健脾化痰方對胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞NF-κB、脂聯(lián)素和抵抗素的影響

李保良， 張 琪， 林冠凱， 費建平， 居凌云

（常州市中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科，江蘇常州213003）

［科研報道］

健脾化痰方對胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞NF-κB、脂聯(lián)素和抵抗素的影響

李保良， 張 琪， 林冠凱， 費建平， 居凌云

（常州市中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科，江蘇常州213003）

目的觀察健脾化痰方對胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞NF-κB表達(dá)和脂聯(lián)素、抵抗素分泌的影響，探討其改善胰島素抵抗 （IR）的機(jī)制。方法采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，將3T3-L1小鼠前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞，通過地塞米松誘導(dǎo)建立IR細(xì)胞模型，將脂肪細(xì)胞分為正常組 （基礎(chǔ)培養(yǎng)液加10%空白組血清培養(yǎng)正常脂肪細(xì)胞）、模型組（基礎(chǔ)培養(yǎng)液加10%空白組血清培養(yǎng)IR脂肪細(xì)胞）、健脾化痰組 （基礎(chǔ)培養(yǎng)液加10%健脾化痰組血清培養(yǎng)IR脂肪細(xì)胞）和吡格列酮組 （基礎(chǔ)培養(yǎng)液加10%吡格列酮組血清培養(yǎng)IR脂肪細(xì)胞），培養(yǎng)48 h，葡萄糖氧化酶法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中葡萄糖濃度，ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中脂聯(lián)素和抵抗素量，RT-qPCR檢測NF-κB表達(dá)。結(jié)果與正常組比較，模型組葡萄糖消耗量和脂聯(lián)素含有量顯著降低 （P＜0.05），抵抗素含有量顯著升高 （P＜0.05），NF-κB表達(dá)明顯上調(diào) （P＜0.05）；與模型組比較，健脾化痰組和吡格列酮組葡萄糖消耗量和脂聯(lián)素含有量明顯升高 （P＜0.05），抵抗素含有量顯著降低 （P＜0.05），NF-κB表達(dá)下調(diào) （P＜0.05）。結(jié)論NF-κB、脂聯(lián)素和抵抗素參與IR發(fā)生，健脾化痰方可能通過抑制IR脂肪細(xì)胞NF-κB異常表達(dá)，增加脂聯(lián)素分泌、減少抵抗素分泌，改善IR。

胰島素抵抗；健脾化痰方；NF-κB；脂聯(lián)素；抵抗素；3T3-L1脂肪細(xì)胞

非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）已成為臨床常見的一種慢性肝病，其發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚未完全清楚。近年來研究表明，胰島素抵抗 （insulin resistance，IR）在NAFLD發(fā)生發(fā)展中起關(guān)健作用，IR不僅導(dǎo)致脂肪在肝臟堆積，還引起肝細(xì)胞炎癥、壞死，形成非酒精性脂肪性肝炎甚至肝硬化［1-3］。越來越多的研究表明脂肪組織是IR產(chǎn)生的始發(fā)部位，其分泌的脂肪細(xì)胞因子如脂聯(lián)素、抵抗素、IL-6等與IR密切相關(guān)，針對脂肪細(xì)胞因子表達(dá)異常的治療方法可顯著改善IR［3-6］，因此，改善IR狀態(tài)脂肪細(xì)胞因子分泌成了目前防治IR相關(guān)的NAFLD等病的熱點。健脾化痰方是我院治療NAFLD的有效專方，多年來，在臨床應(yīng)用中療效顯著，并有較好的護(hù)肝、調(diào)節(jié)血脂和抗氧化等作用［7-8］。本實驗運用藥物血清學(xué)研究方法，觀察健脾化痰方含藥血清對胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞NF-κB表達(dá)、脂聯(lián)素和抵抗素分泌的影響，探討健脾化痰方改善胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞IR的可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物與細(xì)胞株 SPF級雄性Wistar大鼠，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（蘇）2002-0031。3T3-L1小鼠前脂肪細(xì)胞株，購于浙江大學(xué)細(xì)胞研究室。

1.2 藥物 健脾化痰方 （炒黨參10 g、炒白術(shù)10 g、茯苓10 g、澤瀉15 g、橘絡(luò)12 g，姜半夏12 g、茵陳30 g、桂枝6 g、姜黃10 g、絞股藍(lán)20 g、炙甘草3 g）購自常州市中醫(yī)醫(yī)院中藥房，常規(guī)水煎，濃縮至1.20 g/mL，-20℃保存?zhèn)溆?；鹽酸吡格列酮片 （江蘇德源藥業(yè)有限公司，批號41203274）。

