血清e(cuò)ndocan水平與冠脈慢血流的相關(guān)性

韓 偉，任引剛，張利華(第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院心內(nèi)科，西安 70038;第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院老年病科;通訊作者，E-mail:profzhanglh@6．com)

冠狀動(dòng)脈慢血流(coronary slow flow，CSF)現(xiàn)象是指在在冠狀動(dòng)脈造影過程中沒有發(fā)現(xiàn)冠狀動(dòng)脈存在顯著狹窄(狹窄程度＜40%)，卻發(fā)生遠(yuǎn)端冠脈血管血流灌注延遲的現(xiàn)象［1，2］。CSF 由 Tambe 等［1］在1972年首次提出，近年來，隨著冠脈介入技術(shù)的普及，CSF越來越受到臨床的重視。研究表明，CSF常伴隨心絞痛、心肌梗死、惡性心律失常甚至心源性猝死等不良心血管事件，從而導(dǎo)致患者預(yù)后較差［3，4］。

盡管CSF的具體機(jī)制仍然未能完全明確，但諸多的研究已經(jīng)證明，血管內(nèi)皮功能不全在CSF的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，被認(rèn)為是CSF最重要的發(fā)病機(jī)制之一［5，6］。Endocan是從人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中分離出的一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子，最初被命名為內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1(endothelial cell-specific molecule 1，ESM-1)［7］。近年來的研究表明，endocan 的激活可以觸發(fā)下游一系列的病理生理過程，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能不全的發(fā)生［8］?；诖?，我們設(shè)想，endocan的激活可能也與CSF的發(fā)生發(fā)展存在一定關(guān)聯(lián)。因此，本研究旨在探討血清e(cuò)ndocan水平與CSF的相關(guān)性。

1 材料與方法

1．1 研究對象

本研究為前瞻性橫斷面研究，研究對象為2013-05～2015-05在我院住院行冠脈造影的患者，共納入冠脈造影示冠脈血管正?；蚪咏?狹窄程度＜40%)且伴有CSF的患者82例(慢血流組，n=82)，同時(shí)按照年齡匹配的原則納入與CSF冠脈血管正常或接近正常且冠脈血流速度正常的患者184例做為對照人群(對照組，n=184)。CSP定義為任一冠脈主支血管參照心肌梗死溶治療后(thrombolysis in myocardial infarction，TIMI)血流幀數(shù)(TIMI frame count，TFC)＞27。主要排除標(biāo)準(zhǔn):①急性冠脈綜合征;②心臟節(jié)律異常如心房顫動(dòng)及病態(tài)竇房結(jié)綜合征;③其他器質(zhì)性心臟病，如心肌病、嚴(yán)重的心瓣膜病、先天性心臟病或嚴(yán)重的心功能不全;④合并嚴(yán)重的肝腎功能障礙;⑤合并全身急慢性感染性疾病;⑥合并系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)性疾病;⑦合并已知惡性腫瘤疾病;⑧2型糖尿病。

1．2 研究方法

1．2．1 造影評價(jià) 按照常規(guī)方法行冠脈造影術(shù)，按照Gibson等［9］提供的方法計(jì)算主支冠脈血管的TIMI-TFC，將前降支血管的TFC除以1．7以校正其長度［9］，將前降支(校正后)、回旋支、右冠的 TFC 加起來除以3取均值，即得到平均TFC。

1．2．2 常規(guī)血生化檢測 所有研究對象均在行冠脈造影前采集清晨靜脈血10 ml，使用Hitachi 7600全自動(dòng)生化分析儀測定各組患者的空腹血糖(FBG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血糖等常規(guī)血生化指標(biāo)。使用Abbott ci8200全自動(dòng)分析儀測量超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)。

1．2．3 血清e(cuò)ndocan水平檢測 所有研究對象均在行冠脈造影前采集清晨靜脈血10 ml，置于普通離心管，以3 000 r/min離心10 min分離血清，以Eppendorf管分裝后置于-80℃冰箱凍存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測定患者的血清e(cuò)ndocan水平。人endocan ELISA試劑盒購自武漢Cusabio Bioscience公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1．3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2．1 基本臨床特征及冠脈造影結(jié)果

在基線臨床特征方面，慢血流組患者h(yuǎn)s-CRP水平較對照組顯著升高，其余各基線臨床特征在兩組間差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表1)。另外，在冠脈造影評價(jià)方面，慢血流組的TIMI-TFC均較對照組顯著升高(P ＜0．001，見表1)。

