油茶無(wú)性系組織培養(yǎng)繁育實(shí)驗(yàn)

廖健芬

摘 要 組織培養(yǎng)作為無(wú)性系培育繁殖的重要方式，具有縮短育種時(shí)間，節(jié)省母本資源、子體抗性強(qiáng)等明顯優(yōu)勢(shì)，因此對(duì)油茶進(jìn)行無(wú)性系組培對(duì)于提高油茶育種質(zhì)量以及種質(zhì)資源的普及發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用?；诖耍瑥挠筒柩亢陀鷤M織誘導(dǎo)試驗(yàn)的角度探討了油茶無(wú)性系組織培養(yǎng)的相關(guān)問題，為保存油茶種質(zhì)資源的優(yōu)良性狀并實(shí)現(xiàn)大范圍的推廣提供技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞 油茶；組織培養(yǎng)；繁育

中圖分類號(hào)：S794.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2014）11-0-2

油茶是我國(guó)的南方分布較為廣泛的木本油料樹種，我國(guó)擁有得天獨(dú)厚的油茶種質(zhì)基礎(chǔ)以及珍稀的育種資源，由于其豐富的食用價(jià)值和實(shí)用價(jià)值，在我國(guó)長(zhǎng)江以南的地區(qū)栽種的范圍極為廣泛。我國(guó)幅員遼闊，人口數(shù)量基數(shù)比較大，每年會(huì)消耗掉大量的食用油，而由于作物栽種面積的局限性不能實(shí)現(xiàn)草本油料作物的大量生產(chǎn)，而油茶作為我國(guó)特有的油料樹種則是對(duì)油料資源的有力補(bǔ)充。茶油是最為天然的優(yōu)質(zhì)食用油之一，并且含有豐富的對(duì)人體健康有益的不飽和脂肪酸，能夠有效的降低血壓和血脂。油茶的其他部位在工業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域也得以廣泛的應(yīng)用[1]。

1 油茶組培的重要意義

在油茶種質(zhì)資源培育的實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，用傳統(tǒng)的靠種子栽植的方法所繁育的后代受到外部環(huán)境因素影響的比較大，個(gè)體生長(zhǎng)情況差異化明顯，然而如果通過無(wú)性系組織培養(yǎng)方法進(jìn)行種質(zhì)資源的培育，能夠最大可能的保留住母本的優(yōu)良形狀，還能避免培育子代個(gè)體差異化的問題，保證品種質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)油茶的產(chǎn)量的高質(zhì)高效。

研究油茶的無(wú)性系組織培育技術(shù)，并形成系統(tǒng)化的組織、細(xì)胞培養(yǎng)流程，有利于對(duì)油茶下一步的細(xì)胞培育以及形態(tài)構(gòu)成等理論研究提供基礎(chǔ)理論支持，也有利于推廣利用先進(jìn)科學(xué)手段提高優(yōu)質(zhì)種苗的快繁技術(shù)，提高育種的效率和質(zhì)量。但在油茶無(wú)性系組培過程中，由于培育的持續(xù)時(shí)間比較長(zhǎng)，成活率變動(dòng)的程度比較大，加上在生長(zhǎng)過程中極易受到病害蟲害的侵害而長(zhǎng)勢(shì)不良，這都阻礙了無(wú)性系組培技術(shù)的應(yīng)用推廣[2]。因此，要加快對(duì)油茶無(wú)性系組培技術(shù)的深入研究，建立成體系化的培育模式，實(shí)現(xiàn)高質(zhì)高量的無(wú)性系油茶苗木培育。

2 油茶無(wú)性系組培實(shí)驗(yàn)—不同品種油茶外植體對(duì)比實(shí)驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)材料的來源

