多囊卵巢綜合征患者血清骨橋蛋白含量測定的臨床價值

李文翠 張吉才 謝 飛 高 波

湖北醫(yī)藥學院附屬十堰市太和醫(yī)院檢驗科，湖北十堰 442000

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是以稀發(fā)排卵或無排卵、高雄激素或胰島素抵抗、多囊卵巢為特征的內(nèi)分泌紊亂的癥候群，是婦科常見的內(nèi)分泌紊亂性疾病[1-2]。 由于PCOS 患者內(nèi)分泌紊亂對子宮內(nèi)膜所造成的不良影響，致使白血病抑制因子、細胞間黏附分子在植入窗期子宮內(nèi)膜中的表達受抑制；影響胚胎識別、黏附及植入，進而導致胚泡著床不良，成為該病種低妊娠率和高流產(chǎn)率的重要原因。 由于PCOS 的臨床表現(xiàn)呈顯著異質(zhì)性，不但嚴重影響患者的生殖功能，而且顯著誘發(fā)并增加雌激素依賴性腫瘤如子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率[3]，可出現(xiàn)代謝失調(diào)，如高雄激素血癥、胰島素抵抗、脂代謝異常[4-5]，遠期還可進一步增加心血管疾病、糖尿病等的患病風險[6]。但迄今為止PCOS 的病因并未明確，目前認為與下丘腦-垂體-卵巢軸功能異常、代謝、腎上腺功能紊亂、遺傳等因素相關(guān)[7]。

骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是由Franzen 等從骨基質(zhì)和牙齒中分離出的一種富含天冬氨酸的磷酸蛋白，含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp，RGD）序列、凝血酶裂解位點、基質(zhì)金屬蛋白酶作用位點、非RGD 細胞黏附位點和鈣離子結(jié)合位點[8]。人體OPN 基因位于4q13 點位，含有6 個內(nèi)含子及7 個外顯子。臨床研究證實，OPN 在細胞黏附、細胞募集、細胞因子表達、信號轉(zhuǎn)導、腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移、礦化作用、細胞免疫、血管生成、組織重建、誘導尿激酶型纖溶酶原激活劑的表達[9]、抑制內(nèi)皮細胞凋亡、動脈粥樣硬化、自身免疫疾病、其他炎癥性疾病如肺纖維化等病理生理過程中發(fā)揮重要作用[10]。 OPN 可促進巨噬細胞、中性粒細胞向炎癥部位遷移，因此將其視為一種前炎癥因子[11]，同時OPN 在胰島素抵抗、代謝綜合征等過程中的作用也逐漸受到廣泛關(guān)注[12]。為探討OPN 與PCOS 患者的相關(guān)性及其臨床價值，本研究采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測PCOS 患者的血清OPN 水平，并進一步分析兩者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 納入及排除標準

研究前3 個月體重指數(shù)均無明顯變化；未使用過任何激素及其他可能影響脂蛋白、胰島素分泌及作用的藥物。 為防止混入影響結(jié)局指標的因素，排除合并以下疾病的患者：不明原因的月經(jīng)紊亂、性激素異常和多囊卵巢；各種急慢性傳染性疾病、難以控制的高血壓、動脈粥樣硬化性心臟病等。

