HPLC法快速篩查中成藥中三七/人參莖葉代替根和根莖

費(fèi)毅琴， 楊 萍， 肖 凌， 侯俊杰， 聶 晶

（湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，湖北武漢430064）

HPLC法快速篩查中成藥中三七/人參莖葉代替根和根莖

費(fèi)毅琴， 楊 萍， 肖 凌， 侯俊杰， 聶 晶

（湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，湖北武漢430064）

目的建立HPLC法快速篩查中成藥中以三七/人參莖葉代替根和根莖投料。方法采用HPLC法對含三七/人參的復(fù)方丹參片、三七片/膠囊、參苓白術(shù)散進(jìn)行篩查，檢測其中的人參皂苷Rb3，Rg1和Re，色譜柱為Agi1ent E-c1ipse P1us C18（5μm，4.6mm×250mm），流動相為乙腈-水梯度洗脫，體積流量為1.0mL/min，檢測波長為203 nm。結(jié)果若檢出人參皂苷Rb3，則為三七莖葉投料；若人參皂苷Rg1/Re比值小于5，則為人參莖葉投料。復(fù)方丹參片存在以三七/人參莖葉非法投料的現(xiàn)象。結(jié)論本法較原補(bǔ)充檢驗(yàn)中TLC法準(zhǔn)確度高，不存在假陽性的干擾。

三七；人參；莖葉；根和根莖；HPLC；快速篩查；中成藥

三七功效散瘀止血、消腫定痛［1］，人參功效生津養(yǎng)血、安神益智等［1］，在許多中成藥中作為君藥或臣藥使用。但近年來，在國家評價抽驗(yàn)監(jiān)管過程中，浙江省藥檢所、北京市藥檢所、湖北省藥檢院均發(fā)現(xiàn)中成藥中存在以人參/三七莖葉代替人參、三七根和根莖投料的現(xiàn)象。早在2008年，國家局頒布了復(fù)方丹參片藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件［2］，設(shè)有三七莖葉皂苷的薄層檢查項(xiàng)，可對該品種的三七投料進(jìn)行控制。黃捷等用高效液相色譜法對建立的薄層色譜法鑒別復(fù)方丹參片中添加三七莖葉進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果高效、準(zhǔn)確［3］。但目前僅有針對單品種的檢測方法，尚無直接針對人參/三七莖葉投料的通用檢測方法。本實(shí)驗(yàn)針對這一監(jiān)管問題，建立HPLC法快速鑒別非法添加人參/三七莖葉中成藥的通用檢測方法，并篩查了部分品種。該法簡便、準(zhǔn)確，可應(yīng)用于含三七、人參的中成藥的快速篩查。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 DIONEX 3000高效液相色譜系統(tǒng)；MS204S/Z、AG135電子天平 （梅特勒-托利多儀器上海有限公司），LC-350A型超聲液中藥處理機(jī)（濟(jì)寧市中區(qū)魯超儀器廠）。

1.2 試藥 人參莖葉皂苷 （111553-200201）、三七莖葉皂苷 （110871-200201）、三七皂苷R1（110745-200517）、人參皂苷 Rg1（110703-200322）、Rb1（110704-200420）、 Rb3 （111686-200501）、 Re（110754-201123）、Rd（111818-201001）均購自中國食品藥品檢定研究院。復(fù)方丹參片、三七片/膠囊、參苓白術(shù)散均為國家評價抽驗(yàn)或省抽驗(yàn)樣品；甲醇、乙腈為色譜純 （TEDIA公司），實(shí)驗(yàn)用水為Mi11i-Q系統(tǒng)制備，磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) Agi1ent Ec1ipse P1us C18色譜柱（5μm，4.6 mm×250 mm）；流動相為乙腈-水，梯度洗脫 （乙腈體積分?jǐn)?shù)在0～5 min為19%，5～30 min為19%～20%，30～31min為20%，31～71 min為20%～40%）；體積流量1.0 mL/min；檢測波長203 nm；進(jìn)樣量10 μL。理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算不低于2 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取人參皂苷Rb3對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液；再取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.2 mg、人參皂苷Re 0.05 mg的混合溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取固體制劑10倍最小單位量，研碎并混勻，加入甲醇25 mL，密塞，超聲處理 （功率500 W，頻率40 kHz）30 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.2.3 模擬復(fù)方丹參制劑樣品的制備 取處方中藥材，按工藝制成模擬復(fù)方丹參制劑樣品。

2.3 方法驗(yàn)證

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 取模擬標(biāo)準(zhǔn)工藝的復(fù)方丹參制劑樣品，按 “2.2.2”項(xiàng)下提取，進(jìn)樣，即為正常復(fù)方丹參制劑供試品色譜圖，通過比較模擬復(fù)方丹參制劑圖 （圖1A）、三七莖葉投料的復(fù)方丹參樣品圖 （圖1D）和人參莖葉投料的復(fù)方丹參樣品圖 （圖1F），可得出該法不存在假陽性的干擾。

