HPLC法測(cè)定注射用葡醛酸鈉的含量

韓 蕓，蔡姍英，王雪芹

（海南省食品藥品檢驗(yàn)所，海南海口570216）

HPLC法測(cè)定注射用葡醛酸鈉的含量

韓 蕓，蔡姍英，王雪芹

（海南省食品藥品檢驗(yàn)所，海南?？?70216）

目的：建立測(cè)定注射用葡醛酸鈉中葡醛酸鈉含量的高效液相色譜方法．方法：依利特Hypersil BDS C18柱（4．6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0．25%四丁基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至5．0）-乙腈（95∶5）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm．結(jié)果：葡醛酸鈉在0．25～2．01 g／L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝1．000，平均回收率為99．4%（n＝9），定量限為0．80 μg．結(jié)論：該方法靈敏、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性高，可用于注射用葡醛酸鈉的質(zhì)量控制．

葡醛酸鈉；高效液相色譜法；含量測(cè)定

0 引言

注射用葡醛酸鈉為葡醛內(nèi)酯在堿性條件下水解所得葡醛酸鈉的無(wú)菌凍干品，其進(jìn)入機(jī)體后，在酶的作用下變?yōu)槠咸侨┧岫鹱饔?，可降低肝淀粉酶的活性，阻止糖原分解，使肝糖原含量增加，脂肪貯藏減少，對(duì)食物或藥物中毒時(shí)的保肝及解毒有輔助作用［1］．葡醛酸鈉為肝臟病輔助用藥，可用于急慢性肝炎和肝硬化的輔助治療．由于葡醛酸鈉結(jié)構(gòu)中含多個(gè)羥基，親水性強(qiáng)，在現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定方法中，該成分出峰早，基本不保留［2］．本實(shí)驗(yàn)室建立的HPLC法可同時(shí)測(cè)定葡醛酸鈉的有關(guān)物質(zhì)和含量，相對(duì)于原標(biāo)準(zhǔn)，本方法具有專(zhuān)屬性高、靈敏度高、準(zhǔn)確性好的特點(diǎn)，可有效地運(yùn)用于葡醛酸鈉的質(zhì)量控制．

1 儀器和試藥

1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；工作站為Chemstation；XS105電子天平（METTLER TO-LEDO公司）；葡醛酸鈉對(duì)照品（批號(hào)100495-200601，含量92．0%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；注射用葡醛酸鈉（海南皇隆制藥股份有限公司，批號(hào)：20100801、20110101-2、201301013）；乙腈為色譜純（美國(guó)Tedia公司）；超純水，自制（美國(guó)Millipore公司）；其余試劑為分析純．

2 方法和結(jié)果

2．1 色譜條件 色譜柱：依利特Hypersil BDS C18（4．6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0．25%四丁基氫氧化銨溶液（取10%四丁基氫氧化銨25 mL，用水稀釋至1000 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5．0）-乙腈（95∶5）；流速：1．0 mL／min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm．

2．2 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 稱(chēng)取葡醛酸鈉對(duì)照品10 mg，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相 5 mL溶解后，加入1 mol／L氫氧化鈉溶液1 mL，放置30 min，再加入1 mol／L鹽酸溶液1 mL中和，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖．葡醛酸鈉峰的保留時(shí)間約為10 min，葡醛酸鈉峰與堿降解物峰（相對(duì)保留時(shí)間約為1．1 min）分離度應(yīng)大于1．5．

2．3 對(duì)照品溶液的配制 精密稱(chēng)取對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成1 mg／mL的溶液，即為對(duì)照品溶液．

2．4 供試品溶液的配制 精密稱(chēng)取裝量差異項(xiàng)下供試品適量，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成1 mg／mL的溶液，即為供試品溶液．

2．5 線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取葡醛酸鈉對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成1 mg／mL的溶液，分別進(jìn)樣5、10、20、30、40 μL，記錄色譜圖．以峰面積A對(duì)葡醛酸鈉質(zhì)量濃度C進(jìn)行線性回歸，得葡醛酸鈉的回歸方程：A＝667．02C+2．0061（r＝1．000，n＝5），結(jié)果表明葡醛酸鈉質(zhì)量濃度在0．25～2．01 g／L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好．