試驗(yàn)所選取的材料分別選擇了來自廣西林業(yè)科學(xué)研究院油桐山油茶優(yōu)良無(wú)性系示范園的3年生優(yōu)良無(wú)性系品種“岑軟2號(hào)”“岑軟3號(hào)”“桂軟11號(hào)”，選擇其中新長(zhǎng)出的枝條以及發(fā)育的種子，以及1年生來自廣西林業(yè)科學(xué)研究院林機(jī)苗圃的品種‘岑軟3號(hào)扦插新抽嫩芽。

2.2 對(duì)比實(shí)驗(yàn)過程

2.2.1 不同品種愈傷組織生長(zhǎng)情況對(duì)比試驗(yàn)

油茶的各個(gè)品種之間或者同一品種的不同屬之間在生理特性方面都有著明顯的區(qū)別，這就導(dǎo)致了它們?cè)跓o(wú)性系組培上的方法及實(shí)驗(yàn)難度方面都存在較大的不同。首先將選取的三個(gè)不同油茶品種截取相同的部位作為外植體材料放入相同的培養(yǎng)基MS +6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg中，并放置到相同的培育環(huán)境，保證光照和溫度的統(tǒng)一性，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行連續(xù)試驗(yàn)，根據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)觀測(cè)這三個(gè)品種在成芽及愈傷組織的形成情況[3]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三個(gè)不同品種“岑軟2號(hào)”“岑軟3號(hào)”“桂軟11號(hào)”在經(jīng)過連續(xù)性的繼代培養(yǎng)后，選取誘導(dǎo)系數(shù)最高值作為比較值，發(fā)現(xiàn)前兩者芽率分化速度較快，并且新發(fā)出的芽粗壯結(jié)實(shí)，早期并能觀察到愈傷組織形成，色澤均勻呈鮮綠色，沒有被感染的異樣情況。而“桂軟11號(hào)”的芽卻則相對(duì)凌弱，愈傷組織出現(xiàn)較晚且質(zhì)地不夠緊實(shí)。因此可知，來自不同品種的外植體材料在芽的誘導(dǎo)率及愈傷組織形成方面都有所不同。

2.2.2 同一品種同一生長(zhǎng)時(shí)期不同部位對(duì)比試驗(yàn)

選擇同一品種的外植體材料，分別截取其不同部位進(jìn)行組織培養(yǎng)也會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果。在此次研究中選取“岑軟3號(hào)”為外植體材料，分別采集它的3年生未木質(zhì)化的嫩芽和1年生嫁接新生嫩芽的側(cè)芽（帶莖段）和頂芽作為對(duì)比性的實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)于相同品種的不同生長(zhǎng)時(shí)期帶莖段的芽作為外植體的組織培養(yǎng)的培育效果，無(wú)論在誘導(dǎo)率還是在愈傷組織形成方面都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于頂芽，這將會(huì)對(duì)下個(gè)階段的分化和增殖培育起到積極的作用。并且頂芽的組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)褐化和污染的比例偏高，很多頂芽外植體沒有進(jìn)行任何的生長(zhǎng)，基本是作廢處理[4]。

2.2.3 同一油茶品種不同生長(zhǎng)時(shí)期的外植體材料組織培養(yǎng)對(duì)比試驗(yàn)

選取“岑軟3號(hào)”相同部位不同生長(zhǎng)時(shí)期的外植體進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，分別選擇了3年生和1年生的未木質(zhì)化新生嫩芽及半木質(zhì)化嫩芽各一組進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