1.3 試劑 1640培養(yǎng)基，胎牛血清 （FBS）和胰蛋白酶（GIBCO公司）；3-異丁基-1-甲基次黃嘌呤（IBMX）；地塞米松，牛胰島素，油紅O干粉 （Sigma公司）；葡萄糖測定試劑盒-氧化酶法 （北京普利萊基因技術(shù)有限公司）；脂聯(lián)素、抵抗素ELISA檢測試劑盒（Uscnk公司）；高純總RNA快速提取試劑盒（Generay公司）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Fermentas公司）；qPCR試劑盒（Bio-Rad公司）；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.4 儀器 3111型二氧化碳培養(yǎng)箱（Thermo公司）；spectra Plus 384型全波長酶標(biāo)儀（美國MD公司）；ECLIPSE Ti-S型倒置熒光顯微鏡（Nikon公司）；SW-CF-2FD凈化工作臺 （蘇州凈化設(shè)備有限公司）；5810R型臺式高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司）；80-2型臺式低速離心機(jī)（上海醫(yī)療器械 （集團(tuán)）有限公司）；DHG-9070A恒溫箱 （上海精宏）；Merinton SMA4000高精度分光光度計，CFX connect Real-Time PCR System及配套分析軟件（Bio-Rad公司）。

1.5 含藥血清的制備 SPF雄性Wistar大鼠40只，體質(zhì)量 （200±20）g，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后，隨機(jī)分組為空白組、健脾化痰組和吡格列酮組，根據(jù)人和動物間體表面積折算的等效劑量比值，換算不同的藥物灌胃劑量，然后取等效劑量10倍量灌胃，即健脾化痰方2.4 g/（kg·d），吡格列酮40.5 mg/（kg·d），空白組給予相同體積的生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥5次，每日相同時間分別給藥2次，在第4次灌胃后禁食不禁水12 h后最后1次給藥，1 h后，10%水合氯醛腹腔麻醉，無菌條件下腹主動脈取血，分別制備成空白組血清、健脾化痰組血清和吡格列酮組血清，滅活、過濾除菌、分管，-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 實驗步驟

1.6.1 3T3-L1小鼠前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞

在37℃、5%CO2的條件下，3T3-L1前脂肪細(xì)胞置于含10%FBS的1640培養(yǎng)基的6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)，待細(xì)胞融合2 d后，換用含0.5 mmol/L IBMX、1μmol/L地塞米松、5μg/mL胰島素和10%FBS的1640培養(yǎng)，48 h后再換用含5μg/mL胰島素和10%FBS的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h，隨后以10%FBS的1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，2 d換液一次，誘導(dǎo)分化8～12 d的3T3-L1前脂肪細(xì)胞90%～95%呈脂肪細(xì)胞表型，進(jìn)行油紅O染色鑒定為脂肪細(xì)胞，可用于實驗。

1.6.2 建立胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞模型 參照文獻(xiàn)［9-10］，采用地塞米松誘導(dǎo)建立胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞模型，對分化好的脂肪細(xì)胞分為正常組和模型組，正常組用10%FBS的1640培養(yǎng)基，模型組用含有1μmol/L地塞米松、10 nmol/L胰島素和10%FBS的1640培養(yǎng)基，共培養(yǎng)144 h。每48 h換液，取培養(yǎng)上清液，用葡萄糖氧化法檢測其葡萄糖量，計算葡萄糖消耗量，二者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義作為建模成功依據(jù)。

1.6.3 分組及處理 正常脂肪細(xì)胞為正常組，胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞模型隨機(jī)分為模型組、健脾化痰組和吡格列酮組。正常組和模型組均給予含空白組血清的培養(yǎng)基，健脾化痰組和吡格列酮組分別給予含健脾化痰組血清和吡格列酮組血清的培養(yǎng)基，血清濃度均為10%，37℃、5% CO2培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞上清，用于檢測脂聯(lián)素和抵抗素量，同時收集各組細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，以測定細(xì)胞NF-κB表達(dá)。1.6.4 葡萄糖消耗量測定 取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，2 000×g離心10min，收集上清，以葡萄糖氧化酶法檢測每孔培養(yǎng)液中葡萄糖的量，與未接種細(xì)胞的空白孔葡萄糖量相減，計算葡萄糖消耗量。

