益母草注射液有效部位對(duì)大鼠離體子宮活動(dòng)的影響

謝曉芳， 熊 亮， 李 丹， 李 燕， 李夢(mèng)婷， 彭 成*

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川成都610075；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川成都610075）

益母草注射液有效部位對(duì)大鼠離體子宮活動(dòng)的影響

謝曉芳1，2， 熊 亮1，2， 李 丹1，2， 李 燕1，2， 李夢(mèng)婷1， 彭 成1，2*

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川成都610075；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川成都610075）

目的探討益母草注射液有效部位對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌活動(dòng)的影響。方法由益母草注射液浸膏 （LH）制備益母草注射液水溶性非生物堿部位 （LH-1-A）和水溶性總生物堿部位 （LH-1-B），分別配成43.0、7.8、9.3 mg/mL，分別給予低、中、高劑量的LH（0.081、0.162、0.324mg/mL）、LH-1-A（0.029、0.058、0.116mg/mL）和LH-1-B（0.035、0.070、0.140 mg/mL）作用于正常雌性大鼠非痙攣性離體子宮，對(duì)縮宮素所致痙攣?zhàn)訉m給予高劑量，采用BL-420E生物機(jī)能系統(tǒng)記錄子宮收縮的頻率、張力 （最大值、最小值和平均值）和活動(dòng)力，比較給藥前后的變化。結(jié)果LH和LH-1-B可使正常大鼠非痙攣性離體子宮收縮張力 （最小值、平均值）和活動(dòng)力明顯增強(qiáng)，LH-1-A使子宮收縮頻率、張力和活動(dòng)力均明顯下降，與給藥前比較均有顯著性差異 （P＜0.05或P＜0.01）；LH和LH-1-A對(duì)痙攣性離體子宮可明顯降低張力最大值、平均值和活動(dòng)力，LH-1-A還明顯減少收縮頻率，而LH-1-B則升高張力最小值和降低張力最大值、平均值，與造模后比較均有顯著性差異 （P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論益母草注射液在體外具有收縮子宮和緩解子宮痙攣?zhàn)饔?，其中水溶性生物堿部位是子宮收縮作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，水溶性非生物堿部位是緩解子宮痙攣的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。

益母草注射液；有效部位；離體子宮

益母草注射液是由中藥益母草制備而來(lái)的中成藥，屬子宮收縮藥，常用于產(chǎn)后子宮修復(fù)和產(chǎn)后止血，臨床效果顯著［1］。目前關(guān)于益母草注射液縮宮止血的臨床研究很多，顯示療效顯著、可靠，但其調(diào)節(jié)子宮活動(dòng)的藥理作用機(jī)制和活性物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。雖有研究報(bào)道益母草生物堿是其縮宮的活性部位，但其非生物堿部位藥理作用不明［2-3］。鑒于益母草注射液是縮宮止血藥，課題組在前期研究中對(duì)益母草注射液的不同提取部位開展了活血作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究，發(fā)現(xiàn)益母草注射液中存在止血和活血的雙重成分，其中水溶性總生物堿部位具有止血作用，而水溶性非生物堿部位具有活血作用，是益母草注射液縮宮止血的重要物質(zhì)基礎(chǔ)［4］。然而，這些活性部位對(duì)子宮活動(dòng)的作用尚不清楚。因此，本課題采用大鼠離體子宮肌條模型，初步研究益母草注射液水溶性總生物堿部位和水溶性非生物堿部位對(duì)離體子宮活動(dòng)的作用，以揭示益母草注射液縮宮止血的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為優(yōu)化益母草注射液生產(chǎn)工藝、提升產(chǎn)品質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 益母草注射液浸膏，由成都第一藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供，為益母草注射液制備工藝中最后稀釋制備成品前的濃縮浸膏，每1 g相當(dāng)于1 mL/支益母草注射液成品為0.2 g/支；益母草注射液水溶性總生物堿部位 （LH-1-B）和水溶性非生物堿部位（LH-1-A）由益母草注射液浸膏提取制備，與成品的換算分別為0.046 7、0.038 9 g/支。用前將3個(gè)樣品均用蒸餾水配成0.2支/mL，按提取物計(jì)算即分別配成43.0、7.8、9.3 mg/mL，備用。

