中藥復方制劑對雛雞的抗病毒能力及免疫增強作用的研究

■邱淑敏 陳 濤 李龍飛 劉美玲 漢麗梅

（沈陽農(nóng)業(yè)大學，遼寧沈陽 110866）

中藥是歷史悠久資源豐富的純天然有機物質(zhì)，隨著飼料工業(yè)的發(fā)展，中藥添加劑也隨之進入了快速發(fā)展階段。由于中藥內(nèi)既含有豐富的營養(yǎng)成分，又含有多種生物活性物質(zhì)，因此，其在為動物補充營養(yǎng)的同時，還具有防治疾病和促進動物健康生長的作用[1]。中藥作為飼料添加劑，具有營養(yǎng)性和藥物性的雙重作用[2]，即可有效抑菌殺菌，有助于改善機體腸道菌群的平衡[3]，對免疫器官的發(fā)育、白細胞及單核-巨嗜細胞系統(tǒng)、細胞免疫、體液免疫、細胞因子的產(chǎn)生等方面均有促進作用，并因此提高機體的非特異性免疫能力[4]。有些中藥還可以通過有效調(diào)節(jié)機體生理功能、調(diào)節(jié)緩和激原、防止免疫器官萎縮等，而起到抗應激的作用[5]。此外，有些中草藥還能起到某種維生素的功能作用，如小茴香具有維生素A樣作用；川芎、當歸等具有維生素E樣作用；黃芪、陳皮、蕎麥秸等具有維生素P樣作用。

研究發(fā)現(xiàn)，結合中草藥本身的特性，根據(jù)中草藥配伍原則，在中獸醫(yī)理論的指導下，將中草藥有目的配伍起來進行應用，使其具有藥效互補、協(xié)同作用、療效增強、減少不良作用等優(yōu)點，因此中藥復方的研制方面近年來備受重視。有研究表明中藥復方制劑可以通過促進腸道有益菌生長和抑制有害菌繁殖，而有效提高腸道健康，促進機體生長，起到提高機體免疫力、抗病毒、抗應激等作用效果[6-11]。本研究應用建立雞MD腫瘤模型，分別飼喂添加以茯苓、白術等中藥為主的不同中藥復方制劑，統(tǒng)計不同處理組蛋雛雞的發(fā)病率及死亡率，并觀察雛雞血清中抗氧化指標及各種細胞因子的變化，從而探討中藥復方對雛雞抗病毒能力及免疫性能的影響，以期為中藥復方制劑在動物養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應用，生產(chǎn)無毒副作用、無藥物殘留的動物性食品，避免抗生素濫用帶來的嚴重環(huán)境污染等提供方案。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗動物1日齡海蘭褐蛋雛雞由本校試驗場提供，MD-京1株血毒（本研究保存）；白術、茯苓等中藥均購自各藥房；玉米-豆粕型無抗基礎日糧來自禾豐牧業(yè)有限公司；總超氧化物歧化酶（T-SOD）測定試劑盒、丙二醛（MDA）測定試劑盒：南京建成試劑公司產(chǎn)品；雞白細胞介素2（IL-2）酶聯(lián)免疫分析測試盒、雞腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫分析測試盒、雞干擾素γ（IFN-γ）酶聯(lián)免疫分析測試盒，IBL分裝產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 試驗動物分組

選1日齡健康雛雞240只公母各半，在1日齡腹腔注射MD血毒0.5 ml/只。隨機分為4組，每組3個重復，其中Ⅰ組為攻毒對照組，飼喂基礎日糧，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組為試驗組，分別飼喂1%添加的中藥復方制劑一、中藥復方制劑二和中藥復方制劑三的基礎日糧。

1.2.2 樣品的采集

在雛雞21日齡、35日齡和42日齡，每組隨機選擇20只雛雞，取血分離血清，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 測定方法