根據(jù)表1數(shù)據(jù)顯示，1年生嫁接苗未木質(zhì)化嫩芽的誘導(dǎo)成功率高達(dá)72%，并且它的污染率和褐化率卻是最低的，分別為13%和15%，表現(xiàn)在芽分化的速度快并且數(shù)量多，愈傷組織質(zhì)地比較好并且均勻成嫩綠色，這都證明了培育是比較成功的。而3年生未木質(zhì)化的新生嫩芽的誘導(dǎo)存活率為66%，居第二位，整體質(zhì)量也比較好，相比第一的1年生嫁接苗未木質(zhì)化嫩芽成活率下降了6%，并且污染率要相對(duì)較高，到達(dá)了22%。然而3年生半木質(zhì)化新生嫩芽和1年生嫁接苗半木質(zhì)化嫩芽作為外植體培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)率和形成愈傷組織的質(zhì)地都欠佳，存活率的概率有明顯的下降，分別只有44%和45%，并且相對(duì)的污染率和褐化率也大幅提升，此時(shí)，芽分化的速度較慢，且纖細(xì)柔弱，愈傷組織出現(xiàn)晚且質(zhì)地疏松，顏色呈黃綠色。由此可知，在外植體選擇的時(shí)期來說，選擇尚未木質(zhì)化的芽的實(shí)驗(yàn)效果是最好的。在實(shí)際對(duì)油茶新生嫩芽采摘過程中，由于多年生的新生嫩芽更容易獲取，可以保證提供足夠的材料，是外植體材料的最佳選擇對(duì)象。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

對(duì)油茶進(jìn)行無(wú)性系組織培養(yǎng)過程中要考慮到多種因素和制約調(diào)節(jié)，要根據(jù)不同的外植體情況加以分析，包括對(duì)不同品種間、相同品種不同部位間、相同部位不同時(shí)期間的組織培養(yǎng)結(jié)果都會(huì)有所不同，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，要盡量選擇帶莖的芽作為外植體能夠更好的形成芽和愈傷組織；木質(zhì)化程度不同的外植體材料要盡量選擇未發(fā)生木質(zhì)化的新生嫩芽，在芽的誘導(dǎo)率和愈傷組織的形成方面都有著明顯的優(yōu)勢(shì)，并且受到褐化及污染的幾率也比較小。

由于還沒有形成完善的油茶無(wú)性系組織培養(yǎng)體系，對(duì)影響芽及愈傷組織形成的因素還沒有得出全面的結(jié)論，但是可以明確的是需要利用更加多樣化的和多種時(shí)期的外植體材料進(jìn)行一一的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，找到最為有效的促進(jìn)芽分化和愈傷組織形成的組織培養(yǎng)方案。

參考文獻(xiàn)

[1]李建安，張日清，石明旺，等.油茶兩物種花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)[J].經(jīng)濟(jì)林研究，2003，21（3）：36一38

[2]陳清風(fēng)，張應(yīng)中，丁曉綱，等.油茶無(wú)性繁殖技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣東林業(yè)科技，2011，27（6）：74-78

[3]彭立群，田子珩，張俊琦.植物組培中污染發(fā)生原因及防治技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣東林業(yè)科技，2012，28（2）：82-86

[4]徐德兵，郎南軍，李甜江.云南高原山地油茶篩選優(yōu)株表型研究[J].貴州林業(yè)科技，2013（1）.

（責(zé)任編輯：趙中正）

摘 要 組織培養(yǎng)作為無(wú)性系培育繁殖的重要方式，具有縮短育種時(shí)間，節(jié)省母本資源、子體抗性強(qiáng)等明顯優(yōu)勢(shì)，因此對(duì)油茶進(jìn)行無(wú)性系組培對(duì)于提高油茶育種質(zhì)量以及種質(zhì)資源的普及發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用?；诖?，從油茶芽和愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)的角度探討了油茶無(wú)性系組織培養(yǎng)的相關(guān)問題，為保存油茶種質(zhì)資源的優(yōu)良性狀并實(shí)現(xiàn)大范圍的推廣提供技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞 油茶；組織培養(yǎng)；繁育