1.6.5 ELISA法測定上清液中脂聯(lián)素和抵抗素 取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，2 000×g離心10 min，收集上清，按照ELISA試劑盒說明書操作檢測脂聯(lián)素和抵抗素。

1.6.6 實時熒光定量PCR技術(shù)測定脂肪細(xì)胞NF-κB基因mRNA水平

1.6.6.1 總RNA的提取及鑒定 每10 cm2生長的培養(yǎng)細(xì)胞中加入1 mL Trizol試劑，按說明書提取總RNA，測定RNA的純度和質(zhì)量，滿足RT-qPCR要求。

1.6.6.2 引物合成 參考16sRND基因文庫設(shè)計引物。NF-κB引物序列，正向5＇-TCA ATGGCTACACAGGACCA-3＇，反向5＇-ATCTTGAGCTCCGCAGTGTT-3＇；β-actin引物序列，正向5＇-CAAAAGCCACCCCCACT CCTAAGA-3＇，反向5＇-GCCC TGGCTGCCTCAACACCTC-3＇。以上引物均由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.6.6.3 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 按下列順序?qū)⒃噭┘尤氲紼P管中（共12μL）并進(jìn)行操作：總RNA 3μL（約1μg），Oligo（dT）18引物1μL，隨機(jī)引物1μL，DEPC水7μL，混勻，短暫離心，65℃干浴5 min；在冰上冷卻，短暫離心，再放回冰上；往EP管里面加入以下試劑（共8μL）：5 x Reaction Buffer4μL，Ribolock TMRNase Inhibition（20 U/μL）1 μL，10 mmol/L dNTP（mix）2μL，RevertAid TMM-MmLv Reverse Transcriptase 1μL，至總體積20μL；混勻，25℃干浴5 min，接著42℃干浴60 min。70℃干浴5 min終止反應(yīng)。-70℃保存cDNA。

1.6.6.4 熒光定量PCR擴(kuò)增實驗 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系：IQ SYBR Green Supermix 12.5μL，正向引物10μmol/L 1 μL，反向引物10μmol/L 1μL，cDNA10.5μL。qPCR實驗參數(shù)：①50.0℃預(yù)熱3 min，②95.0℃預(yù)變性3 Min，③95.0℃變性10 sec，④60.0℃退火20 sec，⑤72.0℃延伸30 sec（終點讀板模式），⑥從③至⑤重復(fù)40次，⑦每10 sec增加0.5℃，在65℃至95℃溫度范圍內(nèi)建立熔解曲線 （終點讀板模式），⑧結(jié)束。實驗結(jié)果由熒光定量PCR分析軟件BIO-RAD CFX Manager自動進(jìn)行統(tǒng)計和計算，生成相應(yīng)的數(shù)據(jù)文件。

1.7 統(tǒng)計分析方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （x±s）表示，組間及自身前后比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定 誘導(dǎo)分化前的3T3-L1脂肪細(xì)胞呈梭形，與成纖維細(xì)胞相似，胞漿中無脂滴；定向分化為成熟的脂肪細(xì)胞典型表現(xiàn)為細(xì)胞漿豐富，含有大量脂肪滴，脂滴分布在核周圍，呈 “戒環(huán)樣”結(jié)構(gòu)，油紅O染色后可見胞質(zhì)中脂滴著紅色 （見圖1）。

2.2 正常組和模型組各時點葡萄糖消耗量 由表1可知，用地塞米松誘導(dǎo)培養(yǎng)3T3-L1脂肪細(xì)胞48、96、144 h后，模型組葡萄糖消耗量均顯著降低，與正常組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05），提示分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)48 h建立IR脂肪細(xì)胞模型成功，并在144 h內(nèi)較穩(wěn)定。

表1 各時點葡萄糖消耗量比較 （x±s）

圖1 3T3-L1脂肪細(xì)胞鑒定（×100）

2.3 健脾化痰方對IR脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗量、脂聯(lián)素和抵抗素分泌的影響 由表2可知，培養(yǎng)48 h時，模型組葡萄糖消耗量明顯低于其他3組，健脾化痰組和吡格列酮組低于正常組，健脾化痰組低于吡格列酮組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示健脾化痰方和吡格列酮均可顯著提高IR脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗量，吡格列酮優(yōu)于健脾化痰方；模型組上清中脂聯(lián)素量明顯低于其他3組，健脾化痰組和吡格列酮組又顯著低于正常組，吡格列酮組低于健脾化痰組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；模型組上清中抵抗素量高于其他3組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05），提示IR時，健脾化痰方可增加脂聯(lián)素分泌和抑制抵抗素分泌。