1.2 一般資料

前瞻性、連續(xù)性納入2012 年1 月～2014 年8 月在湖北醫(yī)藥學院附屬十堰市太和醫(yī)院（以下簡稱“我院”）就診的PCOS 患者為研究對象。 PCOS 患者的診斷標準符合2003 年鹿特丹標準[13]：超聲檢查存在多囊卵巢（至少一側(cè)卵巢存在≥12 個直徑2～9 mm 的小卵泡，和/或卵巢體積＞10 mL）；臨床或生化上雄激素過多癥（月經(jīng)第2～4 d 血激素睪酮≥2.8 nmol/L，或雄烯二酮≥9.5 nmol/L）；無排卵性月經(jīng)失調(diào)，符合上述3 項中2 項并排除其他病因者則可診斷為PCOS。 并選擇同期我院健康體檢、年齡匹配的健康女性為正常對照組。 再測定PCOS 患者的身高及體重，計算體重指數(shù)（BMI）：BMI=體重（kg）/身高×身高（m2），將PCOS患者分為肥胖組（BMI≥26 kg/m2）和非肥胖組（BMI＜26 kg/m2）。依據(jù)納入及排除標準，最終選入54 例PCOS患者。 其中肥胖組32 例，年齡22～36 歲，平均（28.94±4.59）歲，BMI（28.50±2.63）kg/m2；非肥胖組22 例，年齡22～36 歲，平 均（28.70±4.24）歲，BMI（21.10±1.90）kg/m2。 正常對照組22 名健康女性中，年齡21～36歲，平均（28.73±4.86）歲，BMI（21.03±2.17）kg/m2。各組年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05），具有可比性。本次研究符合赫爾辛基宣言及中國臨床試驗研究相關(guān)法律法規(guī)，并獲取我院醫(yī)學倫理委員會審核批準。所有受試患者入選前均已簽署或授權(quán)家屬簽署知情同意書，獲得知情同意書的過程符合臨床研究的質(zhì)量管理規(guī)范要求。

1.3 檢測方法

測定兩組患者的總膽固醇（TC）、總?cè)８视停═G）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。 葡萄糖耐量實驗（oral glucose tolerance test，OGTT）及胰島素釋放實驗：所有患者在檢查日清晨8：00 進行OGTT 及胰島素釋放實驗， 抽取空腹靜脈血后立即口服75 g 葡萄糖，于口服后60、120 min 時分別抽取靜脈血，采用化學發(fā)光法測定血胰島素（insulin，INS），氧化酶法測定血葡萄糖（serum glucose，SG）。 胰島素抵抗指數(shù)（homeostasis model assessment insulin resistance，HOMA-IR） 的計算公式為：HOMA-IR=[INS（SG）/22.5]，而胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitivity index，ISI）的計算公式為：ISI=1/[空腹SG（空腹INS）]。

血清OPN 水平的測定：月經(jīng)規(guī)律者于月經(jīng)來潮的第2～3 天抽血，而PCOS 患者如閉經(jīng)則查血人絨毛膜促性腺激素排除妊娠后，根據(jù)婦科超聲檢查＜10 mm卵泡者于次日抽血。所有患者在抽血前均需隔夜禁食12 h 后于次日清晨抽血，低溫2200 r/min 離心10 min，分離血清，-80℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?采用ELISA 方法，檢測試劑為美國Immuno Way Biotechnology 公司產(chǎn)品。操作步驟均按試劑盒說明書進行，所有樣品設立復孔，均在同一批次內(nèi)檢測。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 18.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料用率表示，偏態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)P25～P75）表示，組間及組內(nèi)比較采用秩和檢驗。 計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗。 相關(guān)性分析采用Pearman 分析。 以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者血脂水平比較

肥胖組患者的血清總?cè)８视退斤@著高于正常對照組及非肥胖組患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。而TC、LDL-C 和HDL-C 在兩組患者之間差異無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）。 見表1。

表1 PCOS 患者與正常對照組的血脂水平比較（mmol/L，±s）

表1 PCOS 患者與正常對照組的血脂水平比較（mmol/L，±s）

注：與正常對照組比較，*P ＜0.05；與非肥胖組比較，#P ＜0.05；TC：總膽固醇；TG：總?cè)８视?；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；PCOS：多囊卵巢綜合征

組別 例數(shù) TC TG LDL-C HDL-C正常對照組非肥胖組肥胖組22 22 32 4.64±0.15 4.65±0.19 4.68±0.24 1.03±0.17 1.12±0.28 2.51±0.20*#2.61±0.21 2.63±0.28 2.64±0.21 1.45±0.24 1.47±0.22 1.42±0.17

