng)態(tài)逆流提取法對(duì)傳統(tǒng)方法進(jìn)行改進(jìn)，肖杰明等[10]對(duì)動(dòng)態(tài)逆流提取法與滲漉法、回流法比較中發(fā)現(xiàn)，動(dòng)態(tài)逆流提取時(shí)間有所縮短，而且可以連續(xù)批量生產(chǎn)，乙醇用量大幅度減少 ，降低生產(chǎn)成本達(dá)50%以上。

2 延胡索總生物堿的純化

所謂中藥有效部位，是指一味中藥或者復(fù)方中藥提取物中的一類或者幾類化學(xué)成分的含量達(dá)到總提取物的50%以上。目前，大孔樹脂在中草藥有效成分的分離、富集中的應(yīng)用越來越受到人們的重視[11]；延胡索主要有效部位為生物堿類，經(jīng)大孔樹脂提取分離的延胡索生物堿，成品具有體積小，相對(duì)含量高，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，具有良好的生理活性[12]等優(yōu)點(diǎn)。

周文威等[13]以總生物堿的吸附量和解吸附率為考察指標(biāo)，通過對(duì)D-101，D201A，D-401，HP-20，HPD-600，5 種大孔吸附樹脂的吸附和解吸附特，性的比較，發(fā)現(xiàn)樹脂的極性、比表面積和平均孔徑的大小直接影響樹脂吸附容量和解吸附率，乙醇對(duì)延胡索生物堿的解吸附作用不完全，在乙醇溶液中加入一定濃度的酸，具有較好的解吸附作用；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，D101 型大孔吸附樹脂對(duì)延胡索生物堿具有較大吸附量；洗脫方法為先以純水除去雜質(zhì)，再以0.2mol．L-1鹽酸 50%乙醇洗脫，收集洗脫液，總固體物的量大約是純化前總固體物的14.10%，總生物堿保留率為 89.13%，經(jīng)大孔吸附樹脂分離純化后固體物中總生物堿的含量達(dá)到50.06%。

劉文娟等[14]以總生物堿和延胡索乙素的吸附量和解吸率等為考察指標(biāo)，對(duì)HPD-600、HPD-500、D-141等12種不同類型的樹脂進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)優(yōu)選出的大孔樹脂純化延胡索總生物堿時(shí)的工藝條件及參數(shù)進(jìn)行研究，結(jié)果表明D-141大孔吸附樹脂的動(dòng)態(tài)吸附分離效果最好，樣液濃度為0.35 g生藥．mL-1，徑高比為l：6。吸附流速為4 BV．h-1，除雜溶劑和體積為0.3%NaCI溶液7 BV+純凈水l BV。洗脫溶劑為4 BV 60%乙醇+4 BV90%乙醇，洗脫流速為5.5 BV．h-1通過大孔吸附樹脂分離純化后，終產(chǎn)品中總生物堿的純度可達(dá)82.0%。

王緒穎[9]等以延胡索乙素和總生物堿的含量為指標(biāo)，以正交試驗(yàn)優(yōu)選延胡索總生物堿的提取方法，考察 AB-8 樹脂純化延胡索乙醇提取液的工藝條件及參數(shù)，得出每克AB-8 樹脂干樹脂吸附 8.286 g 生藥，上柱后水洗 6 BV，80%乙醇洗脫 10 BV，終產(chǎn)品中總生物堿純度為可達(dá)54. 25%。侯曉琳等[6]選擇大孔樹脂對(duì)正交試驗(yàn)優(yōu)選工藝所得提取物進(jìn)行純化，得出 D-101 大孔樹脂，7BV去離子水洗脫雜質(zhì)，7BV95% 的乙醇洗脫總生物堿 ，得到總生物堿的平均含量為 58.72%。

由于有機(jī)合成化學(xué)的發(fā)展和所取得的成就，可供選擇的萃取劑類型不斷增多，萃取法在中藥純化過程中逐漸被廣泛采用，其優(yōu)點(diǎn)是簡單、快速、易于操縱和自動(dòng)化，可輕易達(dá)到高的選擇性和萃取率。因生物堿具有易溶于酸水而難溶于堿水的特性，因此，Ding等[15]用H2SO4將其pH值調(diào)酸性，放置過夜后過濾，濾液用NaOH調(diào)節(jié)pH至堿性，氯仿萃取制備生物堿。為進(jìn)一步減少提取物中雜質(zhì)，克服氯仿?lián)]發(fā)性高，毒性大等缺點(diǎn)，禹玉紅等[16]將提取液濃縮至2g/mL，鹽酸酸化提取液2～3，用體積1:1乙酸乙酯萃取兩次，再用氨水堿化pH為10～11，1:1乙酸乙酯萃取兩次，合并乙酸乙酯水洗至中性后生物堿含量達(dá)到80%，該方法回收率高，毒性小，對(duì)環(huán)境友好，是工業(yè)生產(chǎn)的理想溶劑，同時(shí)降低成本，可作為元胡中總生物堿提取和初步純化的最佳工藝。