2.4 各組細(xì)胞提取總RNA的質(zhì)量和純度 由表3可知，各組細(xì)胞所提取的RNA的A260/A280＞2.0且＜2.3，提示制備的RNA較純，由圖2可知，各組樣品RNA均有清晰的5S、28S和18S三條帶，且28S/18S約為2/1，提示樣品RNA完整性好，RNA的質(zhì)量濃度＞3.2μg/μL，總量＞50 μg。說明各樣品總RNA的質(zhì)量、濃度和總量符合進(jìn)行RT-qPCR實驗要求。

表2 4組上清葡萄糖消耗量、脂聯(lián)素和抵抗素比較（x±s）

表3 各組細(xì)胞總RNA的質(zhì)量（x±s）

圖2 總RNA電泳圖

2.5 各組細(xì)胞NF-κB基因mRNA表達(dá) 由表4可知，當(dāng)脂肪細(xì)胞出現(xiàn)胰島素抵抗時，與正常脂肪細(xì)胞相比，NF-κB基因表達(dá)水平顯著升高 （P＜0.05），健脾化痰組和吡格列酮組均能顯著下調(diào)其表達(dá) （P＜0.05）。

3 討論

隨著社會發(fā)展，與IR相關(guān)的疾病，如2型糖尿病、NAFLD和肥胖等，發(fā)病率呈上升趨勢，有關(guān)IR產(chǎn)生機(jī)制和治療措施是近年的研究熱點，胰島素作用的主要靶器官脂肪組織不僅是脂質(zhì)能量貯存庫，而且還可以分泌多種細(xì)胞因子參與機(jī)體物質(zhì)代謝，調(diào)節(jié)能量平衡等，如分泌脂聯(lián)素、抵抗素、瘦素、TNF-α、IL-6等，在參與維持機(jī)體組織對胰島素敏感性中具有重要作用［11］。

表4各組脂肪細(xì)胞NF-κB基因MRNA表達(dá)水平比較（x±s）

脂聯(lián)素主要由脂肪細(xì)胞分泌，具有多種生物效能，尤其是與IR和NAFLD、糖尿病等發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素表達(dá)降低與IR的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，IR又致脂聯(lián)素水平進(jìn)一步下降，脂聯(lián)素下調(diào)和IR之間是互為因果的關(guān)系［12］。研究表明IR時，脂聯(lián)素低表達(dá)，而NF-κB過表達(dá)，二者呈明顯負(fù)相關(guān)［13］，進(jìn)一步研究提示IKK激活引起NF-kB活化可能與IR時脂肪組織脂聯(lián)素合成減少有關(guān)［14］。

抵抗素是由脂肪細(xì)胞分泌的肽類激素，在嚙齒類動物的機(jī)體生理代謝與調(diào)節(jié)中起重要作用［15］。Liu等研究說明抵抗素過表達(dá)與脂代謝紊亂和胰島素抵抗有關(guān)［16］。進(jìn)一步研究表明，抵抗素可通過多種途徑抑制肝臟、骨骼肌和脂肪組織對胰島素的敏感性，抑制胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響糖脂代謝，破壞血糖穩(wěn)態(tài)，提高血脂水平，促進(jìn)高血糖和高脂血癥形成，導(dǎo)致IR、2型糖尿病與NAFLD等的發(fā)生發(fā)展［17］。研究發(fā)現(xiàn)給予體外培養(yǎng)的3T3-L脂肪細(xì)胞一定濃度的胰島素，抵抗素能降低其37%葡萄糖攝取量［18］，抵抗素不僅能抑制胰島素受體底物 （IRS）的磷酸化而影響胰島素上游信號的正常傳導(dǎo)，還可通過激活NF-κB抑制其下游通路的傳導(dǎo)，而加重IR反應(yīng)［19-20］。

由上述可見，IR與NF-κB、脂聯(lián)素和抵抗素異常表達(dá)密切相關(guān)，因此，調(diào)節(jié)其異常表達(dá)可能對改善IR狀態(tài)有重要意義。

目前，3T3-L1前脂肪細(xì)胞株被國內(nèi)外學(xué)者廣泛用于有關(guān)IR研究，對成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞可采用多種方法誘導(dǎo)建立IR脂肪細(xì)胞模型，用地塞米松誘導(dǎo)成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞建立IR細(xì)胞模型是常用的經(jīng)典方法［9-10，21］，本實驗采用此方法，結(jié)果培養(yǎng)48 h后，模型組脂肪細(xì)胞的葡萄糖消耗量顯著減少，與正常組比較，各個時點葡萄糖消耗量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05），但各時點各組自身前后比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示地塞米松誘導(dǎo)48h是該造模方法成功構(gòu)建功IR細(xì)胞模型的關(guān)鍵節(jié)點，且模型穩(wěn)定性較好，與以往類似研究結(jié)果一致。

