復方中藥對免疫抑制小鼠的免疫功能的影響研究

代永霞，馬記平，高青

鄭州澍青醫(yī)學高等專科學校，河南鄭州450064

復方中藥對免疫抑制小鼠的免疫功能的影響研究

代永霞，馬記平，高青

鄭州澍青醫(yī)學高等?？茖W校，河南鄭州450064

目的 是探索復方中藥（黃芪、當歸和炙甘草）對免疫功能的影響與作用。方法選擇小鼠50只，隨機分為5組。按照復方中藥的給藥劑量依次分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、對照組、模型對照組。然后環(huán)磷酰胺抑制小鼠免疫功能制作免疫抑制模型，對實驗及對照組小鼠給藥，觀察各組小鼠用藥后的小鼠IgG、T淋巴細胞亞群CD4+和CD8+的測定、腹腔巨噬細胞吞噬能力的指數。結果對照組和中藥組相比小鼠IgG、T淋巴細胞亞群CD4+和CD8+、腹腔巨噬細胞吞噬能力的指數差異有統計學意義（P＜0.01）。結論實驗未能證實復方中藥可以促進特異性細胞和體液免疫功能，但在復方中藥的劑量范圍使用下對非特異性和體液免疫具有顯著促進作用。

小鼠；免疫促進；復方中藥

近幾年來免疫學在現代醫(yī)學中發(fā)展較為迅速，然而能夠有效地提高免疫功能的藥物卻較少，在處方研究中利用扶正祛邪的治療理念在臨床治療中取得了較理想的效果。該實驗從細胞分子學水平出發(fā)，研究復方中藥在免疫功能上表現出的影響效果，從而為免疫學的中藥遴選奠定一定的理論與實踐支持。

根據中醫(yī)中的理論與藥理研究可知：西洋參的主要活性成分為皂苷類、多糖類、氨基酸等，這些成分對補體、巨噬細胞、T、B淋巴細胞具有激活的影響作用。補體C3是補體激活的三個級聯的關鍵組成部分，故將其作為觀察實驗補體系統水平的指標。該研究的起止時間為2014年6月25日—9月30日。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 復方中藥制備該實驗的復方中藥主要由西洋參、黃芪、枸杞、當歸等中藥成分組成。按照復方中藥的制定比例，并將原藥液濃縮成400 mL，滅菌后保存在4℃冰箱內。

1.1.2 實驗動物6 wk齡昆明系小白鼠50只，雌雄各半，體重（18±22）g。

1.1.3 實驗試劑與儀器免疫抑制劑環(huán)磷酰胺用生理鹽水將注射用環(huán)磷酰胺（0.2 g）配成濃度為3 g/mL；AL204型電子天平；臺式離心機；搖擺式高速粉碎機HK-04B/06B；光學顯微鏡；分選式流式細胞儀-Aira；電熱恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 實驗方法

將50只小鼠隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。在環(huán)磷酰胺造模后第2天分別進行小鼠復方中藥應用試驗，小鼠的灌量均為0.04 mL/g，其中高、中、低、對照組、模型對照組的復方中藥給藥劑量分別為0.04 mL/g、配置參半的0.02 mL/g蒸餾水和0.02 mL/g中藥、0.01 mL/g中藥和0.03 mL/g的蒸餾水、蒸餾水0.04 mL/g、蒸餾水0.04 mL/g，對小鼠喂服14 d。

試驗的15 d，于小鼠眼球處取血，經過離心將血清與紅細胞分離，分離后的血清嚴格按照檢測方法測量小鼠血清IgG和補體C3水平。在無污染條件下，取小鼠脾臟進行研磨，經篩網過濾后放入ACK瓶皿中，經細胞液裂解后過濾于離心管中離心。

1.3 統計方法

2 結果

對實驗小組進行數據搜集與統計見表1所示：模型對照組的IgG含量明顯高于正常對照組(P=0.002＜0.01),而C3呈明顯降低(正態(tài)分布方差不齊t檢驗，P=0.011＜0.05)，與低劑量中藥組相比而言差異有統計學意義(P=0.001＜0.01)，這也說明了低劑量中藥組可以有效地抑制小鼠抗體IgG的濃度，且顯著地增加免疫抑制小鼠補體C3濃度。

表1 抗體、補體及B淋巴細胞表面抗原CD19結果比較

表1 抗體、補體及B淋巴細胞表面抗原CD19結果比較

注:與模型對照組比較，*P＜0.05,#P＜0.01。

組別IgG(g/L)C3(g/L)CD19(%)正常對照組(n=10)模型對照組(n=10)高劑量中藥組(n=10)中劑量中藥組(n=10)低劑量中藥組(n=10)（125.79±42.02）#184.98±31.02 170.14±35.99 160.20±30.12（176.79±44.86）#（363.0±166.2）*192.0±56.67 186.9±50.4 235.98±62.05（293.78±60.98）#（41.21±10.0）*29.82±6.84 33.21±8.23 32.32±12.91 30.25±12.04

