不同植物油對肉豬脂類代謝及相關(guān)基因表達(dá)的影響

■申愛華 李保全 周 蔚 齊 梅

（江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院六合動物科學(xué)基地，南京六合 211501）

油脂的來源有動物油脂和植物油脂兩種，其劃分標(biāo)準(zhǔn)為脂肪酸組成飽和度不同，動物油脂主要由飽和脂肪酸組成，植物油主要由不飽和脂肪酸組成，畜禽對不飽和脂肪酸的利用率高于飽和脂肪酸，植物油中富含豐富的不飽和脂肪酸，部分是必需脂肪酸，必需脂肪酸主要指亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸，是動物體內(nèi)不能合成的脂肪酸，必須從飼料中獲得。同時植物油具有油脂的共性，促進(jìn)脂溶性維生素的吸收，增加飼料的香味，延長飼料在動物胃中的停留時間，有利于充分消化吸收，因此，畜禽飼料中添加較多的是植物油。國內(nèi)外研究表明，在飼糧中添加大量含不飽和脂肪酸的植物油影響肉雞脂類代謝及脂肪酸合成酶FAS和載脂蛋白apoB mRNA表達(dá)[1-3]，但是有關(guān)飼糧中添加含不飽和脂肪酸的不同植物油對肉豬的研究尚未見報道。大豆油、菜籽油和米糠油在植物油中產(chǎn)量最大，富含必需脂肪酸，本研究通過在肉豬飼糧中分別添加相同比例的大豆油、菜籽油和米糠油，探討不同植物油對肉豬脂類代謝及相關(guān)基因表達(dá)的影響，旨在為植物油在肉豬中的合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用大豆油、菜籽油和米糠油均購于江蘇市場，3種植物油外觀正常、新鮮，過氧化值小于0.25 g/100 g，酸價小于3 mg/g。

1.2 試驗動物及設(shè)計

選取48頭、80日齡、平均體質(zhì)量為(37.57±3.38)kg的生長豬，隨機(jī)平均分成3組，每組2個重復(fù)，每個重復(fù)8頭豬，經(jīng)方差分析LSD法比較，各重復(fù)間豬體質(zhì)量差異不顯著。

1.3 試驗日糧

基礎(chǔ)日糧以玉米-豆粕為主，試驗日糧(分為生長期日糧和育肥期日糧)是在基礎(chǔ)日糧中分別添加相同比例的大豆油、菜籽油和米糠油，試驗日糧配制參照中國豬的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004），試驗日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗在江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院六合動物科學(xué)基地試驗豬場進(jìn)行，正試期前對試驗豬進(jìn)行編號等準(zhǔn)備工作。正試時間為2014年5月4日至2014年7月12日，試驗期共70 d，自由采食和飲水。豬舍每天上、下午清糞各1次，每周進(jìn)行1次豬舍噴灑消毒，發(fā)現(xiàn)疾病及時治療，確保豬群健康。

1.5 試驗數(shù)據(jù)收集及指標(biāo)測定

全期試驗結(jié)束后，每個重復(fù)隨機(jī)選取體質(zhì)量相近的2頭空腹12 h的肉豬（即每組4頭）進(jìn)行頸靜脈采血，收集于10 ml離心管中，采集的血樣于4℃靜置，待血清析出后3 000 r/min離心15 min，-20℃保存?zhèn)溆?。豬屠宰后迅速取出肝臟，在相同位置迅速取5 g左右的樣品，放進(jìn)凍存管，放入液氮瓶中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.1 血清生理生化指標(biāo)

用HTCA-3060全自動生化分析儀分析樣品血清中總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇。

1.5.2 脂蛋白代謝酶活性

用比色法測定血清中脂蛋白脂酶、肝脂酶和總脂酶的活性。

1.5.3 肝臟FAS及apoB的mRNA表達(dá)量

1.5.3.1 肝臟總RNA的提取

將液氮凍存的新鮮肝臟組織剪碎后，按照RNA?prep Pure Tissue Kit動物組織總RNA提取試劑盒（天根，DP341）說明書操作。所提取的總RNA，采用紫外分光光度計（Nanodrop-1000）測定純度和濃度，所有樣品的OD260/280在1.8～2.0之間。將總RNA溶液稀釋為1.0 μg/μl，用于反轉(zhuǎn)錄。

1.5.3.2 反轉(zhuǎn)錄

按照PrimeScript RT regent kit(TaKaRa)說明書對所提取的總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA。將cDNA濃度稀釋至50～100 ng/μl后，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.3.3 引物設(shè)計

按照GenBank中所收錄的豬FAS，ApoB和beta-Actin設(shè)計3對引物，引物信息見表2。

表2 引物序列及參數(shù)

1.5.3.4 實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)

PCR反應(yīng)按照SYBR Premix Ex Taq TM(TaKa?Ra)說明書進(jìn)行，采用ABI7500（ABI）對cDNA進(jìn)行定量。以beta-Actin為內(nèi)參。引物濃度為0.2μmol/l。PCR反應(yīng)參數(shù)為：95℃預(yù)變性5 min，95℃變性30 s，60℃退火30 s,72℃延伸40 s,共40個循環(huán)。結(jié)果用2-ΔΔCt法計算，每個樣品重復(fù)3次，同時以DEPC水作為陰性對照，檢測是否有污染。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用單因子方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析（見表3）

2.1 不同植物油對肉豬血清生理生化指標(biāo)的影響

表3 不同植物油對肉豬血脂的影響

由表3可知，與大豆油組相比，菜籽油組和米糠油組肉豬血清的甘油三酯含量分別降低了43.96%和41.76%，但差異不顯著；不同植物油對肉豬血清的總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的含量差異也不顯著。