2.2 非肥胖組與肥胖組PCOS 患者血糖及胰島素水平的比較

肥胖組患者OGTT 后60、120 min 血糖、空腹INS、OGTT 后60、120 min INS 及HOMA-IR 均明顯高于非肥胖組患者，而非肥胖組患者ISI 明顯高于肥胖組，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。 見表2。

2.3 各組血清OPN 水平的比較

肥胖及非肥胖PCOS 患者血清OPN 水平顯著高于正常對照組，其中肥胖組患者血清OPN 水平（107.12±5.88）明顯高于非肥胖組（66.69±4.23），差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。

2.4 PCOS 患者OPN 與血脂、BMI、HOMA-IR 和ISI相關(guān)性分析

Pearson 相關(guān)性分析顯示，PCOS 患者血清的OPN與BMI、HOMA-IR 均呈正相關(guān)（r=0.978、0.981，均P ＜0.05），與ISI 呈負相關(guān)（r = -0.704，P ＜0.05），而與血脂無明顯相關(guān)性（P ＞0.05）。

表2 非肥胖與肥胖PCOS 患者OGTT 及胰島素水平的比較（±s）

表2 非肥胖與肥胖PCOS 患者OGTT 及胰島素水平的比較（±s）

注：OGTT：葡萄糖耐量實驗；INS：胰島素；SG：血糖；HOMA-IR：胰島素抵抗指數(shù)；ISI：胰島素敏感指數(shù)；PCOS：多囊卵巢綜合征

組別 例數(shù) 空腹SG（mmol/L）OGTT 后60 min血糖（mmol/L）OGTT 后120 min血糖（mmol/L）空腹INS（mU/L）OGTT 后60 min INS（mU/L）OGTT 后120 min INS（mU/L） HOMA-IR ISI非肥胖組肥胖組t 值P 值22 32 5.01±0.22 5.02±0.20 1.408 0.211 7.45±0.49 10.29±0.74 2.746 0.047 6.34±0.27 8.19±0.38 3.125 0.038 11.03±1.75 20.34±2.54 3.490 0.019 84.40±5.66 139.00±4.10 3.105 0.024 93.20±3.61 134.94±3.56 2.846 0.045 2.58±0.34 4.67±0.39 3.054 0.034 0.04±0.01 0.02±0.01 2.845 0.031

3 討論

PCOS 是以稀發(fā)排卵或無排卵、高雄激素或胰島素抵抗、多囊卵巢為特征的內(nèi)分泌紊亂的代謝綜合征[1-2]，其主要病征包括月經(jīng)稀發(fā)或閉經(jīng)、慢性無排卵、不孕、多毛及痤瘡等，其中高胰島素血癥和胰島素抵抗是PCOS 病理生理過程的重要機制之一。 本研究結(jié)果顯示，肥胖PCOS 患者血清總?cè)８视退矫黠@高于非肥胖PCOS 患者，這提示PCOS 患者的脂質(zhì)代謝紊亂與肥胖存在一定的關(guān)聯(lián)。此外，本研究結(jié)果也顯示，肥胖PCOS 患者空腹、OGTT 后血糖、 胰島素水平及HOMA-IR 均顯著高于非肥胖PCOS 患者，而ISI 明顯低于非肥胖PCOS 患者，這提示隨著患者體重的增加，PCOS 患者的高胰島素血癥進一步加重，且胰島素敏感性進一步下降，亦而導致患者血糖水平的升高。