表2 T淋巴細胞表面抗原結果比較

表2 T淋巴細胞表面抗原結果比較

注:與模型對照組比較，*P＜0.05。

組別CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+正常對照組(n=10)模型對照組(n=10)高劑量中藥組(n=10)中劑量中藥組(n=10)低劑量中藥組(n=10) (38.16±8.02)*26.97±8.35 34.08±6.01 32.30±11.05 26.88±7.96 (34.21±10.13)*22.05±7.91 16.96±7.0 21.70±12.29 21.29±8.24 (32.50±4.38)*19.74±7.36 26.06±10.97 21.35±7.41 16.01±6.32 1.02±0.30 1.18±0.39 1.12±1.22 1.61±2.05 1.59±0.86

由表2所示CD3+,CD4+,CDB+,模型組的含量低于正常對照，(P＜0.05),CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+模型對照組與高、中、低3組劑量組相比也較低，差異無統計學意義(P＞0.05)，這說明了實驗中復方中藥對特異性T淋巴細胞和B淋巴細胞免疫無促進作用。由實驗后的補體C3、CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+含量均有所降低，且差異具有統計學意義，這也正表明了實驗建立了成功的免疫抑制動物模型。

3 討論

該實驗觀察復方中藥各劑量組與模型組的對比過程中發(fā)現C3、CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+均差異無統計學意義（P＞0.05），因此未能證實其對特異性細胞免疫具有促進作用。機體的免疫功能主要與T淋巴細胞、B淋巴細胞、補體（C3、CD3+等）、免疫細胞因子等相關。由表1所知低劑量中藥組明顯高于對照組中補體C3的量(P=0.001＜0.01)，這就表明低劑量中藥組顯著地提升了C3的濃度，有效地促進免疫抑制小鼠補體系統的功能。另外，組別之間的IgG濃度由高到低依次與對照組相比，差異有統計學意義（P=0.001），這也充分說明了低劑量中藥可以有效地降低免疫抑制小鼠的IgG濃度,結果表明：復方中藥可以增加正常小鼠和免疫抑制小鼠IgM的含量和吞噬細胞的吞噬功能，且存在顯著性差異，對免疫抑制組小鼠的增強作用更強。這與劉廷[1]的研究結果相似，說明復方中藥可以提升吞噬細胞能力，可以有效地提高非特異性細胞免疫力。

綜上所述，復方中藥(由西洋參、黃茂、構祀、當歸等多味藥組成)在一定劑量范圍內，雖然還未能證實對機體特異性細胞免疫和體液免疫有促進作用，但對非特異性細胞免疫及體液免疫有顯著促進作用。從而為進一步開展復方中藥其保健作用及合理開發(fā)利用提供理論依據。有關復方中藥促進非特異性細胞免疫和體液免疫的作用機理,有待于進一步研究。

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Effect on Immune Function of Mice Immune Suppression of Compound Prescription of Traditional Chinese Medicine

DAI Yong-xia，MA Ji-ping，GAO Qing
Zhengzhou Shuqing Medical College，Zhengzhou，Henan Province,450064 China

The purpose of this study is explore the compound Chinese traditional medicine(Huang Qi,angelica and licorice)influence and effect on immune function of the compound traditional Chinese medicine.Methods:50 mice,were randomly divided into 5 groups.According to the compound traditional Chinese medicine dosage is divided into high dose group,middle dose group, low dose group,control group,model control group.Then cyclophosphamide immunosuppressed mice produce immunosuppression model,the experimental and the control group mice,the mice were observed after administration of mouse IgG,T lymphocyte subsets CD4+and CD8+determination,celiac macrophage phagocytic ability index.The statistical results from the data analysis:the control group and Chinese medicine group than in the phagocytosis of mouse IgG,T lymphocyte subsets,CD4+and CD8+in peritoneal macrophages index has significant difference(P＜0.01).Conclusion:the experiment failed to confirm that the compound Chinese medicine can promote specific cellular and humoral immune function of specific,but has significant promoting effect on nonspecific and humoral immunity in the dose range of compound Chinese medicine use.

Mice；Immune promoting；Compound traditional Chinese Medicine

R28

A

1674-0742（2015）05（a）－0164-02

2015-02-10）

代永霞（1982.1-），女，河南新鄭人，中藥學碩士，研究生，講師，現從事基礎醫(yī)學的教學和科學研究工作。