中圖分類號(hào)：S794.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2014）11-0-2

油茶是我國(guó)的南方分布較為廣泛的木本油料樹種，我國(guó)擁有得天獨(dú)厚的油茶種質(zhì)基礎(chǔ)以及珍稀的育種資源，由于其豐富的食用價(jià)值和實(shí)用價(jià)值，在我國(guó)長(zhǎng)江以南的地區(qū)栽種的范圍極為廣泛。我國(guó)幅員遼闊，人口數(shù)量基數(shù)比較大，每年會(huì)消耗掉大量的食用油，而由于作物栽種面積的局限性不能實(shí)現(xiàn)草本油料作物的大量生產(chǎn)，而油茶作為我國(guó)特有的油料樹種則是對(duì)油料資源的有力補(bǔ)充。茶油是最為天然的優(yōu)質(zhì)食用油之一，并且含有豐富的對(duì)人體健康有益的不飽和脂肪酸，能夠有效的降低血壓和血脂。油茶的其他部位在工業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域也得以廣泛的應(yīng)用[1]。

1 油茶組培的重要意義

在油茶種質(zhì)資源培育的實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，用傳統(tǒng)的靠種子栽植的方法所繁育的后代受到外部環(huán)境因素影響的比較大，個(gè)體生長(zhǎng)情況差異化明顯，然而如果通過無(wú)性系組織培養(yǎng)方法進(jìn)行種質(zhì)資源的培育，能夠最大可能的保留住母本的優(yōu)良形狀，還能避免培育子代個(gè)體差異化的問題，保證品種質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)油茶的產(chǎn)量的高質(zhì)高效。

研究油茶的無(wú)性系組織培育技術(shù)，并形成系統(tǒng)化的組織、細(xì)胞培養(yǎng)流程，有利于對(duì)油茶下一步的細(xì)胞培育以及形態(tài)構(gòu)成等理論研究提供基礎(chǔ)理論支持，也有利于推廣利用先進(jìn)科學(xué)手段提高優(yōu)質(zhì)種苗的快繁技術(shù)，提高育種的效率和質(zhì)量。但在油茶無(wú)性系組培過程中，由于培育的持續(xù)時(shí)間比較長(zhǎng)，成活率變動(dòng)的程度比較大，加上在生長(zhǎng)過程中極易受到病害蟲害的侵害而長(zhǎng)勢(shì)不良，這都阻礙了無(wú)性系組培技術(shù)的應(yīng)用推廣[2]。因此，要加快對(duì)油茶無(wú)性系組培技術(shù)的深入研究，建立成體系化的培育模式，實(shí)現(xiàn)高質(zhì)高量的無(wú)性系油茶苗木培育。

2 油茶無(wú)性系組培實(shí)驗(yàn)—不同品種油茶外植體對(duì)比實(shí)驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)材料的來源

試驗(yàn)所選取的材料分別選擇了來自廣西林業(yè)科學(xué)研究院油桐山油茶優(yōu)良無(wú)性系示范園的3年生優(yōu)良無(wú)性系品種“岑軟2號(hào)”“岑軟3號(hào)”“桂軟11號(hào)”，選擇其中新長(zhǎng)出的枝條以及發(fā)育的種子，以及1年生來自廣西林業(yè)科學(xué)研究院林機(jī)苗圃的品種‘岑軟3號(hào)扦插新抽嫩芽。

2.2 對(duì)比實(shí)驗(yàn)過程

2.2.1 不同品種愈傷組織生長(zhǎng)情況對(duì)比試驗(yàn)

油茶的各個(gè)品種之間或者同一品種的不同屬之間在生理特性方面都有著明顯的區(qū)別，這就導(dǎo)致了它們?cè)跓o(wú)性系組培上的方法及實(shí)驗(yàn)難度方面都存在較大的不同。首先將選取的三個(gè)不同油茶品種截取相同的部位作為外植體材料放入相同的培養(yǎng)基MS +6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg中，并放置到相同的培育環(huán)境，保證光照和溫度的統(tǒng)一性，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行連續(xù)試驗(yàn)，根據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)觀測(cè)這三個(gè)品種在成芽及愈傷組織的形成情況[3]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三個(gè)不同品種“岑軟2號(hào)”“岑軟3號(hào)”“桂軟11號(hào)”在經(jīng)過連續(xù)性的繼代培養(yǎng)后，選取誘導(dǎo)系數(shù)最高值作為比較值，發(fā)現(xiàn)前兩者芽率分化速度較快，并且新發(fā)出的芽粗壯結(jié)實(shí)，早期并能觀察到愈傷組織形成，色澤均勻呈鮮綠色，沒有被感染的異樣情況。而“桂軟11號(hào)”的芽卻則相對(duì)凌弱，愈傷組織出現(xiàn)較晚且質(zhì)地不夠緊實(shí)。因此可知，來自不同品種的外植體材料在芽的誘導(dǎo)率及愈傷組織形成方面都有所不同。

