絞股藍皂苷在小鼠皮膚衰老中的抗氧化損傷作用研究

蘇秋香，叢　敬，宮　倩

（1.沈陽醫(yī)學(xué)院形態(tài)中心實驗室遼寧沈陽110034；2.沈陽醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室遼寧沈陽110034；3.沈陽醫(yī)學(xué)院遼寧沈陽110034）

絞股藍皂苷在小鼠皮膚衰老中的抗氧化損傷作用研究

蘇秋香1，叢敬2，宮倩3

（1.沈陽醫(yī)學(xué)院形態(tài)中心實驗室遼寧沈陽110034；2.沈陽醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室遼寧沈陽110034；3.沈陽醫(yī)學(xué)院遼寧沈陽110034）

目的：探討絞股藍皂苷對衰老小鼠皮膚的抗氧化保護作用。方法：60只小鼠隨機分成3組，青年組（A）、老年對照組（B）和老年給藥組（C）；A、B組灌胃生理鹽水20ml/kg，C組灌胃絞股藍皂苷提取液8g/kg，每天1次。30天后取皮膚組織，檢測丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性。結(jié)果：與A組比較，B組、C組皮膚組織中MDA含量增加，SOD、CAT、GSH-Px活性降低（＜0.05）；與B組比較，C組皮膚組織中MDA含量減少，SOD、CAT、GSH-Px活性增加（＜0.05）。結(jié)論：灌胃絞股藍皂苷可減輕衰老小鼠皮膚的氧化損傷，具有延緩小鼠皮膚衰老的作用。

絞股藍皂苷；抗氧化損傷；皮膚衰老

隨著年華老去，各系統(tǒng)、器官、組織甚至細胞都會發(fā)生改變，皮膚也不例外。其功能的減弱或喪失，不僅影響美觀，而且增加了多種皮膚疾病的發(fā)生率[1]。國內(nèi)外學(xué)者試圖運用多種理論解釋衰老的進程，其中包括氧化應(yīng)激學(xué)說，即氧化產(chǎn)物的生成與清除之間的失衡，導(dǎo)致了衰老的發(fā)生、發(fā)展[2]。絞股藍是葫蘆科草質(zhì)藤本植物，是五加科之外唯一含有與人參皂苷相似結(jié)構(gòu)皂苷的植物，其皂苷成分具有保護心腦血管、抗腦缺氧、抗腫瘤及抗衰老等藥理作用，并在治療高血脂癥、血管性癡呆、消化道潰瘍以及中風等方面取得了一定的療效，因此引起國內(nèi)外眾多學(xué)者的重視[3]。本實驗擬通過研究絞股藍皂苷（Gyp）對自然衰老小鼠皮膚中氧化產(chǎn)物含量及抗氧化酶活性的影響，探索其抗衰老的藥理作用及機制，為絞股藍的進一步臨床應(yīng)用及市場開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1　材料和方法

1.1實驗動物及分組

清潔級昆明種小鼠18月齡40只，6月齡20只，雌雄各半，體重35～59g，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。隨機分3組：青年組（A）、老年對照組（B）和老年給藥組（C）。動物按性別及組別分籠飼養(yǎng)，常規(guī)飼食飲水。

1.2藥品制備及給藥

絞股藍皂苷粉末（成都曼思特生物科技有限公司）用干燥箱烘干24h，以水作為溶劑進行浸提，浸提條件為90℃，30min。冷卻至室溫，過濾、澄清，得提取液0.4g生藥/ml，放置4℃冰箱待用。A、B組灌胃生理鹽水20ml/kg，C組灌胃絞股藍皂苷提取液8g/kg。以上操作每天1次，共進行30d。

1.3取材及指標測定

將各組小鼠于第31天用剃毛器脫去背部皮膚毛發(fā)，面積為2cm×3cm。處死小鼠，取背部脫毛處全層皮膚，面積為1cm×1cm，制成組織勻漿，按試劑盒（南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所）說明書的方法分別檢測丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均通過SPSS12.0軟件進行處理，各組實驗參數(shù)以表示。組間差異按方差分析進行顯著性檢驗，并用最小顯著差法(LSD法)作兩兩比較。＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

與A組比較，B組和C組的MDA含量均增加，SOD、CAT和GSH-Px活性均不同程度降低（＜0.05）。與B組比較，C組的MDA含量降低，SOD、CAT和GSH-Px活性增加（＜0.05）。提示自然衰老小鼠皮膚中，氧化產(chǎn)物MDA含量增加，抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性降低；灌胃絞股藍皂苷可減少自然衰老小鼠皮膚組織中MDA生成，提高SOD、CAT、GSH-Px活性。見表1。