1.2 動(dòng)物 SD大鼠，普通級(jí)，全雌，體質(zhì)量180～220 g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（川）2008-11，檢疫后用。

1.3 主要試劑及儀器 縮宮素注射液 （河南輔仁懷慶堂制藥有限公司，批號(hào)1204021）；苯甲酸雌二醇注射液 （天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)1005051）。NaCl、KCl、CaCl2、NaHCO3、葡萄糖試劑，均由成都市科龍化工試劑公司生產(chǎn)，采用去離子水配置洛氏液（配制方法1 000mL含NaCl9.2 g、KC1 0.42 g、CaCl20.24 g、NaHCO30.15 g、葡萄糖1.0 g）。

BL-420E生物機(jī)能系統(tǒng)，HW-400型張力換能器，恒溫水浴平滑肌槽，均由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。AL 104電子天平由Mettler Toledo公司生產(chǎn)。

2 方法

2.1 分離制備提取物 將益母草注射液浸膏1 200 g，稀釋至1 300 mL過(guò)大孔樹脂柱，用100%純水洗脫得到LH-1，將LH-1過(guò)離子交換樹脂，用純水洗脫得到LH-1-A，然后用3 mol/L NaCl溶液洗脫得到LH-1-B。

2.2 離體子宮的制備 參考文獻(xiàn)［5］方法制備。取健康、成年雌性未孕大鼠，實(shí)驗(yàn)前2日每日肌肉注射苯甲酸雌二醇1 mg/kg以造成動(dòng)情期。于第3天頸椎脫臼處死動(dòng)物，迅速剪開腹腔剖取子宮置于盛有洛氏液的玻璃皿中，輕輕剝離子宮上附著的結(jié)締和脂肪組織。取離體子宮中間段2～3 cm，一端固定于盛有洛氏液20 mL的浴槽，另一端連接張力換能器，浴槽中營(yíng)養(yǎng)液保持在 （37.0±0.5）℃，并通以（95%O2+5%CO2）的混合氣體，速度1～2個(gè)小氣泡/s，前負(fù)荷1 g。用BL-420E生物機(jī)能系統(tǒng)記錄子宮收縮曲線。

2.3 給藥方法 待曲線穩(wěn)定30 min，加入LH、LH-1-A和LH-1-B，采用累積給藥方式給藥，分別為：LH 37.5μL、37.5μL、75μL（終質(zhì)量濃度為L(zhǎng)H 0.081、0.162、0.324 mg/mL），LH-1-A 75μL、75μL、150μL（終質(zhì)量濃度為L(zhǎng)H-1-A 0.029，0.058，0.116mg/mL）和LH-1-B 75μL、75 μL、150μL（終質(zhì)量濃度為L(zhǎng)H-1-B 0.035，0.070，0.140 mg/ML）；每次加藥后記錄10 min離體子宮收縮活動(dòng)，三次加完后用洛氏液沖洗3次，再加入等量的洛氏液，待曲線穩(wěn)定后，用同樣的加藥方式加入下一組藥物；加入1 U/ML縮宮素160μL（終濃度為0.008 U/mL），記錄痙攣曲線10 Min后，分別加入LH、LH-1-A、LH-1-B的高劑量的藥液記錄10min，觀察離體子宮收縮活動(dòng)的變化?？瞻捉M給予蒸餾水。曲線下面積代表收縮活力，如下公式計(jì)算抑制率：