2.2 不同植物油對肉豬血清脂肪酶活性的影響（見表4）

表4 不同植物油對肉豬血清脂肪酶活性的影響

由表4可知，菜籽油組和米糠油組肉豬血清脂蛋白脂酶的活性極顯著高于大豆油組，分別比大豆油組提高了108%和51.16%；菜籽油組和米糠油組肉豬血清肝脂酶的活性極顯著高于大豆油組，分別比大豆油組提高了85.61%和100.72%；菜籽油組和米糠油組肉豬血清總脂酶的活性極顯著高于大豆油組，分別比大豆油組提高了96.26%和77.23%。

2.3 不同植物油對肉豬肝臟FAS和apoB的mRNA表達(dá)量的影響（見表5）

表5 不同植物油對肉豬肝臟FAS和apoB的mRNA表達(dá)量的影響

由表5可見，不同植物油對肉豬肝臟組織脂肪酸合成酶FAS和載脂蛋白apoB的mRNA表達(dá)量有極顯著影響，菜籽油組和米糠油組肉豬脂肪酸合成酶FAS的mRNA表達(dá)量極顯著低于大豆油組，分別降低了65.35%和57.18%；菜籽油組和米糠油組肉豬載脂蛋白apoB的mRNA表達(dá)量分別比大豆油組降低了58.79%和57.41%，差異極顯著；菜籽油組和米糠油組之間差異不顯著。

3 討論

3.1 不同植物油對肉豬血脂水平的影響

血脂受到體內(nèi)代謝的影響，總甘油三酯、總膽固醇反映脂類的吸收狀況，高密度脂蛋白、極低密度脂蛋白反映脂類在體內(nèi)的分解和運(yùn)轉(zhuǎn)狀況，同時反映肝臟脂肪代謝狀況。高血脂癥的形成與低密度脂蛋白膽固醇呈正相關(guān)，與高密度脂蛋白膽固醇呈負(fù)相關(guān)。

目前有關(guān)不同油脂對機(jī)體血脂水平影響的報道不盡統(tǒng)一。Harris等[4]研究表明，油脂類型和含量影響血脂水平，添加富含多不飽和脂肪酸的油脂可降低血液膽固醇水平，萬文菊[5]研究表明，飼糧中添加不同油脂對肉鴨血清甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇指標(biāo)無顯著影響。本試驗也得到類似結(jié)果，添加富含多不飽和脂肪酸的不同植物油對肉豬血清甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇指標(biāo)均無顯著影響。

3.2 不同植物油對肉豬血清脂肪酶活性的影響

脂蛋白脂酶與肝脂酶同為甘油三酯酶，作用是水解甘油三酯、磷脂和膽固醇酯等一些非水溶性物質(zhì)中的酯鍵，對食物中脂肪的吸收，平衡能量和血漿脂蛋白的代謝起著重要的作用。

脂蛋白脂肪酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成和分泌的一種糖蛋白，主要催化乳糜微粒和極低密度脂蛋白中的攜帶的甘油三酯，使得細(xì)胞可以攝入反應(yīng)釋放出的脂肪酸。

肝脂酶主要在肝細(xì)胞中合成,能水解各種脂蛋白中的甘油三酯和磷脂,肝脂酶主要作用于極低密度脂蛋白、β-極低密度脂蛋白及極低密度脂蛋白殘粒中的甘油三酯，并生成低密度脂蛋白。

安文俊等[6]研究表明，多不飽和脂肪酸含量較高的植物油-豆油對肉雞血清脂蛋白脂酶、肝脂酶和總脂酶活性均高于飽和脂肪酸含量較高的動物油-豬油，沃興德等[7]試驗發(fā)現(xiàn)，飽和脂肪酸會抑制肝脂酶活性。本試驗結(jié)果表明，富含多不飽和脂肪酸的不同植物油中，菜籽油和米糠油對肉豬血清脂蛋白脂酶、肝脂酶和總脂酶的活性極顯著高于大豆油，而菜籽油和米糠油兩種油之間差異不顯著。

3.3 不同植物油對肉豬肝臟脂肪酸合成酶FAS和載脂蛋白apoB的mRNA表達(dá)量的影響

范京暉等[8]研究發(fā)現(xiàn)，不飽和脂肪酸飼糧對肝臟脂肪酸合成酶FAS活性及其基因表達(dá)具有抑制作用。本試驗與上述報道結(jié)果相似，富含不飽和脂肪酸的不同植物油中，菜籽油和米糠油對肉豬肝臟中脂肪酸合成酶FAS的mRNA表達(dá)量極顯著低于大豆油，這可能是菜籽油和米糠油兩種植物油中的不飽和脂肪酸含量比大豆油高，對肉豬肝臟脂肪酸合成酶FAS的mRNA表達(dá)具有抑制作用。

載脂蛋白apoB存在于低密度脂蛋白的表面，由肝臟合成，是低密度脂蛋白膽固醇的主要結(jié)構(gòu)蛋白。Sato等[9]研究表明，與動物性油脂相比，植物性油脂能降低肉雞載脂蛋白apoB mRNA表達(dá)。本試驗結(jié)果表明，與大豆油比較，菜籽油組和米糠油組肉豬載脂蛋白apoB的mRNA表達(dá)量極顯著低于大豆油組，可使運(yùn)輸?shù)礁闻K中的膽固醇含量減少，血清中膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的含量相應(yīng)降低。

4 結(jié)論

與大豆油相比，菜籽油和米糠油在肉豬體內(nèi)更易于消化吸收，它能夠提高肉豬血清脂肪酶活性，降低肉豬肝臟脂肪酸合成酶FAS和載脂蛋白apoB的mRNA表達(dá)量。