表1　絞股藍皂苷對自然衰老小鼠皮膚的抗氧化作用

SOD（U/mgprot）463.77±92.15 200.79±26.53*312.27±42.87*☆CAT（U/mgprot）101.18±15.75 50.51±9.52*65.58±11.94*☆組別青年組（A）老年對照組（B）老年給藥組（C）GSH-Px（μmol/L）259.41±42.19 130.02±39.08*198.71±30.04*☆MDA（nmol/mgprot）4.83±1.03 12.42±2.86*10.02±2.01*☆樣本數(shù)20 20 20

3　討論

衰老的自由基學(xué)說認為，衰老過程源于氧化應(yīng)激反應(yīng)，即過剩的自由基對細胞及組織的損害[4-5]。氧自由基是機體正常代謝的中間產(chǎn)物，因含有未配對的電子，而具有不穩(wěn)定性，可引發(fā)鏈式自由基反應(yīng)。低濃度的氧自由基是機體執(zhí)行正常生理功能所必需的，但高濃度時則可攻擊細胞膜、蛋白質(zhì)、核酸而造成組織結(jié)構(gòu)的氧化損傷。氧化應(yīng)激也可以破壞DNA的結(jié)構(gòu)，引發(fā)DNA損傷應(yīng)答，或者直接調(diào)控衰老相關(guān)的信號通路，促進細胞衰老的發(fā)生[6-7]。MDA就是氧自由基與細胞膜中不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化反應(yīng)，形成的氧化終產(chǎn)物[8]。MDA是很強的交聯(lián)劑，可與蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)成難溶性物質(zhì)，使細胞膜硬化導(dǎo)致其通透性降低，影響細胞的物質(zhì)交換，繼而使之破裂、凋亡。與此同時，機體內(nèi)存在對抗氧自由基的抗氧化系統(tǒng)，酶和非酶系統(tǒng)。主要的抗氧化酶包括，SOD、CAT和GSH-Px。SOD是超氧陰離子的清除劑，CAT和GSH-Px可以清除H2O2和脂質(zhì)過氧化物[9-11]。隨著年齡增加，人體內(nèi)MDA大量堆積，如SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶活性降低[12]，因此監(jiān)測氧化產(chǎn)物含量和抗氧化酶活性的變化可在一定程度上了解氧化應(yīng)激在器官、組織自然衰老中的作用。

本實驗中，老年對照組沒有給予絞股藍皂苷處理，其各項實驗數(shù)據(jù)與青年組比較顯示，較正常皮膚自然衰老的小鼠皮膚組織中氧化產(chǎn)物增加，抗氧化酶活性降低，支持氧化應(yīng)激致皮膚衰老的假設(shè)。與老年對照組相較，老年給藥組的檢測結(jié)果顯示，灌胃絞股藍皂苷一段時間后，衰老的皮膚組織中抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性增高，MDA含量降低。提示絞股藍皂苷可以通過提高抗氧化酶的活性，增強氧自由基的清除，減輕脂質(zhì)過氧化損傷的程度，使MDA含量降低，從而削弱氧化應(yīng)激反應(yīng)對組織的損傷，一定程度延緩皮膚衰老。但最佳的給藥途徑、時間和濃度有待進一步的深入研究。絞股藍皂苷是否還可以通過其他機制減輕或改變自然衰老皮膚的損傷可成為研究人員探索的新方向。

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編輯/張惠娟

Study on the effect of gypenosides on antioxidative injury in aged mice skin

SU Qiu-xiang1,CONG Jing2,GONG Qian3
（1.Morphology Central Lab,Shenyang Medical College,Shenyang 110034,Liaoning,China; 2.Department of Histology-embryology,Shenyang Medical College,Shenyang 110034,Liaoning,China; 3.Shenyang Medical College,Shenyang 110034,Liaoning,China）

ObjectiveTo study the antioxidative protection of Gypenosides in aged mices skin. Methods 60 mices were selected and randomly divided into 3 groups:young control group(group A),aged control group(group B)and aged dose group(group C).In group A and group B,normal saline(20ml/kg)was given intragastricly.Gypenosides extracts at doses of 8g/kg was administered intragastricly in group C,once a day.Skin tissue from treated mices were prepared for analysis 30 days after treatments.Relative level changes of MDA,SOD,CAT and GSH-Px were measured. Results Increases in MDA and decreases in SOD,CAT and GSH-Px were observed in both group B and group C as compared with group A(<0.05).Compared with mices in group B,mices in group C showed significant decreases in MDA and increases in SOD,CAT and GSH-Px(<0.05). ConclusionIntragastric administration of Gypenosides extracts to mices could alleviate the oxidative injury to aged skin,and therefore could delay the skin aging in mices.

Gypenosides;antioxidative injury;aged skin

R339.3+8

A

1008-6455（2015）03-0034-02

2014-11-28

2015-01-27