2.2.2 同一品種同一生長(zhǎng)時(shí)期不同部位對(duì)比試驗(yàn)

選擇同一品種的外植體材料，分別截取其不同部位進(jìn)行組織培養(yǎng)也會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果。在此次研究中選取“岑軟3號(hào)”為外植體材料，分別采集它的3年生未木質(zhì)化的嫩芽和1年生嫁接新生嫩芽的側(cè)芽（帶莖段）和頂芽作為對(duì)比性的實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)于相同品種的不同生長(zhǎng)時(shí)期帶莖段的芽作為外植體的組織培養(yǎng)的培育效果，無(wú)論在誘導(dǎo)率還是在愈傷組織形成方面都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于頂芽，這將會(huì)對(duì)下個(gè)階段的分化和增殖培育起到積極的作用。并且頂芽的組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)褐化和污染的比例偏高，很多頂芽外植體沒有進(jìn)行任何的生長(zhǎng)，基本是作廢處理[4]。

2.2.3 同一油茶品種不同生長(zhǎng)時(shí)期的外植體材料組織培養(yǎng)對(duì)比試驗(yàn)

選取“岑軟3號(hào)”相同部位不同生長(zhǎng)時(shí)期的外植體進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，分別選擇了3年生和1年生的未木質(zhì)化新生嫩芽及半木質(zhì)化嫩芽各一組進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

根據(jù)表1數(shù)據(jù)顯示，1年生嫁接苗未木質(zhì)化嫩芽的誘導(dǎo)成功率高達(dá)72%，并且它的污染率和褐化率卻是最低的，分別為13%和15%，表現(xiàn)在芽分化的速度快并且數(shù)量多，愈傷組織質(zhì)地比較好并且均勻成嫩綠色，這都證明了培育是比較成功的。而3年生未木質(zhì)化的新生嫩芽的誘導(dǎo)存活率為66%，居第二位，整體質(zhì)量也比較好，相比第一的1年生嫁接苗未木質(zhì)化嫩芽成活率下降了6%，并且污染率要相對(duì)較高，到達(dá)了22%。然而3年生半木質(zhì)化新生嫩芽和1年生嫁接苗半木質(zhì)化嫩芽作為外植體培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)率和形成愈傷組織的質(zhì)地都欠佳，存活率的概率有明顯的下降，分別只有44%和45%，并且相對(duì)的污染率和褐化率也大幅提升，此時(shí)，芽分化的速度較慢，且纖細(xì)柔弱，愈傷組織出現(xiàn)晚且質(zhì)地疏松，顏色呈黃綠色。由此可知，在外植體選擇的時(shí)期來說，選擇尚未木質(zhì)化的芽的實(shí)驗(yàn)效果是最好的。在實(shí)際對(duì)油茶新生嫩芽采摘過程中，由于多年生的新生嫩芽更容易獲取，可以保證提供足夠的材料，是外植體材料的最佳選擇對(duì)象。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

對(duì)油茶進(jìn)行無(wú)性系組織培養(yǎng)過程中要考慮到多種因素和制約調(diào)節(jié)，要根據(jù)不同的外植體情況加以分析，包括對(duì)不同品種間、相同品種不同部位間、相同部位不同時(shí)期間的組織培養(yǎng)結(jié)果都會(huì)有所不同，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，要盡量選擇帶莖的芽作為外植體能夠更好的形成芽和愈傷組織；木質(zhì)化程度不同的外植體材料要盡量選擇未發(fā)生木質(zhì)化的新生嫩芽，在芽的誘導(dǎo)率和愈傷組織的形成方面都有著明顯的優(yōu)勢(shì)，并且受到褐化及污染的幾率也比較小。