3 延胡索總生物堿含量測定

氣相色譜法紫外分光光度法和高效液相色譜法對(duì)其中一種或者幾種單體生物堿含量測定靈敏、準(zhǔn)確，但中藥材或其提取物中生物堿數(shù)目多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，延胡索的臨床療效是其總生物堿綜合作用的結(jié)果，僅僅監(jiān)控某一種或者某幾種單個(gè)成分是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，需要對(duì)其有效部位總含量進(jìn)行全面的控制。

費(fèi)艷美等[17]采用溴甲酚綠酸性染料比色法409nm波長處紫外分光光度計(jì)測定延胡索總生物堿含量，

結(jié)果表明，該方法靈敏度高，準(zhǔn)確性好，可用于延胡索總生物堿的測定；黃紅英等[18]利用酸堿中和原理，在研究延胡索不同配伍中總生物堿的含量變化試驗(yàn)中，采用酸堿滴定法測定總生物堿，觀察指示劑顏色變化，按消耗的硫酸計(jì)算出總生物堿含量，比較延胡索配伍中總生物堿含量的變化；羅利云[19]為考察不同產(chǎn)地延胡索有效成分的含量，建立延胡索的HPLC含量測定方法測定原阿片堿、鹽酸小檗堿和延胡索乙素的含量的同時(shí)，采用電位滴定法，以0.02mol．L-1硫酸滴定液加入生物堿中，使其充分溶解，插入筆式 pH 計(jì)，0.02mol．L-1氫氧化鈉進(jìn)行滴定，pH 5.1為滴定終點(diǎn)測定不同產(chǎn)地延胡索總生物堿的含量，為延胡索的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一定的依據(jù)。

4 延胡索總生物堿現(xiàn)代藥理學(xué)研究

延胡索在許多地區(qū)被廣泛種植，主要化學(xué)成分為生物堿 ，而其藥理學(xué)研究多側(cè)重于鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜方面[20]，臨床上主要用于治療各種疼痛、心血管疾病等；中藥產(chǎn)生的藥理作用非僅單一成分所能達(dá)到的，常與某有效部位綜合作用密不可分，現(xiàn)代研究以總生物堿為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)總生物堿在抗腫瘤、抗氧化、抗應(yīng)激能力、催眠，抗心肌缺血等方面作用顯著。

抗腫瘤作用：

延胡索總生物堿對(duì)多種人源腫瘤細(xì)胞系有明顯的增殖抑制作用[21]；張國鐸[22]等在抗腫瘤中藥有效部位和活性單體的篩選中發(fā)現(xiàn)，延胡索總生物堿對(duì)多種人源胃癌細(xì)胞均有增殖抑制作用，尤其以對(duì) AGS、MKN228 細(xì)胞抑制作用顯著，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，具有較強(qiáng)的體外抗腫瘤活性，這可能是延胡索總堿抗腫瘤作用的主要機(jī)制之一。元胡總堿對(duì) HepG2 細(xì)胞有顯著的增殖抑制作用，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系，其半數(shù)抑制濃度為（26.61±1.2）μg/ mL；HepG2 細(xì)胞經(jīng)元胡總生物堿處理 24、48h 后，15 種microRNAs 發(fā)生變化，尤以 let-7a 表達(dá)的上調(diào)和 mir-221、mir-222 表達(dá)的下調(diào)最明顯，推測其機(jī)制可能與 miRNA let-7a、mir-221、mir-222 調(diào)控的靶基因有關(guān)[23]。桑曉媛等[24]研究認(rèn)為，元胡提取物中的脂溶非酚性生物堿組分對(duì)肝腫瘤細(xì)胞SMMC-7721有較強(qiáng)的殺傷能性，IC50約為 35μg/mL。此外，Gao等[25]發(fā)現(xiàn)，元胡提取物能夠抑制乳腺癌細(xì)胞 MDAMB -231 轉(zhuǎn)移、侵襲，并抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）mRNA 的表達(dá)。

抗氧化作用：

乙酰膽堿神經(jīng)遞質(zhì)與人和動(dòng)物的學(xué)習(xí)和記憶功能密切相關(guān)，且隨著老化的發(fā)生，腦內(nèi)乙酰膽堿的量也隨著減少，抑制乙酰膽堿酯酶已成為目前抗衰老和增加學(xué)習(xí)記憶能力的有效措施之一[26]。為進(jìn)一步觀察延胡索總生物堿抗衰老的作用機(jī)理，白雪等[27]探討延胡索總生物堿對(duì)D-半乳糖所致衰老模型小鼠相關(guān)指標(biāo)的影響研究中發(fā)現(xiàn)，延胡索總生物堿能抑制AChE活力，增強(qiáng)ChAT活力，維持膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)功能的正常，增強(qiáng)超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的活力，恢復(fù)機(jī)體抗氧化能力，增強(qiáng)清除自由基的能力，從而能夠抗衰老，恢復(fù)記憶功能。

