果膠酶和纖維素酶對五龍鵝免疫性能和血清生化指標(biāo)的影響

■李星晨 毛倩倩 王寶維 葛文華 張名愛 李文立

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東青島 266109；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所，山東青島 266109）

果膠酶和纖維素酶分別是指能夠分解果膠質(zhì)和纖維素的一類酶的總稱。王冬群研究表明，日糧中添加柑橘等含果膠高的飼料顯著降低了肉雞的生產(chǎn)性能和飼料中DM、OM、EE、淀粉及氨基酸的消化率[1]。Lin研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加果膠含量高的原料能顯著降低雛鵝的生長速度，影響機(jī)體免疫性能[2]。果膠酶是一個復(fù)合酶系，能夠裂解存在于植物細(xì)胞壁和細(xì)胞胞間質(zhì)層的果膠，使植物細(xì)胞組織崩解，釋放營養(yǎng)物質(zhì)，使?fàn)I養(yǎng)成分得到充分利用[3]。Choct研究發(fā)現(xiàn)，在玉米-豆粕型日糧中添加果膠酶和纖維素酶能有效消除其所含果膠等NSP的抗?fàn)I養(yǎng)作用[4]，降低對免疫性能的負(fù)面影響。關(guān)于日糧中添加果膠酶和纖維素酶對五龍鵝免疫性能和血清生化指標(biāo)的影響，國內(nèi)外未見報道。本試驗通過研究高纖維基礎(chǔ)日糧中添加果膠酶和纖維素酶對五龍鵝免疫性能和血清生化指標(biāo)的影響，為鵝高纖維基礎(chǔ)日糧中果膠酶和纖維素酶的合理添加提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

果膠酶（5 000 U/g）和纖維素酶（20 000 U/g）由山東濰坊蘇柯漢生物科技有限公司提供。

1.2 試驗設(shè)計與飼糧配方

選216只1日齡健康五龍鵝隨機(jī)分成6組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)12只，公母各半。第Ⅰ組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加5 000、10 000、15 000 U/kg的果膠酶，Ⅴ組在基礎(chǔ)飼糧中添加5 000 U/kg的果膠酶和40 000 U/kg的纖維素酶，Ⅵ組添加10 000 U/kg的果膠酶和40 000 U/kg的纖維素酶(纖維素酶按廠家最佳效果推薦量添加)?；A(chǔ)飼糧參照美國NRC（1994）鵝飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和中國飼料營養(yǎng)成分表配制，以玉米-豆粕為主要原料，玉米秸稈為纖維源，分（1～4周齡）和（5～16周齡）2個階段，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗五龍鵝采用自由采食和飲水，全期舍飼，自配混合料，喂料采用少喂勤添。育雛期隨時調(diào)節(jié)育雛溫度，育雛前 3 周溫度分別為 28～30、26～27、24～25℃，3周齡以后可逐漸降到常溫。光照：第1～2周，23 h；第3周，18 h；第4～12周采用自然光照。平均相對濕度65%。按常規(guī)程序進(jìn)行疫苗的免疫接種：1日齡小鵝瘟0.5 ml/只、12日齡鵝副黏二聯(lián)滅活病毒疫苗 0.4 ml/只，36日齡禽流感（H5/H9）二價滅活油苗0.6 ml/只。每天記錄各組采食量、死淘數(shù)等相關(guān)數(shù)據(jù)，并注意觀察鵝的生長狀況。

2 測定指標(biāo)及方法

2.1 免疫指標(biāo)的測定

2.1.1 免疫器官指數(shù)的測定

第4、16周齡時，從每個重復(fù)中抽取2只試驗鵝，共36只，屠宰，取胸腺、脾臟、法氏囊，仔細(xì)剔除脂肪后，用吸水紙吸干表面水分和其他物質(zhì)，準(zhǔn)確稱重，并記錄數(shù)據(jù)，按下式計算胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)：

免疫器官指數(shù)（mg/g）=免疫器官重量/活體重。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

2.1.2 禽流感抗體效價的測定

按常規(guī)程序，對試驗鵝群進(jìn)行禽流感免疫接種，每隔7 d隨即抽取各重復(fù)組試驗鵝2只，翅靜脈采血，分離血清，采用血凝和血凝抑制試驗法（HA-HI）測定鵝禽流感抗體滴度。

2.2 血液生化指標(biāo)的測定

第4、16周齡時，從每個重復(fù)中抽取2只試驗鵝，共36只，翅靜脈采血，離心制得血清樣品，分裝，-40℃冷凍保存。測定血糖、總膽固醇、甘油三酯、尿酸、尿素氮的水平和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力。上述指標(biāo)均用試劑盒測定，所用試劑盒購自南京建成生物研究所。

2.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 19.0軟件中單因素方差分析(Oneway ANOVA)中的LSD法進(jìn)行多重比較。試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。P＜0.05和P＜0.01分別為差異顯著和極顯著水平。

3 結(jié)果與分析

3.1 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝免疫性能的影響

3.1.1 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝免疫器官指數(shù)的影響（見表2）

表2 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝免疫器官指數(shù)的影響(mg/g)