2.3.2 耐用性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，用Agi1ent Ec1ipse P1us C18（5μm，4.6 mm×250 mm）、Phenomenex Gemini-C18（5μm，4.6 mm×250 mm））、U1timate XB-SCX（5μm，4.6mm×250mm）三種色譜柱試驗(yàn)，結(jié)果一致。

2.3.3 判定結(jié)果 供試品色譜圖中若檢出人參皂苷Rb3，則為三七莖葉投料 （圖1D）；若人參皂苷Rg1/Re比值小于5，則為人參莖葉投料 （圖1G）。

2.4 樣品檢測 按照上述建立的方法對涉及三七、人參投料的3個中成藥品種共計(jì)50批樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。

表1 測定結(jié)果Tab.1 Results of detection

3 討論

周家明、黃躍進(jìn)等對三七莖葉開發(fā)利用［4-8］中指出，三七莖葉的活性成分與三七相似，且對血液心血管等系統(tǒng)作用與三七根皂苷相似。但兩者價格可能達(dá)到近10倍的差異。部分生產(chǎn)企業(yè)受利益驅(qū)使，又對自身產(chǎn)品質(zhì)量的重視程度不夠，基于成本，采用質(zhì)量較差的原料，甚至有目的地故意減少三七或人參投藥量，使成分含有量剛好達(dá)到法定標(biāo)準(zhǔn)的限度要求，或添加不同藥用部位、同科植物以降低生產(chǎn)成本，以次充好。這種現(xiàn)象時有發(fā)生。

圖1 參照物和樣品的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chrom atogram s of reference substances and sam p les

對復(fù)方丹參片中檢出三七莖葉的樣品，按補(bǔ)充檢驗(yàn)方法［3］檢驗(yàn)，結(jié)果與液相方法一致，見圖2。本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC快速鑒別非法添加三七/人參莖葉的中成藥，較原補(bǔ)充檢驗(yàn)中TLC法，準(zhǔn)確度高，不存在假陽性的干擾，建議將此通用型檢測方法納入補(bǔ)充檢驗(yàn)方法。

筆者僅對3個中成藥品種進(jìn)行檢測，從檢測結(jié)果可看出，復(fù)方丹參片存在以三七/人參莖葉非法投料的現(xiàn)象，而在三七片/膠囊、參苓白術(shù)散兩個品種尚未發(fā)現(xiàn)，其他三七、人參投料的中成藥品種是否存在此問題，值得繼續(xù)關(guān)注。

在分離人參皂苷時，參考文獻(xiàn)［9-14］考察乙腈-水、甲醇-水多種比例梯度洗脫，最終選擇 “2.1”項(xiàng)的比例，能使人參皂苷Rg1、Re和Rb3達(dá)到理想的分離效果。

圖2 三七莖葉皂苷TLC圖Fig.2 TLC for notoginseng leaf triterpenes

參考文獻(xiàn)：

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Rapid screening of stem s and leaves in the place of roots and rhizom es of Panax ginseng and Panax notoginseng by HPLC

FEIYi-qin， YANG Ping， XIAO Ling， HOU Jun-jie， NIE Jing
（Hubei Institute for Food and Drug Control，Wuhan 430064，China）

AIMTo estab1ish an HPLC method to rapid1y identify the stems and 1eaves in the p1ace of root and rhizome of Panax ginseng and Panax notoginseng，which shou1d not be added in Chinese patentmedicines.METHODSHPLCwas used to ana1yze ginsenoside Rb3，Rg1and Re in Compound Danshen Tab1ets，Sanqi Tab-1ets/Capsu1es and Shen1in Baizhu Powder.The co1umn was Agi1ent Ec1ipse P1us C18（5μm，4.6 mm×250 mm）with acetonitri1e-water as themobi1e phase in a gradientmanner.The detection wave1ength was set at203 nm with 1.0 mL/min of f1ow rate.RESULTSIf ginsenoside Rb3 was checked out it showed that stems and 1eaves of P. notoginseng was added in.If the specific va1ue of ginsenoside Rg1and Re was 1ess than five it showed that stems and 1eaves of Panax ginseng was added in.This examination revea1ed that there existed adu1teration in Compound Danshen Tab1ets.CONCLUSIONThe method ismore accurate than TLC in supp1ementa1 testing method，and exc1udes the possibi1ity of the fa1se positive.

Panax notoginseng；Panax ginseng；stems and 1eaves；roots and rhizomes；HPLC；rapid screening；Chinese patentmedicine

R927.2

A

1001-1528（2015）08-1730-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.021

2014-08-22

費(fèi)毅琴，女，主管中藥師，從事中藥檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Te1：（027）87272513，E-mai1：pryci11a@163.com