子宮抑制率=（給藥前活力-給藥后活力）/給藥前活力×100%

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析給藥前后的變化，結(jié)果以 （x±s）表示，P＜0.05為顯著性差異，P＜0.01為極顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 益母草注射液提取部位對(duì)正常大鼠非痙攣?zhàn)訉m收縮活動(dòng)的影響 由表1可見，蒸餾水對(duì)正常大鼠離體子宮的收縮張力最大值、最小值和平均值無(wú)明顯影響；與給藥前比較，益母草注射液浸膏可升高子宮收縮張力最小值和平均值，其中低、高劑量組最小值和中、高劑量組平均值均顯著高于給藥前（P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-A明顯降低收縮張力最大值和平均值，中劑量也明顯降低平均值 （P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-B高、中、低劑量組均可升高收縮張力的最大值、平均值和最小值，其中高劑量組對(duì)3個(gè)張力均有顯著效果，低、中劑量分別對(duì)最小值和最大值有顯著效果（P＜0.05或P＜0.01）。

表1 益母草注射液提取部位對(duì)正常大鼠非痙攣離體子宮收縮張力的影響 （x±s）

由表2可見，與給藥前比較，空白組蒸餾水對(duì)子宮收縮頻率和活力無(wú)明顯影響；益母草注射液浸膏中、高劑量組和LH-1-A高、中、低劑量組收縮頻率明顯降低，但浸膏高、中劑量組收縮活力明顯增強(qiáng)，而LH-1-A中、低劑量組收縮活力明顯下降，與對(duì)應(yīng)給藥前比較均有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-B對(duì)正常大鼠離體子宮收縮頻率無(wú)明顯影響，但可均加收縮活力，且高劑量組與給藥前比較差異顯著 （P＜0.05）。從抑制率可看出，益母草注射液浸膏和LH-1-B為促進(jìn)子宮收縮作用，LH-1-A為抑制子宮收縮作用。

表2 益母草注射液提取部位對(duì)正常大鼠非痙攣離體子宮收縮頻率和活力的影響 （x±s）

3.2 益母草注射液提取部位對(duì)正常大鼠痙攣性離體子宮收縮活動(dòng)的影響 由表3～表5可見，當(dāng)給予縮宮素終濃度為0.008 U/mL時(shí)，大鼠離體子宮立即出現(xiàn)痙攣狀態(tài)，表現(xiàn)為收縮張力基線明顯抬高，收縮頻率增大或呈持續(xù)高直線狀態(tài)，收縮張力最大值、最小值和平均值明顯升高，收縮活力也明顯增加 （P＜0.01）；待穩(wěn)定10 min后給予浸膏或不同提取部位高劑量，其中浸膏組收縮張力最大值、平均值和收縮活力均明顯下降，LH-1-A組收縮頻率、最大值、平均值和收縮活力均明顯下降，LH-1-B組收縮平均值和最大值均明顯降低，但最小值升高，以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05或P＜0.01）。從抑制率看，益母草注射液浸膏和LH-1-A主要表現(xiàn)為抑制縮宮素所致子宮平滑肌痙攣，LH-1-B作用不明顯，但亦無(wú)協(xié)同作用。

表3 益母草注射液提取部位對(duì)正常大鼠痙攣性離體子宮收縮頻率和張力平均值的影響 （x±s）

表4 益母草注射液提取部位對(duì)正常大鼠痙攣性離體子宮收縮張力最大值、最小值的影響 （x±s）

表5 益母草注射液提取部位對(duì)正常大鼠痙攣性離體子宮收縮活力的影響 （x±s）

4 討論

益母草是一味常用的活血調(diào)經(jīng)、利水消腫的中藥，常用于治療月經(jīng)不調(diào)、產(chǎn)后腹痛、尿不利、水腫等［6］。益母草注射液是益母草單方制劑，臨床常與縮宮素聯(lián)合使用預(yù)防或治療產(chǎn)后和流產(chǎn)后子宮出血，療效顯著［7-8］。離體子宮收縮試驗(yàn)是常用的評(píng)價(jià)藥物對(duì)子宮收縮作用的試驗(yàn)，方法經(jīng)典，操作簡(jiǎn)單、用藥量少。因此，本實(shí)驗(yàn)采用正常大鼠離體子宮研究益母草注射液中不同提取物對(duì)大鼠離體子宮活動(dòng)的影響，以期明確益母草注射液對(duì)子宮活動(dòng)的調(diào)節(jié)作用及其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

