Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測(cè)痰液結(jié)核分枝桿菌的比較

陳海強(qiáng)，唐柳生

1.廣西壯族自治區(qū)玉林市結(jié)核病防治所，廣西玉林537006；2.廣西壯族自治區(qū)龍?zhí)夺t(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，廣西柳州545005

Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測(cè)痰液結(jié)核分枝桿菌的比較

陳海強(qiáng)1，唐柳生2

1.廣西壯族自治區(qū)玉林市結(jié)核病防治所，廣西玉林537006；2.廣西壯族自治區(qū)龍?zhí)夺t(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，廣西柳州545005

目的 探討痰液Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的結(jié)果及二者之間的符合程度。方法對(duì)103例臨床診斷為肺結(jié)核的痰標(biāo)本做Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測(cè)，并將結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果103份痰液兩種方法檢測(cè)結(jié)核桿菌共有72例陽性，陽性率為69.9%，其中涂片法陽性65例，陽性率為63.1%，Xpert MTB/RIF法陽性61例，陽性率為59.2%；兩種方法均陽性52例，均陰性30例，總的符合率達(dá)79.6%，有12例Xpert MTB/RIF法陰性涂片法陽性,有9例涂片法陰性Xpert MTB/RIF法陽性。二者比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。61例Xpert MTB/RIF法檢測(cè)陽性對(duì)利福平耐藥16例，耐藥率為26.2%。結(jié)論兩法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌結(jié)果基本一致，二者相互結(jié)合更能提高檢測(cè)陽性率。

Xpert MTB/RIF法；涂片法；結(jié)核分枝桿菌；利福平；耐藥痰液

在發(fā)現(xiàn)結(jié)核病傳染源、選擇治療方案及評(píng)價(jià)防治效果等方面痰涂片鏡檢起到了至關(guān)重要的作用，但其陽性率較低。近幾年，結(jié)核病擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)（Xpert MTB/RIF系統(tǒng)）在Gene Xpert多重平臺(tái)上得到了開發(fā)，也檢測(cè)了結(jié)核桿菌對(duì)利福平的耐藥性，為探討痰液Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的結(jié)果及二者之間的符合程度，該研究整群選取該院2014年10—11月收治的103例臨床診斷為肺結(jié)核的痰標(biāo)本做Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測(cè)，并將結(jié)果進(jìn)行比較。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 病例來源

整群選取103例標(biāo)本均來自2014年10—11月到廣西壯族自治區(qū)龍?zhí)夺t(yī)院就診的肺結(jié)核患者的痰液，其中男70例，女33例，年齡為13～81歲。

1．2儀器及試劑

美國Cepheid公司的Gene Xpert檢測(cè)系統(tǒng)及試劑；熒光染液由珠海貝索公司提供；熒光顯微鏡由舜宇公司提供。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片鏡檢熒光抗酸染色，40倍鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)1條以上/300視野報(bào)告陽性，全片300個(gè)視野無抗酸桿菌報(bào)告陰性。

1.3.2 Xpert MTB/RIF法將1 mL痰標(biāo)本放到有螺旋蓋的前處理管內(nèi),將兩倍痰標(biāo)本體積的痰標(biāo)本處理液添加到痰標(biāo)本里。劇烈搖動(dòng)前處理管大約10～20次或者將其置于渦旋振蕩器震蕩20 s左右，搖晃至沒有可見塊狀痰標(biāo)本為止。打開Cartridge反應(yīng)盒，用試劑盒內(nèi)的專用無菌吸管取出2 mL處理后的痰樣本經(jīng)過加樣孔慢慢加入Cartridge反應(yīng)盒里。并將Cartridge反應(yīng)盒放置入Gene Xpert檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)。約2 h后儀器會(huì)自動(dòng)判讀結(jié)果。MTB檢出極低:CT值＜16，陽性級(jí)別極低，定義為1+；MTB檢出低:CT值=16-22，陽性級(jí)別低，定義為2+；MTB檢出中等:CT值=22-28，陽性級(jí)別中，定義為3+；MTB檢出高:CT值＞28，陽性級(jí)別高，定義為4+；MTB未檢出：MTB檢測(cè)陰性。RIF resistance檢出：利福平耐藥（R）；RIF resistance未檢出：利福平敏感（S）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

