纖溶系統(tǒng)及共刺激分子在炎性肌病發(fā)病機(jī)制的作用分析

劉艷麗 趙華 張美嬌 程政平 王劍鋒

纖溶系統(tǒng)及共刺激分子在炎性肌病發(fā)病機(jī)制的作用分析

劉艷麗 趙華 張美嬌 程政平 王劍鋒

目的探討炎性肌病發(fā)病機(jī)制中纖維系統(tǒng)及共刺激分子的作用。方法20只雌性英國短毛豚鼠, 隨機(jī)分為對照組和EAM組, 各10只。對照組以CFA 0.25 ml+等體積PBS為免疫物, 行6次免疫；EAM組以CFA0.25+等體積的純化兔肌球蛋白10 ml/L作免疫物, 行6次免疫。觀察組織形態(tài)學(xué)和臨床表現(xiàn)變化。結(jié)果EAM組臨床評分為(1.40±0.73)分, 病理學(xué)評分為(1.70±1.05)分, 提示為輕-中度炎癥。免疫組化表明, 對照組, 即正常肌組織不對MMP-9和uPA表達(dá), 但有少許小血管表達(dá)。而EMA組的炎性細(xì)胞﹑壞變肌纖維包繞的小血管內(nèi)皮細(xì)胞﹑炎性細(xì)胞﹑非壞死肌纖維均有明顯表達(dá)。結(jié)論針對炎性肌病發(fā)病機(jī)制中纖溶系統(tǒng)及共刺激分子作用展開研究, 可為臨床治療提供參考依據(jù), 如提高纖維蛋白含量, 在治療特發(fā)性肌炎中取得的效果較為顯著。

纖溶系統(tǒng)；共刺激分子；炎性肌?。话l(fā)病機(jī)制

特發(fā)性炎性肌病依據(jù)免疫組織學(xué)特征, 可按皮肌炎﹑多發(fā)性肌炎﹑非特異性肌炎﹑重疊性肌炎﹑免疫介導(dǎo)的壞死性肌病﹑包涵體肌炎劃分。特發(fā)性多發(fā)性肌炎(IPM)是指病因不明, 無其他惡性腫瘤和結(jié)締組織病合并的一種成人多發(fā)性肌炎, 以隱匿起病或亞急性起病為特征, 進(jìn)展的四肢近端肌和頸前肌無力﹑肌電圖呈肌源性損害﹑肌纖維變性壞死﹑血清肌酶升高現(xiàn)象, 但尚不明確發(fā)病機(jī)制［1］。本次研究就炎性肌病發(fā)病機(jī)制中纖溶系統(tǒng)和共刺激分子作用展開探討, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 20只雌性英國短毛豚鼠, 體重200～250 g,周齡8～10周, 提供充足飼料﹑清潔水﹑蘋果﹑光照條件, 生活節(jié)律保持正常。隨機(jī)分為對照組和EAM組, 各10只。

1.2 方法 主要儀器：包括冰凍切片機(jī)﹑超低溫冰箱﹑光學(xué)顯微鏡病理圖像采集系統(tǒng)等。主要試劑：肌球蛋白﹑伊紅試劑等。對照組以CFA0.25 ml+等體積PBS作免疫物, 行6次免疫。EAM組以CFA0.25 ml+等體積純化兔肌球蛋白10 ml/L作免疫物, 行6次免疫。EAM組采用皮下注射方法,將上述免疫物向豚鼠背部兩側(cè)注射, 免疫劑量為0.5 ml/次, 1次/周, 分別于第0﹑7﹑14﹑21﹑28﹑35 d免疫, 操作6次,均在第1﹑2次時, 取百日咳桿菌原液同時腹腔注射, 0.5ml/次。

1.3 觀察指標(biāo) 注射前稱重, 對動物臨床表現(xiàn)觀察, 評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：肌無力表現(xiàn)不明顯；1分：無力咕叫或咬嚙；2分：前肢屈曲﹑頭下垂；3分：體重減輕, 瀕臨死亡。標(biāo)本處理及染色。病理組織學(xué)觀察：包括肌纖維壞死﹑變性, 小靜脈形態(tài)和肌間質(zhì)小動脈改變等。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