本研究表明，IR時3T3-L1脂肪細(xì)胞NF-κB基因表達(dá)上調(diào)，脂聯(lián)素分泌減少，抵抗素分泌增多，再次證實NF-κB、脂聯(lián)素和抵抗素異常表達(dá)與IR密切相關(guān)，與上述研究結(jié)果相似，提示NF-κB異常表達(dá)與脂聯(lián)素和抵抗素異常分泌參與IR的發(fā)生，它們間相互作用機(jī)制有待進(jìn)一步探索闡明。

健脾化痰方是我院治療NAFLD的有效專方，方中黨參、白術(shù)益氣健脾，切斷生痰濁之源；桂枝、茯苓、澤瀉、茵陳溫化痰濁；陳皮、姜半夏、荷葉、山楂燥濕化痰，消食理氣和胃，祛已成之痰滯；姜黃、丹參養(yǎng)血活血通絡(luò)，祛肝絡(luò)之瘀滯，諸藥合用，共奏健脾化痰，養(yǎng)肝通絡(luò)之功，取氣血并調(diào)，痰瘀并治之效。前期研究表明該方治療NAFLD療效顯著，可明顯改善機(jī)體血脂代謝、氧自由基代謝和調(diào)節(jié)有關(guān)脂肪細(xì)胞因子分泌功能［7-8］。本研究結(jié)果表明，健脾化痰方含藥血清培養(yǎng)48 h時，IR脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗量顯著提高 （P＜0.05），其提高的幅度不及吡格列酮組 （P＜0.05），提示健脾化痰方和吡格列酮均可改善IR，吡格列酮優(yōu)于健脾化痰方；上清中脂聯(lián)素量明顯高于模型組 （P＜0.05），其提高的幅度顯著高于吡格列酮組 （P＜0.05），提示健脾化痰方和吡格列酮均可使IR脂肪細(xì)胞增加脂聯(lián)素分泌，健脾化痰方優(yōu)于吡格列酮；上清中抵抗素量明顯低于模型組 （P＜0.05），提示健脾化痰方和吡格列酮均可抑制IR脂肪細(xì)胞分泌抵抗素。由此可知，健脾化痰方改善脂肪細(xì)胞IR狀態(tài)可能與其調(diào)節(jié)IR脂肪細(xì)胞分泌脂聯(lián)素和抵抗素功能有關(guān)，這也是其治療NAFLD具有良好療效的機(jī)制之一。

NF-κB是一種重要的前炎癥因子基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控子，除在肝組織的炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激、肝細(xì)胞凋亡和再生中發(fā)揮著重要作用外［22］，還因其活化可致PI3K/Akt胰島素信號通路障礙在IR的形成和發(fā)展中有重要作用［23］，而IR又是NAFLD發(fā)病機(jī)制的中心事件，在NAFLD病情進(jìn)程中起重要作用，表明NF-κB信號通路在IR和NAFLD發(fā)生發(fā)展中有重要作用。本研究結(jié)果表明，IR時，脂肪細(xì)胞NF-κB基因表達(dá)水平顯著升高 （P＜0.05），而健脾化痰方和吡格列酮均能顯著下調(diào)其表達(dá) （P＜0.05），提示健脾化痰方和吡格列酮能下調(diào)IR時脂肪細(xì)胞NF-κB異常高表達(dá)，調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞因子分泌，改善IR。

綜上所述，NF-κB、脂聯(lián)素、抵抗素參與IR發(fā)生，健脾化痰方可能是通過抑制IR狀態(tài)時脂肪細(xì)胞NF-κB異常高表達(dá)，增加其脂聯(lián)素分泌和減少抵抗素分泌，從而改善IR，這也可能是其治療NAFLD作用機(jī)制之一。

［1］McCullough A J.Pathophysiology of nonalcoholic steatohepatitis［J］.JClin Gastroenterol，2006，40（Suppl 1）：17-29.

［2］Utzschneider K M，Kahn S E.Review：The role of insulin resistance in nonalcoholic fatty liver disease［J］.J Clin Endocrinol Metab，2006，91（12）：4753-4761.