由于還沒有形成完善的油茶無(wú)性系組織培養(yǎng)體系，對(duì)影響芽及愈傷組織形成的因素還沒有得出全面的結(jié)論，但是可以明確的是需要利用更加多樣化的和多種時(shí)期的外植體材料進(jìn)行一一的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，找到最為有效的促進(jìn)芽分化和愈傷組織形成的組織培養(yǎng)方案。

參考文獻(xiàn)

[1]李建安，張日清，石明旺，等.油茶兩物種花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)[J].經(jīng)濟(jì)林研究，2003，21（3）：36一38

[2]陳清風(fēng)，張應(yīng)中，丁曉綱，等.油茶無(wú)性繁殖技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣東林業(yè)科技，2011，27（6）：74-78

[3]彭立群，田子珩，張俊琦.植物組培中污染發(fā)生原因及防治技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣東林業(yè)科技，2012，28（2）：82-86

[4]徐德兵，郎南軍，李甜江.云南高原山地油茶篩選優(yōu)株表型研究[J].貴州林業(yè)科技，2013（1）.

（責(zé)任編輯：趙中正）

摘 要 組織培養(yǎng)作為無(wú)性系培育繁殖的重要方式，具有縮短育種時(shí)間，節(jié)省母本資源、子體抗性強(qiáng)等明顯優(yōu)勢(shì)，因此對(duì)油茶進(jìn)行無(wú)性系組培對(duì)于提高油茶育種質(zhì)量以及種質(zhì)資源的普及發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。基于此，從油茶芽和愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)的角度探討了油茶無(wú)性系組織培養(yǎng)的相關(guān)問題，為保存油茶種質(zhì)資源的優(yōu)良性狀并實(shí)現(xiàn)大范圍的推廣提供技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞 油茶；組織培養(yǎng)；繁育

中圖分類號(hào)：S794.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2014）11-0-2

油茶是我國(guó)的南方分布較為廣泛的木本油料樹種，我國(guó)擁有得天獨(dú)厚的油茶種質(zhì)基礎(chǔ)以及珍稀的育種資源，由于其豐富的食用價(jià)值和實(shí)用價(jià)值，在我國(guó)長(zhǎng)江以南的地區(qū)栽種的范圍極為廣泛。我國(guó)幅員遼闊，人口數(shù)量基數(shù)比較大，每年會(huì)消耗掉大量的食用油，而由于作物栽種面積的局限性不能實(shí)現(xiàn)草本油料作物的大量生產(chǎn)，而油茶作為我國(guó)特有的油料樹種則是對(duì)油料資源的有力補(bǔ)充。茶油是最為天然的優(yōu)質(zhì)食用油之一，并且含有豐富的對(duì)人體健康有益的不飽和脂肪酸，能夠有效的降低血壓和血脂。油茶的其他部位在工業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域也得以廣泛的應(yīng)用[1]。

1 油茶組培的重要意義

在油茶種質(zhì)資源培育的實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，用傳統(tǒng)的靠種子栽植的方法所繁育的后代受到外部環(huán)境因素影響的比較大，個(gè)體生長(zhǎng)情況差異化明顯，然而如果通過無(wú)性系組織培養(yǎng)方法進(jìn)行種質(zhì)資源的培育，能夠最大可能的保留住母本的優(yōu)良形狀，還能避免培育子代個(gè)體差異化的問題，保證品種質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)油茶的產(chǎn)量的高質(zhì)高效。