EAM組臨床評分為(1.40±0.73)分, 病理學(xué)評分為(1.70± 1.05)分, 提示為輕-中度炎癥。免疫組化表明, 對照組臨床和病理學(xué)評分均為0分, 即正常肌組織不對MMP-9和uPA表達(dá), 但有少許小血管表達(dá)。而EMA組的炎性細(xì)胞﹑壞變肌纖維包繞的小血管內(nèi)皮細(xì)胞﹑炎性細(xì)胞﹑非壞死肌纖維均有明顯表達(dá)。

3 討論

將異體或自體骨骼肌勻漿在兔﹑豚鼠等動物體內(nèi)注入,可引發(fā)肌炎, 在病理改變上, 類似于人類多發(fā)性肌炎, 可在此疾病病發(fā)機(jī)制研究中應(yīng)用, 也可用于新的治療藥物探索,但缺點為此模型具有較差的穩(wěn)定性, 各實驗結(jié)果存在較大差異, 缺乏可重復(fù)性［2］。在此基礎(chǔ)上, 研究出EAM, 由骨骼肌成分之一C蛋白免疫動物及肌球蛋白免疫動物誘導(dǎo)。本次研究依據(jù)Kojima等方法, 應(yīng)用兔骨骼肌純化的肌球蛋折作研究的抗源, 取百日咳桿菌原液和CFA輔助應(yīng)用, 對免疫豚鼠皮下注射, 經(jīng)6周, 制成EAM型。在初期, 即免疫注射1～3周,觀察背部, 存在局部硬結(jié)形成的情況, 后有皮膚破潰﹑紅腫﹑結(jié)痂現(xiàn)象［3］。實施免疫3周后, 與人類IPM有一致臨床表現(xiàn),如存在活動度下降﹑叫聲低微﹑后肢無力等。營養(yǎng)不良以腹部﹑后肢臟污, 毛發(fā)失去光澤為表現(xiàn)。致免疫后期, 體重下降,覓食減少［4］。對死亡豚鼠進(jìn)行解剖, 有嚴(yán)重肌纖維壞死和炎癥反應(yīng)現(xiàn)象。待所有動物有臨床表現(xiàn)后, 免疫停止, 1周后, 2只癥狀有所減輕, 表明EAM在一定程度上具自發(fā)痊愈傾向［5］。共刺激分子屬于腫瘤壞死因子超家族和免疫球蛋白超家族, 在免疫細(xì)胞分化﹑活化及免疫效應(yīng)維持中, 作用較為重大。對自反應(yīng)性T細(xì)胞具負(fù)性和正性調(diào)節(jié)作用, 對共刺激分子干預(yù), 可為炎性肌病采用靶向性治療提供了理論依據(jù)。

綜上所述, 針對炎性肌病發(fā)病機(jī)制中纖溶系統(tǒng)及共刺激分子作用展開研究, 可為臨床治療提供參考依據(jù), 如提高纖維蛋白含量, 在治療特發(fā)性肌炎中取得的效果較為顯著。

［1］Polterauer S, Grimm C, Seebacher V, et al. Plasma fibrinogen levels and prognosis in patients with ovarian cancer:a multicenter study. Oncologist, 2009, 14(10):979-985.

［2］Rudd CE, Taylor A, Schneider H. CD28 and CTLA-4 coreceptor expression and signal transduction.Immunol Rev, 2009, 229(1):12-26.

［3］普藝, 張進(jìn), 肖波, 等.外周血淋巴細(xì)胞CD/CD40L表達(dá)與多發(fā)性肌炎/皮肌炎發(fā)病關(guān)系.中國臨床神經(jīng)科學(xué), 2003, 11(4): 335-337.

［4］吳懷國, 彭曉江, 李軍, 等.共刺激分子CD28:CTLA4/B7在實驗性自身免疫性重癥肌無力中的作用.臨床神經(jīng)病學(xué)雜志, 2008, 21(3):210-212.

［5］Franssson ME, Lilienfeldt LS, Fagius J, et al. The T-cell pool is anergized in patients with multiple sclerosis in remission. Immunology, 2009, 126(1):92-101.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.22.217

2015-08-17］

116033 遼寧省大連市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)二科(劉艷麗趙華 張美嬌 程政平)；大連市中心醫(yī)院(王劍鋒)

王劍鋒