103份痰液兩種方法檢測(cè)結(jié)核桿菌共有72例陽性，陽性率為69.9%，其中涂片法陽性65例，陽性率為63.1%，Xpert MTB/RIF法陽性61例，陽性率為59.2%，其中有16例對(duì)利福平耐藥，耐藥率為26.2%；兩種方法均陽性52例，均陰性30例，總的符合率達(dá)79.6%，有12例Xpert MTB/RIF法陰性涂片法陽性,有9例涂片法陰性Xpert MTB/RIF法陽性。二者比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 0.33，P＞0.05），見表1。

表1 兩種方法檢測(cè)結(jié)核桿菌的情況

3 討論

結(jié)核桿菌大部分存在于肺部的壞死病灶組織中，屬于肺結(jié)核病人攜帶的一類傳染性病菌，結(jié)核桿菌通過患者排痰將其排出體外，所以會(huì)有一定量的結(jié)核桿菌出現(xiàn)在痰液中，因此，研究者可以將痰液作為標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，并通過檢測(cè)陽性結(jié)果來確定一個(gè)人是否為結(jié)核病患者。最早的檢測(cè)方法是以痰涂片為主，此種檢測(cè)方式檢出率極低，所需時(shí)間約為一天，而Xpert MTB/RIF法只需要2 h就能將診斷和耐藥性結(jié)果得出，大部分情況下痰涂片的陽性率為13.76%～40.4%[1-2],而該報(bào)道的涂片陽性率高達(dá)63.1%，可能與所選病例有關(guān)，該文所選擇的病例均為臨床上已經(jīng)確認(rèn)為肺結(jié)核的病例，再加上作者所使用的是熒光染色法，陽性率要比傳統(tǒng)的萋妮氏染色法高10%左右[3]。該文結(jié)果顯示兩種方法均陽性52例，均陰性30例，總的符合率達(dá)79.6%，Boehme應(yīng)用Xpert MTB/RIF對(duì)陽性患者的痰液培養(yǎng)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)一次的敏感性為90.3%，但涂片鏡檢只有67.1%[4]，其報(bào)道的Xpert MTB/ RIF法陽性率高于涂片法，該文報(bào)道的Xpert MTB/RIF法陽性率低于涂片法，可能是12例Xpert MTB/RIF法陰性涂片法陽性當(dāng)中有非結(jié)核分枝桿菌的存在[5]，因?yàn)镚ene Xpert檢測(cè)系統(tǒng)只能檢測(cè)結(jié)核桿菌，而不能檢測(cè)非結(jié)核分枝桿菌，Helb等最早對(duì)Xpert MTB/RIF系統(tǒng)特異度檢驗(yàn)，對(duì)20份不同的非結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行檢測(cè)，全部被正確排除，特異度為100%，結(jié)核分枝桿菌菌體存在對(duì)檢測(cè)結(jié)果不產(chǎn)生影響，高濃度的非結(jié)核分枝桿菌和低濃度的結(jié)核桿菌混合后，系統(tǒng)對(duì)其檢測(cè)率仍然為100%[6]。