研究表明脂肪組織是一個獨立的人體器官，能夠產(chǎn)生分泌大量的不同生物活性分子，如與炎癥相關(guān)的細胞色素、與胰島素抵抗和2 型糖尿病相關(guān)的激素抵抗素，是介導炎性反應的重要組織之一，是能量代謝和炎性反應之間相互作用的重要樞紐之一[8]。 當患者處于超重或肥胖狀態(tài)下，脂肪組織中大量巨噬細胞開始浸潤，并顯著表達前炎癥因子，從而介導炎性反應的發(fā)生，使肥胖患者處于一種長期的慢性炎性反應的狀態(tài)[7]。骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是由Franzen 等從骨基質(zhì)和牙齒中分離出的一種富含天冬氨酸的磷酸蛋白，含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp，RGD）序列、凝血酶裂解位點、基質(zhì)金屬蛋白酶作用位點、非RGD 細胞黏附位點和鈣離子結(jié)合位點[8]。 作為一種分泌型糖基化磷脂蛋白，OPN 可廣泛表達于各種組織和細胞內(nèi)，如骨組織、腎臟（胎腎和成年腎）、肝臟、胰腺、腦組織、肺臟、乳腺、睪丸、心血管、骨髓和蛻膜等，不同類型的細胞如骨細胞、巨噬細胞、成骨細胞、破骨細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞、神經(jīng)細胞、血管平滑肌細胞、活化T 細胞及腫瘤細胞等[9]。 OPN 在子宮內(nèi)膜及其滋養(yǎng)層細胞中均由表達，參與受精、胚胎著床、胎盤形成等一系列生殖全過程，對子宮與胎盤滋養(yǎng)組織的連接發(fā)揮重要作用。OPN 通過改變細胞骨架促進細胞間黏附并發(fā)揮其游走作用，其RGD 位點的突變對于細胞間的黏附和游走發(fā)揮重要機制。整合素受體結(jié)合0PN 的RGD 序列，導致胞漿重新識別，引起局部黏附。 OPN 最初是由Franzen 等從骨基質(zhì)和牙齒中發(fā)現(xiàn)而被認識的，后期研究表明其在細胞黏附、細胞募集、細胞因子表達、信號轉(zhuǎn)導、腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移、礦化作用、細胞免疫、血管生成、組織重建、誘導尿激酶型纖溶酶原激活劑的表達、抑制內(nèi)皮細胞凋亡、動脈粥樣硬化、自身免疫疾病、其他炎癥性疾病如肺纖維化等病理生理過程中發(fā)揮重要作用[10]。OPN 可促進巨噬細胞、中性粒細胞向炎癥部位遷移，因此將其視為一種前炎癥因子，同時OPN 在胰島素抵抗、代謝綜合征等過程中的作用也逐漸受到廣泛關(guān)注[11]。 Burton等[14]利用原位雜交法發(fā)現(xiàn)OPN 的mRNA 位于子宮內(nèi)膜的腔上皮細胞及腺上皮細胞，并認為該蛋白可能是分泌中期內(nèi)膜的組織營養(yǎng)物，在胚胎著床過程中發(fā)揮重要作用。通過動物實驗在早孕羊子宮內(nèi)膜上發(fā)現(xiàn)了OPN mRNA 表達，并證實子宮內(nèi)膜分泌期OPN 達到高峰，且受雌、孕激素的調(diào)節(jié)。 Von-Wolff 等[15]通過動物實驗進一步報道，豬妊娠期第20 天后OPN 表達量呈現(xiàn)明顯上升趨勢，一直持續(xù)到妊娠85 d，整個妊娠過程中OPN 主要由子宮內(nèi)膜腺上皮分泌。 近年來陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，人體月經(jīng)周期中子宮內(nèi)膜均可見OPN 表達，但子宮內(nèi)膜增殖期表達相對較少，子宮內(nèi)膜的分泌中、晚期表達較增殖期明顯上升，其后逐漸減低直至下次月經(jīng)來潮。

本研究結(jié)果顯示，非肥胖PCOS 患者血清OPN明顯高于正常對照組，提示PCOS 患者機體可能處于一種慢性炎癥狀態(tài)。 此外，相當一部分PCOS 患者伴有肥胖[16]，而本研究結(jié)果，顯示肥胖PCOS 患者血清OPN明顯高于非肥胖PCOS 患者，相關(guān)性分析結(jié)果顯示OPN與BMI、HOMA-IR 呈正相關(guān)，這也說明隨著患者體重的增加和胰島素抵抗的加重，機體炎癥程度也在增加[17]，提示PCOS 患者體內(nèi)脂肪的增加及胰島素抵抗的發(fā)生，加重了機體的慢性炎癥程度。