抗應(yīng)激、催眠作用：

延胡索總生物堿(ARC)能增強(qiáng)小鼠抗疲勞能力和耐缺氧能力[28]，提高小鼠的抗應(yīng)激能力。延胡索主要含生物堿，具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用，ARC中的延胡索乙素能明顯降低小鼠自發(fā)活動(dòng)與被動(dòng)活動(dòng)，明顯增強(qiáng)環(huán)己巴比妥鈉的催眠作用，還能對(duì)抗咖啡因和苯丙胺的中樞興奮作用及戊四氮所致的驚厥，但卻能增強(qiáng)士的寧所致的驚厥，而對(duì)電休克無對(duì)抗作用[29]。

抗心肌缺血作用：

延胡索總生物堿高、中、低劑量具有抗急性心肌缺血模型大鼠心肌細(xì)胞凋亡作用，該作用與調(diào)節(jié)bcl-2、bax 和 caspase-3 基因表達(dá)有關(guān)[30]，延胡索總堿能延長小鼠的缺氧存活時(shí)間，抑制Iso引起大鼠電圖異常，血清中CK及FFA升高，對(duì)Iso誘發(fā)的缺血的心肌有保護(hù)作用。目前認(rèn)為，Iso引起的心肌缺血壞死與氧自由基致脂質(zhì)過氧化和心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超負(fù)荷有關(guān)[31]。以前研究發(fā)現(xiàn)延胡索乙素具有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化的活性，有Ca2+拮抗作用，延胡索總堿對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用是否是通過抗脂質(zhì)過氧化、抑制鈣離子內(nèi)流實(shí)現(xiàn)的有待進(jìn)一步研究[32]。

與組分中藥配伍：

隨著組分中藥概念[33]的提出，組分中藥配伍的科學(xué)性研究成為較熱的研究課題，元胡止痛方作為經(jīng)典的鎮(zhèn)痛良方成為其中研究熱點(diǎn)之一；梁新麗等[34]發(fā)現(xiàn)延胡索總生物堿與白芷揮發(fā)油或/和白芷總香豆素配伍后，明顯提高延胡索乙素的藥-時(shí)曲線下面積，顯著延長延胡索乙素在大鼠體內(nèi)滯留時(shí)間，減緩體內(nèi)的消除，提高其生物利用度；祝靖云等[35]考察了元胡白芷有效組分配伍后對(duì)延胡索乙素小腸吸收的影響，發(fā)現(xiàn)在一定的配比范圍內(nèi)，延胡索總堿中延胡索乙素的小腸吸收呈現(xiàn)明顯增加的趨勢，第一次從藥物吸收的角度闡明該方配伍的合理性，合

理的解釋了元胡止痛方復(fù)方的藥效明顯優(yōu)于單味藥鎮(zhèn)痛效果的結(jié)論。

5 討論

以上文獻(xiàn)可以看出，延胡索總生物堿的提取、純化、含量測定方面研究已經(jīng)比較成熟，近年來隨著對(duì)延胡索生物堿類成分的認(rèn)識(shí)逐漸成熟，新的藥理作用也相繼被挖掘，但新的藥理作用的研究多為初步研究，基因水平在抗腫瘤作用中有涉及，其余藥理學(xué)作用大多停留在器官、組織、行為學(xué)水平，機(jī)制研究嚴(yán)重欠缺，接下來研究應(yīng)進(jìn)一步深入。

目前，對(duì)延胡索鎮(zhèn)痛方面的藥理作用與機(jī)制研究都比較深入，作用效果已得到確認(rèn)，但研究對(duì)象一般為單體化合物延胡索乙素，甚至已經(jīng)開發(fā)出新藥“顱痛定”，但總生物堿類其它成分同樣具有不同程度的鎮(zhèn)痛作用，因此應(yīng)加強(qiáng)其拮抗或者協(xié)同作用研究，在制備出合格的有效部位的基礎(chǔ)上再進(jìn)行藥理毒理學(xué)研究，不失為一條有價(jià)值的新藥開發(fā)思路。

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（責(zé)任編輯： 胡慧玲）

The research progress of effective part of Corydalis Rhizoma total alkaloids/

SHI Ting-ting1, WANG Jian-xin2, Li Xi1,3// (1.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075;2.School of Pharmacy, Fudan University, Shanghai 201203;3.Sichuan Province Chinese Academy of Sciences institute of Medicine ,Chengdu 610031,Sichuan)

Yanhusuo is the dried roots of poppy plants Corydalis yanhusuo W.T.Wang, and the effective part is total alkaloids. The article summarized the research of extraction, purifcation, content determination, modern pharmacology research of Corydalis Rhizoma total alkaloids in order to provide the reference for continue research of effective part of the rhizoma Corydalis total alkaloids.

Rhizoma corydalis; effective part; total alkaloids

R 283

A

1674-926X(2015)02-032-04

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海 201203；3.四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所，四川 成都 610031

施婷婷（1989-），女，在讀碩士研究生，主要從事中藥新制劑、新劑型及中藥新技術(shù)方向研究Tel:15221151751 Email:874283948@qq.com

王建新（1971-），男，教授 (博士生導(dǎo)師)，主要研究方向?yàn)榘邢蚪o藥系統(tǒng)、中藥新型給藥系統(tǒng)和口服給藥系統(tǒng)設(shè)計(jì)及吸收機(jī)理研究等

Email:jxwang@shmu.edu.cn

2014-05-03