表1 兩組患者的基本臨床特征及冠脈造影結(jié)果Table 1 Baseline characteristics and angiographic findings in two groups

2．2 兩組患者血清e(cuò)ndocan水平比較

如圖1所示，慢血流組患者血清e(cuò)ndocan水平(ng/ml)較對照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1．05［0．60-1．38］vs 0．74［0．52-1．01］，P=0．001)。

圖1 兩組的血清e(cuò)ndocan水平Figure 1 Serum endocan levels in the two groups

2．3 各變量與合并慢血流的獨(dú)立相關(guān)性

多元Logistic逐步回歸分析顯示，在排除各潛在的混雜因素的干擾后，高血清e(cuò)ndocan水平是冠脈慢血流發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子(優(yōu)勢比2．312，95%CI 1．329-4．019;P=0．003，見表 2)。

2．4 血清e(cuò)ndocan水平與平均TFC的相關(guān)性

在慢血流人群中，我們進(jìn)一步評價(jià)了血清e(cuò)ndocan水平與平均TFC的關(guān)系，Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清e(cuò)ndocan水平與平均TFC的關(guān)系呈顯著正相關(guān)(r=0．311，P=0．004;見圖 2)。為了進(jìn)一步排除混雜因素的干擾，我們進(jìn)行了多元線性回歸分析，結(jié)果顯示，血清e(cuò)ndocan水平與平均TFC具有獨(dú)立相關(guān)性(t=2．872，P=0．005)。

3 討論

隨著對CSF重要性認(rèn)識的不斷深入，預(yù)測CSF的發(fā)生發(fā)展并盡早進(jìn)行干預(yù)已經(jīng)是一個(gè)重要的臨床課題。雖然冠脈造影是診斷CSF的金標(biāo)準(zhǔn)，但因冠脈造影花費(fèi)較高且具有有創(chuàng)性，故其在臨床大規(guī)模的普及應(yīng)用仍然受到一定程度的限制。血清生物學(xué)標(biāo)記物檢查因取材方便、無創(chuàng)、易于被患者接受及價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，在疾病的發(fā)病預(yù)測和風(fēng)險(xiǎn)評估中發(fā)揮著越來越重要的作用。

疾病生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)建立在對疾病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識之上，雖然CSF被認(rèn)為與男性、吸煙及肥胖等因素密切相關(guān)［10］，但本研究結(jié)果顯示，CSF組與對照組人群在性別比例、吸煙比例及BMI等方面無顯著性差異，這與Canga等［11］的研究結(jié)果一致。雖然也有研究表明CSF可能與血管局部的炎癥反應(yīng)存在一定相關(guān)性［12］，在本研究中，反映炎癥反應(yīng)程度的hs-CRP在CSF組也較在對照組顯著升高，但多元Logistic回歸結(jié)果顯示hs-CRP水平與CSF并不具備獨(dú)立相關(guān)性。因此，除了CSF傳統(tǒng)的危險(xiǎn)因素外，我們還要積極尋找新的危險(xiǎn)因子。

表2 多元Logistic回歸分析Table 2 Multiple logistic regression analysis

圖2 血清e(cuò)ndocan水平與平均TFC的相關(guān)性Figure 2 Correlation between serum endocan level and mean TFC

Endocan是一種可溶性硫酸軟骨素糖蛋白，與大多數(shù)糖蛋白一樣，endocan可以通過其特有的結(jié)構(gòu)域特異性地結(jié)合下游的活性分子，廣泛參與細(xì)胞的增殖、分化、遷移、黏附等病理生理過程［8］。近年來的研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的endocan可以激活血管細(xì)胞黏附分子-1、細(xì)胞間黏附分子-1及E-選擇素等黏附分子，導(dǎo)致炎癥因子在內(nèi)皮細(xì)胞表面聚集，從而導(dǎo)致內(nèi)皮功能不全的發(fā)生［13］。而近年來的臨床研究也證明血清e(cuò)ndocan水平升高與多種血管內(nèi)皮功能不全相關(guān)性疾病如高血壓、冠心病及慢性腎功能不全等的發(fā)病存在相關(guān)性［14-16］。與上述研究一致，本研究發(fā)現(xiàn)，CSF患者血清e(cuò)ndocan水平較對照者明顯升高，而且在進(jìn)一步的多元Logistic回歸分析中我們發(fā)現(xiàn)，升高的血清e(cuò)ndocan水平是CSF發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，這表明endocan可以成為預(yù)測CSF發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)記物。