2．6 精密度試驗(yàn) 精密稱(chēng)取葡醛酸鈉對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成1 g／L的溶液，進(jìn)樣20 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次．得濃度峰面積的RSD為0．19%，表明儀器精密度良好．

2．7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為20100801的樣品，按2．4方法操作，平行制備6份供試品溶液，分別測(cè)定，結(jié)果葡醛酸鈉含量的RSD為0．33%，表明重復(fù)性良好．2．8 定量限 精密量取葡醛酸鈉對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋?zhuān)葱旁氡龋⊿／N）為10，測(cè)得葡醛酸鈉定量限為0．80 μg．

2．9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按2．4方法制備供試品溶液，在4℃、室溫下分別于0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h進(jìn)樣20 μL，結(jié)果峰面積的RSD分別為0．47%和0．45%，表明供試品溶液在4℃、室溫時(shí)10 h內(nèi)穩(wěn)定性均良好．2．10 回收率試驗(yàn) 在空白輔料中，分別加入一定量的葡醛酸鈉對(duì)照品，配成高、中、低三種濃度溶液（0．8、1．0、1．2 g／L），按上述的色譜條件進(jìn)行分析，測(cè)得回收率分別為99．4%，99．4%和99．5%，RSD分別為0．37%，0．37%和0．37%（n＝3），平均回收率為99．4%（n＝9）．

2．11 樣品的含量測(cè)定 三批樣品按前述方法測(cè)定，結(jié)果葡醛酸鈉的標(biāo)示量百分率分別為 93．4%、90．9%、93．5%．

3 討論

注射用葡醛酸鈉現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)中大多數(shù)采用C18色譜柱，磷酸鹽溶液-乙腈系統(tǒng)、磷酸鹽溶液系統(tǒng)或庚烷磺酸鈉溶液0．1 mol／L磷酸二氫鉀溶液的流動(dòng)相體系，經(jīng)試驗(yàn)復(fù)核，在以上色譜系統(tǒng)中，葡醛酸鈉不保留［3］．經(jīng)試驗(yàn)摸索，流動(dòng)相采用四丁基氫氧化銨溶液（pH 5．0）-乙腈（95∶5）時(shí)，葡醛酸鈉在色譜柱上保留，主峰保留時(shí)間約為10 min，峰型較好［4］．該方法結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)單，可作為該品種的質(zhì)量控制方法．

［1］杜立峰．病毒性肝炎的治療藥物研究進(jìn)展［J］．西北藥學(xué)雜志，2004，19（2）：92-94．

［2］國(guó)家藥典委員會(huì)．化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：第8冊(cè)［S］．北京：化學(xué)業(yè)出版社，2002：235．

［3］仇麗穎，張 丹，趙 曦，等．HPLC測(cè)定注射用葡醛酸鈉的含量及有關(guān)物質(zhì)［J］．華西藥學(xué)雜志，2005，20（2）：149-151．

［4］陳 輝．RP-HPLC法測(cè)定葡醛酸鈉注射液的含量［J］．西北藥學(xué)雜志，2011，26（2）：104-106．

Content determination of sodium glucuronic acid for injection by HPLC

HAN Yun，CAI Shan-Ying，WANG Xue-Qin
Institutefor Drug and Food Control of Hainan Province，Haikou 570216，China

AIM：To establish the high performance liquid chro-matography（HPLC）method for quantifying the contents of sodi-um glucuronic acid for injection．METHODS：A Elite Hypersil BDS C18 column（4．6 mm×250 mm，5 μm）was used with 0．25%tetrabutyl-ammoium hydroxide solution（pH adjusted to 5．0 with phosphoric acid）-acetonitrile（95∶5）as mobile phase．The flow rate was 1．0 mL／min，and detection wavelength was 210 nm．RESULTS：The calibration curve was linear（r＝1．000）in the range of 0．25～2．01 g／L for sodium glucuronic acid，with the average recovery rate being 99．4% （n＝9）．The LOD was 0．80 μg．CONCLUSION：HPLC method is sensitive，reliable and specific，and can be used for the quality control of sodium glucu-ronic acid．

sodium glucuronic acid；HPLC；content determina-tion

R927．2

A

2095-6894（2015）06-122-02

2015-04-25；接受日期：2015-05-10

韓 云．本科，主管藥師．E-mail：25026427＠qq．com