由表2可見，4周齡時，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組胸腺指數(shù)均高于Ⅰ組，但差異不顯著(P＞0.05)；Ⅳ和Ⅵ組脾臟指數(shù)高于Ⅰ組，Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ組脾臟指數(shù)低于Ⅰ組，但差異均不顯著(P＞0.05)；Ⅵ組法氏囊指數(shù)高于Ⅰ組，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組低于Ⅰ組，但差異均不顯著(P＞0.05)

16周齡時，Ⅵ組胸腺指數(shù)高于Ⅰ組，其余組胸腺指數(shù)均低于Ⅰ組，但差異均不顯著(P＞0.05)，Ⅵ組脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著高于對照組（P＜0.05）。

3.1.2 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝禽流感抗體效價的影響（見表3）

表3 果膠酶和纖維素酶對鵝禽流感抗體效價的影響(log2)

由表3可見，免疫前和免疫后第7、14、21 d時，試驗組鵝血清禽流感抗體效價與對照組相比差異均不顯著(P＞0.05)。

3.2 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝血清生化指標(biāo)的影響（見表4）

表4 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝血液生化指標(biāo)的影響

由表4可見，4周齡時，血糖、總膽固醇、甘油三酯和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量有增高的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)；尿酸和尿素氮有降低的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)；各組之間血清總蛋白無顯著差異(P＞0.05)。

16周齡時，Ⅵ組血糖、尿酸和尿素氮與Ⅰ組相比，差異顯著（P＜0.05），Ⅲ和Ⅳ組影響不顯著（P＞0.05）；Ⅴ和Ⅵ組血清總蛋白顯著高于Ⅰ組（P＜0.05）；其余各指標(biāo)組間差異均不顯著(P＞0.05)。

4 討論

4.1 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝免疫性能的影響

4.1.1 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝免疫器官指數(shù)的影響

家禽的重要免疫器官主要有胸腺、脾臟和法氏囊，免疫器官指數(shù)是反映動物機(jī)體免疫器官的生長發(fā)育狀況的指標(biāo)，在一定范圍內(nèi)，免疫器官指數(shù)越高，說明禽類的免疫性能越好。單一酶制劑對家禽免疫性能影響的研究相對較少，高峰研究認(rèn)為，NSP酶對家禽免疫功能的影響可能與其能提高養(yǎng)分利用率有關(guān)[5]。王芬等研究發(fā)現(xiàn)，東北白鵝日糧中添加復(fù)合纖維素酶能提高免疫器官指數(shù)和血清中IgG及IgA含量，增強(qiáng)鵝的免疫功能[6]。王寶維等認(rèn)為，肉雞日糧中添加果膠酶對免疫器官指數(shù)的影響不顯著，但與纖維素酶配合使用則能夠顯著提高肉雞的免疫器官指數(shù)[7]。本試驗研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加果膠酶制劑對4周齡五龍鵝免疫器官指數(shù)無顯著影響；10 000 U/kg果膠酶與40 000 U/kg纖維素酶配合使用能顯著提高16周齡五龍鵝脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，表明果膠酶和纖維素酶配合使用對五龍鵝后期免疫器官的生長發(fā)育有積極的影響作用，與王寶維等[7]研究結(jié)果有一定一致性。

4.1.2 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝禽流感抗體效價的影響

禽流感抗體效價是反映機(jī)體禽流感免疫狀態(tài)的指標(biāo)?？贵w效價水平的高低直接反映了機(jī)體體液免疫狀態(tài)，同時也表明動物機(jī)體抵御疾病能力的強(qiáng)弱。目前，國內(nèi)外關(guān)于NSP酶單酶制劑對禽流感抗體效價的影響研究相對較少，影響效果和作用機(jī)理尚不明確。朱忠珂認(rèn)為，添加酶制劑對肉雞血液新城疫抗體效價提高不顯著[8]。王寶維認(rèn)為，添加果膠酶對肉雞新城疫抗體效價影響不顯著，果膠酶和纖維素酶能顯著提高肉雞新城疫抗體效價[7]。本試驗結(jié)果顯示，添加果膠酶和纖維素酶制劑對五龍鵝流感抗體效價效果影響不顯著。與上述研究結(jié)果不一致，可能與動物品種、動物日齡、飼糧中粗纖維含量、酶的組成和酶活等因素的差異存在一定關(guān)系，或是因為不同抗體之間相互影響，導(dǎo)致試驗結(jié)果不一致。

4.2 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝血清生化指標(biāo)的影響

4.2.1 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝血糖水平的影響

血清中許多生化指標(biāo)可能受發(fā)育階段、內(nèi)分泌狀態(tài)和營養(yǎng)水平的影響。血糖是動物機(jī)體主要能量來源，可參與機(jī)體的各種代謝[9]，為其提供能量，血糖水平反映了通過腸道吸收進(jìn)入血液葡萄糖的量，黃燕華研究發(fā)現(xiàn)，其水平的高低與碳水化合物消化率有關(guān)[10]。姜曉霞研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加果膠酶能顯著改善血糖水平[11]。劉長忠研究發(fā)現(xiàn)，NSP酶制劑能顯著提高血清中的葡萄糖濃度[12]。本試驗結(jié)果表明，日糧中單獨添加果膠酶和纖維素酶對4周齡五龍鵝血糖濃度無顯著影響，10 000 U/kg果膠酶和40 000 U/kg纖維素酶配合使用可顯著提高16周齡五龍鵝血糖濃度，試驗結(jié)果與之前研究結(jié)果有一定一致性。