研究油茶的無(wú)性系組織培育技術(shù)，并形成系統(tǒng)化的組織、細(xì)胞培養(yǎng)流程，有利于對(duì)油茶下一步的細(xì)胞培育以及形態(tài)構(gòu)成等理論研究提供基礎(chǔ)理論支持，也有利于推廣利用先進(jìn)科學(xué)手段提高優(yōu)質(zhì)種苗的快繁技術(shù)，提高育種的效率和質(zhì)量。但在油茶無(wú)性系組培過程中，由于培育的持續(xù)時(shí)間比較長(zhǎng)，成活率變動(dòng)的程度比較大，加上在生長(zhǎng)過程中極易受到病害蟲害的侵害而長(zhǎng)勢(shì)不良，這都阻礙了無(wú)性系組培技術(shù)的應(yīng)用推廣[2]。因此，要加快對(duì)油茶無(wú)性系組培技術(shù)的深入研究，建立成體系化的培育模式，實(shí)現(xiàn)高質(zhì)高量的無(wú)性系油茶苗木培育。

2 油茶無(wú)性系組培實(shí)驗(yàn)—不同品種油茶外植體對(duì)比實(shí)驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)材料的來源

試驗(yàn)所選取的材料分別選擇了來自廣西林業(yè)科學(xué)研究院油桐山油茶優(yōu)良無(wú)性系示范園的3年生優(yōu)良無(wú)性系品種“岑軟2號(hào)”“岑軟3號(hào)”“桂軟11號(hào)”，選擇其中新長(zhǎng)出的枝條以及發(fā)育的種子，以及1年生來自廣西林業(yè)科學(xué)研究院林機(jī)苗圃的品種‘岑軟3號(hào)扦插新抽嫩芽。

2.2 對(duì)比實(shí)驗(yàn)過程

2.2.1 不同品種愈傷組織生長(zhǎng)情況對(duì)比試驗(yàn)

油茶的各個(gè)品種之間或者同一品種的不同屬之間在生理特性方面都有著明顯的區(qū)別，這就導(dǎo)致了它們?cè)跓o(wú)性系組培上的方法及實(shí)驗(yàn)難度方面都存在較大的不同。首先將選取的三個(gè)不同油茶品種截取相同的部位作為外植體材料放入相同的培養(yǎng)基MS +6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg中，并放置到相同的培育環(huán)境，保證光照和溫度的統(tǒng)一性，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行連續(xù)試驗(yàn)，根據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)觀測(cè)這三個(gè)品種在成芽及愈傷組織的形成情況[3]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三個(gè)不同品種“岑軟2號(hào)”“岑軟3號(hào)”“桂軟11號(hào)”在經(jīng)過連續(xù)性的繼代培養(yǎng)后，選取誘導(dǎo)系數(shù)最高值作為比較值，發(fā)現(xiàn)前兩者芽率分化速度較快，并且新發(fā)出的芽粗壯結(jié)實(shí)，早期并能觀察到愈傷組織形成，色澤均勻呈鮮綠色，沒有被感染的異樣情況。而“桂軟11號(hào)”的芽卻則相對(duì)凌弱，愈傷組織出現(xiàn)較晚且質(zhì)地不夠緊實(shí)。因此可知，來自不同品種的外植體材料在芽的誘導(dǎo)率及愈傷組織形成方面都有所不同。

2.2.2 同一品種同一生長(zhǎng)時(shí)期不同部位對(duì)比試驗(yàn)

選擇同一品種的外植體材料，分別截取其不同部位進(jìn)行組織培養(yǎng)也會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果。在此次研究中選取“岑軟3號(hào)”為外植體材料，分別采集它的3年生未木質(zhì)化的嫩芽和1年生嫁接新生嫩芽的側(cè)芽（帶莖段）和頂芽作為對(duì)比性的實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)于相同品種的不同生長(zhǎng)時(shí)期帶莖段的芽作為外植體的組織培養(yǎng)的培育效果，無(wú)論在誘導(dǎo)率還是在愈傷組織形成方面都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于頂芽，這將會(huì)對(duì)下個(gè)階段的分化和增殖培育起到積極的作用。并且頂芽的組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)褐化和污染的比例偏高，很多頂芽外植體沒有進(jìn)行任何的生長(zhǎng)，基本是作廢處理[4]。