綜上所述，PCOS 患者表現(xiàn)出較正常婦女較高的OPN 水平，且二者與患者的BMI、HOMA-IR 具有一定的關(guān)聯(lián)性，提示PCOS 患者可能處于一種慢性炎性狀態(tài)，此可能成為診療PCOS 的策略之一。 而本研究也存在一定的局限性，PCOS 患者高OPN 水平的病因?qū)W、及其與肥胖、胰島素抵抗之間的關(guān)系尚需進一步的深入研究。

[1] Kim JJ，Choi YM. Dyslipidemia in women with polycystic ovary syndrome [J]. Obstet Gynecol Sci，2013，56（3）：137-142.

[2] Pasquali R，Gambineri A. Glucose intolerance states in women with the polycystic ovary syndrome[J].J Endocrinol Invest，2013，36（8）：648-653.

[3] Nader S. Hyperandrogenism during puberty in the devel

opment of polycystic ovary syndrome[J].Fertil Steril，2013，100（1）：39-42.

[4] Madnani N，Khan K，Chauhan P， et al. Polycystic ovarian syndrome [J]. Indian J Dermatol Venereol Leprol，2013，79（3）：310-321.

[5] Carmina E. Polycystic ovary syndrome：metabolic consequences and long-term management [J]. Scand J Clin Lab Invest Suppl，2014，74（244）：23-26.

[6] Morotti E，Battaglia B，F(xiàn)abbri R， et al. Cigarette smoking and cardiovascular risk in young women with polycystic ovary syndrome [J]. Int J Fertil Steril，2014，7（4）：221-312.

[7] Diamanti-Kandarakis E，Spritzer PM，Sir-Petermann T，et al. Insulin resistance and polycystic ovary syndrome through life[J].Curr Pharm Des，2012，18（34）：5569-5576.

[8] Bandopadhyay M，Bulbule A，Butti R， et al. Osteopontin as a therapeutic target for cancer [J]. Expert Opin Ther Targets，2014，18（8）：883-895.

[9] Gimba ER，Tilli TM. Human osteopontin splicing isoforms：known roles， potential clinical applications and activated signaling pathways [J]. Cancer Lett，2013，331（1）：11-17.

[10] Sodek J，Ganss B，McKee MD. Osteopontin [J]. Crit Rev Oral Biol Med，2000，11（3）：279-223.

[11] Peacock WF，Maisel A，Kim J，et al. Neutrophil gelatinase associated lipocalin in acute kidney injury [J].Postgrad Med，2013，125（6）：82-93.

[12] Lou Y，Wu C，Wu M，et al. The changes of neutrophil gelatinase-associated lipocalin in plasma and its expression in adipose tissue in pregnant women with gestational diabetes [J]. Diabetes Res Clin Pract，2014，104（1）：136-142.

[13] Rotterdam ESHRE/ASRM-Sponsored PCOS consensus workshop group. Revised 2003 consensus on diagnostic criteria and long-term health risks related to polycystic ovary syndrome （PCOS） [J]. Hum Reprod，2004，19（1）：41-47.

[14] Burton L，Watson AL，Hempstock J，et al. Uterine glands provide histiotrophic nutrition for the human fetus the first trimester of Endocrinol during pregnancy [J]. CLIN Endocrinol Metab，2002，87（6）：2954-2959.

[15] Von-Wolff M，Strowitzki T，Becker V， et al. Endometrial osteopontin，a ligand of beta3-integrin， is maximally expressed around the time of the implantation window [J].Fertil Steril，2001，76（4）：775-781.

[16] 張誠，張奇志，夏雷.脂肪組織炎癥與肥胖關(guān)系的研究進展[J].山東醫(yī)藥，2013，53（41）：102-103.

[17] 李春燕，李素梅.脂肪組織巨噬細胞與胰島素抵抗關(guān)系的研究進展[J].國際病理科學與臨床雜志，2012，32（4）：322-334.