利福平耐藥被作為耐多藥的一個(gè)重要指標(biāo)。Xpert MTB/RIF系統(tǒng)對(duì)利福平耐藥菌株rpoB區(qū)的23個(gè)不同變異類型均能檢測(cè)到。Xpert MTB/RIF對(duì)利福平耐藥株的敏感性檢測(cè)率為97.6%、對(duì)敏感菌株的敏感性檢測(cè)率為98.1%[4]，特異度可達(dá)100%[7]。該文報(bào)道Xpert MTB/RIF系統(tǒng)檢測(cè)出利福平耐藥率為26.2%，楊景彬報(bào)道的結(jié)核桿菌絕對(duì)濃度法耐藥試驗(yàn)顯示利福平耐藥率為21%[8]，低于該文報(bào)道的Xpert MTB/RIF法，另外也有報(bào)道指出此系統(tǒng)對(duì)利福平耐藥檢測(cè)時(shí)有假陽性出現(xiàn)，美國一項(xiàng)調(diào)查表明，表型檢測(cè)呈敏感的130份標(biāo)本，經(jīng)過Xpert MTB/RIF系統(tǒng)檢測(cè)其中3例對(duì)利福平耐藥，假陽性率是2.9%。類似的假陽性現(xiàn)象在rpoB區(qū)基因序列檢測(cè)中也曾出現(xiàn)[9]，由于該文未對(duì)所研究病例作結(jié)核桿菌培養(yǎng)及其耐藥性試驗(yàn)，因此，該文研究無法表達(dá)該系統(tǒng)的敏感性、特異性和假陽性率，該文無法無天對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。盡管如此，但從相關(guān)資料報(bào)道我們得知Xpert MTB/RIF系統(tǒng)無論在特異性和敏感性方面均有較好的檢測(cè)功效，即使檢測(cè)到MTB陽性也并不確定為“涂陰”或“涂陽”，無法將病例報(bào)告系統(tǒng)的患者詳細(xì)分類，也就無法制定感染控制干預(yù)的措施[10]。雖然有這類問題的存在，但該系統(tǒng)的使用前景依然樂觀，全球范圍內(nèi)2012年快速診斷方法診斷出結(jié)核病患者超過40%[11]。如果將Xpert MTB/ RIF法和涂片法相結(jié)合，更能提高分枝桿菌的檢出率，對(duì)控制耐多藥結(jié)核病疫情有著非常重要的意義。

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Which MTB/RIF and Smear Method to Detect the Comparison of Sputum Mycobacterium Tuberculosis

CHEN Hai-qiang1，TANG Liu-sheng2
1.Guangxi Yulin City Tuberculosis Control,Yulin，Guangxi Province,537006 China;2.Guangxi Longtan Hospital Central Laboratory,Liuzhou,Guangxi Province,545005 China

ObjectiveExplore the sputum which MTB/RIF and smear method the results of the detection of mycobacterium tuberculosis and conform to the degree between the two.Methods103 cases of clinical diagnosis for tuberculosis sputum specimens which MTB/RIF and smear method detection,and the results were compared.Results103sputum of two kinds of methods to detect mycobacterium tuberculosis a total of 72 cases with positive,positive rate was 69.9%,the method of smear positive cases61ositive rate was 63.1%,which MTB positive 61 RIF method,positive rate is 59.2%;Two methods are positive for 52ses,12cases which MTB/RIF negatie smear method is positive,there are 9 cases of smear positive negative which MTB/RIF method.The two comparison,there was no significant difference（P＞0.05).Test positive for 61 cases which MTB/RIF method of rifampin resistance in 16 cases,resistant rate of 26.2%.ConclusionFlow method to detect mycobacterium tuberculosis results are basically identical,the two together can improve the detection positive rate.

Method of MTB/RIF；Smear method；Mycobacterium tuberculosisrifampicin；Drug resistance；Sputum

R4

A

1674-0742（2015）05（a）－0186-03

2015-02-05）

影響因子

陳海強(qiáng)（1970-），男，廣西玉林人，本科，主管技師，主要從事結(jié)核病防治工作。

影響因子（Impact factor，IF）是美國科學(xué)情報(bào)研究所（ISI）的期刊引證報(bào)告（JCR）中的一項(xiàng)數(shù)據(jù)，指的是某一期刊的文章在特定年份或時(shí)期被引用的頻率，是衡量學(xué)術(shù)期刊影響力的一個(gè)重要指標(biāo)。由美國科學(xué)情報(bào)研究所創(chuàng)始人尤金·加菲得（英語：Eugene Garfield）在1960年創(chuàng)立，其后為文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)的發(fā)展帶來了一系列重大革新。影響因子即某期刊前兩年發(fā)表（S,T）的論文在統(tǒng)計(jì)當(dāng)年（U）的被引用總次數(shù)X（前兩年總被引次數(shù)）除以該期刊在前兩年內(nèi)發(fā)表的論文總數(shù)Y（前兩年總發(fā)文量）。這是一個(gè)國際上通行的期刊評(píng)價(jià)指標(biāo)。