［3］Orlik B，Handzlik G，Olszanecka-Glinianowicz M.The role of adipokines and insulin resistance in the pathogenesis ofnonalcoholic fatty liver disease［J］.Postepy Hig Med Dosw（online），2010，64：212-219.

［4］Diehl AM.Tumor necrosis factorand its potential role in insulin resistance and nonalcoholic fatty liver disease［J］.Clinics in liver disease，2004，8（3）：619-638.

［5］Polyzos SA，Kountouras J，Zavos C.Nonalcoholic Fatty Liver Disease：The pathogenetic roles of insulin resistance and adipocytokines［J］.Current Molecular Medicine，2009，9（3）：299-314.

［6］曾 俊，楊剛毅.脂肪細(xì)胞因子與胰島素抵抗的關(guān)系及其機(jī)制研究新進(jìn)展［J］.成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，6（1）：78-82.

［7］李保良，羅 仁，劉友章，等.健脾化痰法對非酒精性脂肪肝血清SOD和MDA的影響［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2008，35（7）：992-994.

［8］李保良，張 琪，楊 娟，等.健脾化痰方對非酒精性肝病脂聯(lián)素、TNF-α和IL-6的影響［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2014，41（5）：860-863.

［9］劉曉莉，潘 瑜，束金蓮，等.氯沙坦改善3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗的機(jī)制研究［J］.上海交通大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2011，31（12）：1702-1706.

［10］郭曉農(nóng)，楊具田，牛 峰，等.胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞模型的建立及鑒定［J］.中藥材，2008，31（2）：258261.

［11］袁 慧.淺議脂肪細(xì)胞因子與胰島素抵抗［J］.科技致富向?qū)В?011，19（30）：22.

［12］張 媛，李英敏，馮月秋，等.血清脂聯(lián)素水平與肥胖、胰島素抵抗的關(guān)系探討［J］.山東大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2009，47（6）：124-127.

［13］楊智勇，趙 晟，夏婷婷，等.脂聯(lián)素、核因子-κB在胰島素抵抗大鼠表達(dá)［J］.解剖科學(xué)進(jìn)展，2007，13（2）：131-133.

［14］崔麗娟，都 健，曾芙蓉，等.胰島素抵抗大鼠脂聯(lián)素與IKKmRNA表達(dá)的相關(guān)性研究［J］.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，36（6）：964-966.

［15］Steppan C M，Balley S T，Bhat S，et al.The hormone resistin links obesity to diabetes［J］.Nature，2001，409（6818）：307-312.

［16］Liu Y，Wang Q，Pan Y B，et al.Effects of over expressing resistin on glucose and lipid metabolisMin mice［J］.J Zhejiang Univ Sci B，2008，9（1）：44-50.

［17］王婉奕，朱 森，楊吉春，等.抵抗素與肥胖和2型糖尿?。跩］.生理科學(xué)進(jìn)展，2009，40（2）：157-160.

［18］Palanivel R，Sweeney G.Regulation of fatty acid uptake and metabolisMin L6 skeletal muscle cells by resist in［J］.Febs Letter，2005，579（22）：5049-5054.

［19］朱良榮，管小琴，祁明美，等.抵抗素在非酒精性脂肪肝大鼠胰島素抵抗中的作用［J］.中國生物制品學(xué)雜志，2012，25（2）：185-189.

［20］馬毅超，陳民利.NF-κB信號通路與胰島素抵抗［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2013，23（8）：61-66.

［21］王麗靜，張 尉，劉小鶯，等.地塞米松誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立［J］.福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，41（3）：282-284.

［22］Qi MM，Guan X Q，Zhu L R，et al.The effect of resistin on nuclear factor-κB and tumor necrosis factor-a expression in hepatic steatosis［J］.Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi，2012，20（1）：40-44.

［23］Ribeiro PS，Cortez-Pinto H，Sola S，etal.Hepatocyte apoptosis，expression of death receptors，and activation of NF-kappaB in the liver of nonalcoholic and alcoholic steatohepatitis patients［J］.AMJGastroenterol，2004，99（9）：1708-1717.

R285.5

：B

：1001-1528（2015）05-1083-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.05.035

2014-06-15

江蘇省中醫(yī)藥科技項目 （LZ09114）；常州市科技計劃項目 （CZ20120017）。

李保良 （1965—），男，博士，主任中醫(yī)師，從事中醫(yī)藥防治慢性脾胃疾病和脂肪肝機(jī)制研究。Tel：13912332933，E-mail：lbl513@163.com