血清總超氧化物歧化酶（T-SOD）的測定，采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力，波長550 nm，結果以每毫升反應液中SOD抑制率達50%時所對應的SOD量為一個SOD活力單位（U）。血清丙二醛（MDA）的測定，采用硫代巴比妥（TBA）光電比色法，波長532 nm檢測。血清中白細胞介素-2（IL-2）、干擾素γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）等水平的測定，采用雙抗體夾心ELISA法，標準曲線法計算樣品中IL-2、IFN-γ、TNF-α濃度。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計處理軟件的One-Way ANOVA法進行方差分析，用DUNCANS法進行多重比較分析。

2 結果與分析

2.1 中藥復方制劑對雛雞發(fā)病率和死亡率的影響（見表1）

表1 人工感染MDV雛雞的發(fā)病率與死亡率統(tǒng)計

由表1可知，檢測結果表明攻毒對照組雛雞發(fā)病率高達87.9%，死亡率為21.2%。飼料中添加了中藥復方制劑，各組雛雞的發(fā)病率和死亡率均比對照組降低了，其中中藥復方制劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組的發(fā)病率分別比對照組降低了17.29%、41.41%和55.17%，死亡率分別降低了42.92%、57.07%和71.22%，其中以中藥復方制劑三效果最佳。

2.2血清中T-SOD、MDA的檢測結果與分析

2.2.1 T-SOD活性的檢測結果與分析（見表2）

表2 雛雞血清中T-SOD活力的測定結果與分析(U/ml)

由表2可知，在21、35、42日齡，各試驗組雞血清T-SOD活力顯著（P＜0.05）或極顯著高于對照組（P＜0.01）；試驗Ⅲ組和Ⅳ組雛雞血清T-SOD活力顯著高于試驗Ⅱ組（P＜0.05），而試驗Ⅲ組和Ⅳ組間差異不顯著（P＞0.05）。研究結果表明中藥復方制劑能夠通過提高血清中T-SOD的活力，而增強對氧自由基清除能力，保護細胞免受損傷。且中藥復方制劑二和三效果顯著優(yōu)于復方制劑一。

2.2.2 MDA指標（見表3）

表3 雛雞血清中MDA含量測定與分析結果(nmol/ml)

由表3可知，在21、35、42日齡的各試驗組雛雞血清MDA含量均顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）低于對照組，其中各日齡時期試驗Ⅳ組雛雞血清MDA含量顯著低于試驗Ⅱ組（P＜0.05），而試驗Ⅲ組和Ⅳ組間差異不顯著（P＞0.05）。添加中藥復方各組MDA含量降低，機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生量明顯降低，說明中藥復方制劑不僅促進機體對自由基的清除能力，同時通過減少機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生，發(fā)揮良好的抗氧化效應。

2.3 IFN-γ檢測結果與分析（見表4）

由表4可知，與對照組相比，各日齡試驗組雛雞血清中IFN-γ含量顯著（P＜0.05）或極顯著高于對照組（P＜0.01），各日齡的試驗Ⅳ組雛雞血清中IFN-γ含量顯著高于其它試驗組（P＜0.05）。說明日糧中添加中藥復方制劑，可以提高雛雞血清中IFN-γ含量，從而提高了免疫細胞的活性和抗腫瘤能力，增強了機體免疫功能，且中藥復方制劑三作用效果最佳。

表4 雛雞血清中IFN-γ含量測定結果(pg/ml)

2.4 IL-2檢測結果與分析（見表5）

表5 雛雞血清中IL-2含量測定結果與分析(ng/ml)

由表5可知，各日齡的試驗Ⅲ組和Ⅳ組雛雞血清中IL-2含量顯著（P＜0.05）或及極顯著高于對照組（P＜0.01），結果表明中藥復方制劑在雛雞育雛階段能提高雛雞血清中IL-2含量，增強機體抗病毒感染的細胞免疫功能。且復方中藥制劑三組雛雞血清中IL-2含量隨著日齡的增加而逐漸增加，作用效果最優(yōu)。