我們進(jìn)一步評價(jià)了血清e(cuò)ndocan水平與CSF患者平均TFC的相關(guān)性，研究結(jié)果顯示，血清e(cuò)ndocan水平與CSF患者的冠脈平均TFC呈正相關(guān)，在通過多元線性回歸分析排除了各種潛在混雜因素干擾后，這種正相關(guān)仍然具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因?yàn)槠骄鵗FC是評價(jià)CSF嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，因此，這一研究結(jié)果提示血清e(cuò)ndocan水平檢測同樣可能用來對CSF患者進(jìn)行危險(xiǎn)分層。

總之，血清e(cuò)ndocan水平是冠脈慢血流獨(dú)立預(yù)測危險(xiǎn)因子，與冠脈慢血流的嚴(yán)重程度存在正相關(guān)，這提示endocan可能成為預(yù)測冠脈慢血流發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)記物，血清e(cuò)ndocan水平檢測應(yīng)進(jìn)一步研究是否能用來對CSF患者進(jìn)行危險(xiǎn)分層。上述研究結(jié)論需要大樣本、前瞻性、隨機(jī)對照研究確定。

［1］Tambe AA，Demany MA，Zimmerman HA，et al．Angina pectoris and slow flow velocity of dye in coronary arteries—a new angiographic finding［J］．Am Heart J，1972，84(1):66-71．

［2］李軍，馬長生．冠脈慢血流現(xiàn)象的研究進(jìn)展［J］．心血管病學(xué)進(jìn)展，2010，31(3):356-358．

［3］Horjeti B，Goda A．Acute ischemia manifestation in a patient with coronary slow flow phenomenon［J］．J Electrocardiol，2012，45(3):277-279．

［4］Hawkins BM，Stavrakis S，Rousan TA，et al．Coronary slow flow—prevalence and clinical correlations［J］．Circ J，2012，76(4):936-942．

［5］Demir B，Caglar IM，Tureli HO，et al．Coronary slow flow phenomenon associated with high serum levels of soluble CD40 ligand and urotensin II:a multi-marker approach［J］．Clin Lab，2014，60(11):1909-1920．

［6］Beltrame JF，Cutri N，Kopetz V，et al．The role of nitric oxide in the coronary slow flow phenomenon［J］．Coron Artery Dis，2014，25(3):187-189．

［7］Lassalle P，Molet S，Janin A，et al．ESM-1 is a novel human endothelial cell-specific molecule expressed in lung and regulated by cytokines［J］．J Biol Chem，1996，271(34):20458-20464．

［8］Aparci M，Isilak Z，Uz O，et al．Endocan and endothelial dysfunction［J］．Angiology，2015，66(5):488-489．

［9］Gibson CM，Cannon CP，Daley W，et al．TIMI frame count:a quantitative method of assessing coronary artery flow［J］．Circulation，1996，93(5):879-888．

［10］Yilmaz H，Demir I，Uyar Z．Clinical and coronary angiographic characteristics of patients with coronary slow flow［J］．Acta Cardiol，2008，63(5):579-584．

［11］Canga A，Cetin M，Kocaman SA，et al．Increased serum resistin levels in patients with coronary slow-flow phenomenon［J］．Herz，2013，38(7):773-778．

［12］Xu Y，Meng HL，Su YM，et al．Serum YKL-40 is increased in patients with slow coronary flow［J］．Coron Artery Dis，2015，26(2):121-125．

［13］Lee W，Ku SK，Kim SW，et al．Endocan elicits severe vascular inflammatory responses in vitro and in vivo［J］．J Cell Physiol，2014，229(5):620-630．

［14］Balta S，Mikhailidis DP，Demirkol S，et al．Endocan—a novel inflammatory indicator in newly diagnosed patients with hypertension:a pilot study［J］．Angiology，2014，65(9):773-777．

［15］Wang XS，Yang W，Luo T，et al．Serum endocan levels are correlated with the presence and severity of coronary artery disease in patients with hypertension［J］．Genet Test Mol Biomarkers，2015，19(3):124-127．

［16］Lee HG，Choi HY，Bae JS．Endocan as a potential diagnostic or prognostic biomarker for chronic kidney disease［J］．Kidney Int，2014，86(6):1079-1081．