2.2.3 同一油茶品種不同生長(zhǎng)時(shí)期的外植體材料組織培養(yǎng)對(duì)比試驗(yàn)

選取“岑軟3號(hào)”相同部位不同生長(zhǎng)時(shí)期的外植體進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，分別選擇了3年生和1年生的未木質(zhì)化新生嫩芽及半木質(zhì)化嫩芽各一組進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

根據(jù)表1數(shù)據(jù)顯示，1年生嫁接苗未木質(zhì)化嫩芽的誘導(dǎo)成功率高達(dá)72%，并且它的污染率和褐化率卻是最低的，分別為13%和15%，表現(xiàn)在芽分化的速度快并且數(shù)量多，愈傷組織質(zhì)地比較好并且均勻成嫩綠色，這都證明了培育是比較成功的。而3年生未木質(zhì)化的新生嫩芽的誘導(dǎo)存活率為66%，居第二位，整體質(zhì)量也比較好，相比第一的1年生嫁接苗未木質(zhì)化嫩芽成活率下降了6%，并且污染率要相對(duì)較高，到達(dá)了22%。然而3年生半木質(zhì)化新生嫩芽和1年生嫁接苗半木質(zhì)化嫩芽作為外植體培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)率和形成愈傷組織的質(zhì)地都欠佳，存活率的概率有明顯的下降，分別只有44%和45%，并且相對(duì)的污染率和褐化率也大幅提升，此時(shí)，芽分化的速度較慢，且纖細(xì)柔弱，愈傷組織出現(xiàn)晚且質(zhì)地疏松，顏色呈黃綠色。由此可知，在外植體選擇的時(shí)期來說，選擇尚未木質(zhì)化的芽的實(shí)驗(yàn)效果是最好的。在實(shí)際對(duì)油茶新生嫩芽采摘過程中，由于多年生的新生嫩芽更容易獲取，可以保證提供足夠的材料，是外植體材料的最佳選擇對(duì)象。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

對(duì)油茶進(jìn)行無(wú)性系組織培養(yǎng)過程中要考慮到多種因素和制約調(diào)節(jié)，要根據(jù)不同的外植體情況加以分析，包括對(duì)不同品種間、相同品種不同部位間、相同部位不同時(shí)期間的組織培養(yǎng)結(jié)果都會(huì)有所不同，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，要盡量選擇帶莖的芽作為外植體能夠更好的形成芽和愈傷組織；木質(zhì)化程度不同的外植體材料要盡量選擇未發(fā)生木質(zhì)化的新生嫩芽，在芽的誘導(dǎo)率和愈傷組織的形成方面都有著明顯的優(yōu)勢(shì)，并且受到褐化及污染的幾率也比較小。

由于還沒有形成完善的油茶無(wú)性系組織培養(yǎng)體系，對(duì)影響芽及愈傷組織形成的因素還沒有得出全面的結(jié)論，但是可以明確的是需要利用更加多樣化的和多種時(shí)期的外植體材料進(jìn)行一一的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，找到最為有效的促進(jìn)芽分化和愈傷組織形成的組織培養(yǎng)方案。

參考文獻(xiàn)

[1]李建安，張日清，石明旺，等.油茶兩物種花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)[J].經(jīng)濟(jì)林研究，2003，21（3）：36一38

[2]陳清風(fēng)，張應(yīng)中，丁曉綱，等.油茶無(wú)性繁殖技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣東林業(yè)科技，2011，27（6）：74-78

[3]彭立群，田子珩，張俊琦.植物組培中污染發(fā)生原因及防治技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣東林業(yè)科技，2012，28（2）：82-86

[4]徐德兵，郎南軍，李甜江.云南高原山地油茶篩選優(yōu)株表型研究[J].貴州林業(yè)科技，2013（1）.

（責(zé)任編輯：趙中正）