現(xiàn)代藥理研究顯示，益母草具有調(diào)經(jīng)作用，其中水部位和正丁醇部位是主要物質(zhì)基礎(chǔ)［9］，當(dāng)前明確報(bào)道對(duì)子宮有活性的益母草單體化合物有益母草堿和水蘇堿鹽［10］；如有報(bào)道鹽酸益母草堿可明顯減少不完全流產(chǎn)大鼠的陰道出血量和縮短出血時(shí)間，機(jī)制與促進(jìn)子宮收縮頻率和張力、升高血清雌二醇水平有關(guān)［11］；另有報(bào)道鹽酸益母草堿0.03、0.06、0.09 mg/mL和鹽酸水蘇堿0.12、0.18 mg/mL對(duì)縮宮素所致大鼠離體子宮痙攣分別表現(xiàn)為抑制和協(xié)同增強(qiáng)作用［12］。益母草注射液是由益母草制備而來(lái)，主要含有益母草水溶性部位，現(xiàn)以水蘇堿為其定量測(cè)定指標(biāo)。然而，雖然有大量基于臨床觀察的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道益母草注射液聯(lián)合縮宮素對(duì)產(chǎn)后和流產(chǎn)后陰道出血有良好作用，但基于臨床前觀察的縮宮止血研究報(bào)道未見，其作用機(jī)制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)更不清楚。因此，本課題在前期益母草注射液止血作用研究基礎(chǔ)上，開展益母草注射液的縮宮作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究，將對(duì)產(chǎn)品的二次開發(fā)有重要意義。

在本實(shí)驗(yàn)的劑量范圍內(nèi)，益母草注射液浸膏給藥劑量是其不同提取部位劑量的50%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，益母草注射液浸膏和LH-1-B對(duì)正常大鼠離體子宮有興奮作用，二者的興奮作用都主要是通過(guò)增強(qiáng)子宮收縮張力增強(qiáng)其活動(dòng)力，對(duì)收縮頻率無(wú)明顯影響；同時(shí)，在高劑量下，益母草注射液流浸膏抑制縮宮素所致正常大鼠離體子宮痙攣，LH-1-B則可與縮宮素協(xié)同增強(qiáng)子宮收縮張力平均值和最小值。另一方面，LH-1-A對(duì)正常大鼠離體子宮呈現(xiàn)抑制作用，并可抑制縮宮素所致子宮痙攣狀態(tài)，主要是通過(guò)降低收縮頻率和張力而抑制活動(dòng)力，其中LH-1-A抑制作用強(qiáng)于LH。以上結(jié)果表明，益母草注射液中存在興奮子宮收縮和抑制子宮收縮的不同物質(zhì)，其中LH-1-B是益母草注射液縮宮作用的主要有效部位，其他部位是抑制成分；其次，相對(duì)劑量小的浸膏抑制縮宮素引起的正常大鼠離體子宮收縮，而相對(duì)劑量大的LH-1-B可增強(qiáng)縮宮素引起的子宮痙攣，表明益母草注射液的縮宮作用與劑量相關(guān)，與縮宮素聯(lián)合用藥的縮宮作用需要較大劑量才能起效。

本研究提示，益母草注射液的縮宮止血作用是多成分、多途徑共同作用的結(jié)果，至少包括水溶性生物堿部位的縮宮作用和水溶性非生物堿部位的止血作用，但兩者之間的關(guān)系及深層機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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R285.5

：B

：1001-1528（2015）05-1103-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.05.041

2014-06-18

國(guó)家 “十二五”科技支撐計(jì)劃 （2011BAI13B05）；國(guó)家 “973”項(xiàng)目 （2012CB723502）；國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81303209）；四川省科技廳青年科技創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目 （2014TD0007）

謝曉芳 （1983—），女，博士，研究方向?yàn)橹兴幩幚砼c毒理。Tel：13980522864，E-mail：xxf14544@163.com

*通信作者：彭 成 （1964—），男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幩幚砼c毒理。Tel：（028）61800005，E-mail：pengchengchengdu@126.com