4.2.2 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝血清總膽固醇、甘油三酯和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

Hemier等研究發(fā)現(xiàn)，家禽體內(nèi)脂肪沉積的程度主要取決于血液中甘油三脂和膽固醇水平，當(dāng)動物機(jī)體對脂類的消化吸收不良時，總膽固醇和甘油三酯的濃度就會明顯下降[13-14]。聞治國研究發(fā)現(xiàn)，在北京填鴨日糧中添加復(fù)合酶制劑能顯著血清中的甘油三酯，對總膽固醇含量影響不顯著[9]。姜曉霞研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加果膠酶對血清中總膽固醇、甘油三酯的水平和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力無顯著影響；與纖維素酶協(xié)同作用，能顯著改善或提高上述指標(biāo)的水平與活力[11]。張興認(rèn)為，在玉米-豆粕型日糧中添加復(fù)合NSP酶可顯著提高肉雞血清中的甘油三脂[15]。Daly等研究發(fā)現(xiàn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶是一種重要的轉(zhuǎn)氨酶，能催化氨基的轉(zhuǎn)移，其活性代表肝臟合成蛋白質(zhì)的能力[16]。

張芹認(rèn)為，添加酶制劑能提高谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性[17]。王金偉研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬中添加酶制劑對谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性影響不顯著[18]。本試驗研究結(jié)果表明，日糧中添加果膠酶和纖維素酶對五龍鵝血清總膽固醇、甘油三酯和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性影響不顯著。導(dǎo)致這種差異的原因，可能與動物品種、動物日齡、飼糧中粗纖維含量、酶的組成和酶活等因素的差異存在一定關(guān)系。

4.2.3 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝血清蛋白水平的影響

王金偉研究發(fā)現(xiàn)，血清蛋白參與營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運，其含量的高低變化，可反映機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝的強(qiáng)弱[19]。張興研究表明，肉雞玉米-豆粕型日糧中添加NSP酶對血清總蛋白有提高的趨勢[16]。本試驗結(jié)果表明，單獨添加果膠酶對五龍鵝血清總蛋白含量影響不顯著；10 000 U/kg果膠酶和40 000 U/kg纖維素酶配合使用能提高16周齡五龍鵝血清蛋白含量，與張芹的研究結(jié)果基本一致，這可能是由于添加果膠酶和纖維素酶后能增加日糧中NSP的分解，增加腸道對蛋白質(zhì)的消化吸收，使血液中總蛋白含量升高[18]。

4.2.4 果膠酶和纖維素酶對五龍鵝血清尿酸、尿素氮水平的影響

姜曉霞研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加果膠酶能顯著改善血清中尿酸、尿素氮水平[11]。血清中尿酸和尿素氮可反映家禽對蛋白質(zhì)在體內(nèi)代謝利用情況[20]，血液尿素氮含量可以準(zhǔn)確的反映體內(nèi)氨基酸代謝的平衡狀態(tài)，血液尿素氮濃度低，氨基酸代謝平衡良好[21]，尿酸排出量低[22]。張芹研究發(fā)現(xiàn)，添加酶制劑能極顯著降低21、42日齡肉雞血液中尿酸含量[17]。安嬌陽研究發(fā)現(xiàn)，肉雞飼糧中添加纖維素酶可顯著降低前期肉雞血液尿素氮的濃度，對后期肉雞血液尿素氮濃度無顯著影響[23]。本試驗結(jié)果顯示，日糧中單獨添加果膠酶對五龍鵝血清尿酸和尿素氮影響不顯著，10 000 U/kg果膠酶與40 000 U/kg纖維素酶配合使用能顯著降低16周齡五龍鵝血清中尿酸和尿素氮的含量，與之前的研究結(jié)果基本一致。同時也存在一定的差異，可能與動物品種、動物日齡等因素的差異有關(guān)，還有待于進(jìn)一步研究。

5 結(jié)論

①日糧中單獨添加果膠酶對4周齡和16周齡五龍鵝免疫性能和血清生化指標(biāo)無顯著影響。

②日糧中10 000 U/kg果膠酶與40 000 U/kg纖維素酶配合使用的效果明顯，可顯著提高16周齡五龍鵝脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)、血糖和血清總蛋白濃度，顯著降低16周齡五龍鵝血清尿酸和尿素氮濃度。

③日糧中10 000 U/kg果膠酶與40 000 U/kg纖維素酶配合使用僅能顯著提高16周齡五龍鵝的相關(guān)指標(biāo)，對4周齡五龍鵝免疫性能和血清生化指標(biāo)無顯著影響。