2.5 TNF-α檢測結果與分析（見表6）

由表6可知，各日齡的試驗Ⅲ組及Ⅳ組雛雞血清中TNF-α含量與對照組相比差異顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）。研究結果表明日糧中添加中藥復方制劑二和三均可提高雛雞血清中TNF-α含量，調(diào)節(jié)體液免疫與細胞免疫，且在整個實驗階段均具有顯著作用效果。

表6 雛雞血清中TNF-α含量測定結果(ng/ml)

總之，通過日糧中添加中藥復方制劑，可通過增強機體的抗氧化功能和調(diào)節(jié)機體的體液免疫與細胞免疫功能，增強機體的抗病毒感染能力，在一定程度上保護機體組織細胞免受損傷，提高了雛雞的成活率，且中藥復方制劑三作用效果優(yōu)于其他制劑。

3 討論

3.1 中藥復方制劑對雛雞抗氧化能力的影響

血清中T-SOD活性代表了機體抗氧化水平，能清除氧自由基等，對組織細胞損傷有一定的保護作用。檢測蛋雛雞血清中MDA含量和T-SOD活性可以反映機體的氧化和抗氧化水平。有研究發(fā)現(xiàn)茯苓皮三萜對小鼠肝脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生的丙二醛有較好的清除效果[12]。本試驗中藥復方制劑中具有茯苓等成分，可提高雛雞血清中T-SOD活性，降低血清中MDA含量，對提高雛雞抗氧化水平、保護機體免受損傷具有很好的作用效果。

3.2 中藥復方制劑對雛雞細胞因子水平的影響及其意義

IL-2是白細胞介素家族中的重要成員之一，在體內(nèi)主要由Th1細胞分泌，是T細胞在體外長期生長所必需的因子，參與炎癥反應、抗腫瘤效應和移植排斥反應，是衡量機體免疫功能，尤其是細胞免疫水平的一個重要指標。本試驗中飼喂添加中藥復方的各組雛雞血清中IL-2均比單獨飼喂基礎日糧組的高，提高了機體免疫功能，這與其他人研究結果吻合[13]。

IFN-γ主要由Th1CD4+細胞和吞噬細胞產(chǎn)生，在體內(nèi)具有一系列的生物學效應，包括抗病毒、抗腫瘤、激活巨噬細胞使其殺傷腫瘤細胞，增強NK細胞活性、誘導B細胞分泌免疫球蛋白并促進B細胞成熟和增殖等，具有重要的免疫學作用[14-15]。TNF-α是由T、B淋巴細胞分泌的具有多種生物活性的多肽細胞因子，具有強大的抗腫瘤作用，并且可以調(diào)節(jié)機體免疫功能。余建國等[16]研究發(fā)現(xiàn)銀杏葉多糖促進雛雞腫瘤壞死因子α和干擾素γ產(chǎn)生，這與本研究結果相一致。

4 結語

綜上所述，本研究結果表明在蛋雛雞日糧中添加以茯苓、白術等中藥為主的復方制劑一、復方二和復方三均可以提高機體的抗氧化水平，調(diào)節(jié)機體免疫機能，提高育雛階段雛雞的健康水平，且中藥復方二和中藥復方三比中藥復方一更為有效，以中藥復方制劑三作用效果最優(yōu)。中草藥復方作為一類新型功能性飼料添加劑，具有替代或部分飼用抗生素的使用的潛能，其可通過對畜禽生長性能、機體免疫力的提升及對腸道菌群的改善調(diào)控作用而備受關注。同時中藥作為飼料添加劑使用，取之自然還以自然，具有無毒、無抗性產(chǎn)生、自然環(huán)保和提高動物性食品的安全性等優(yōu)點，值得深入研究和開發(fā)。然而中藥的成分復雜，作用機制多樣，要想有效合理利用在養(yǎng)殖業(yè)中，還需要進一步深入的研究。