表皮生長(zhǎng)因子測(cè)定在判斷帕金森病認(rèn)知障礙中的價(jià)值

李普蕾 惲文偉 梅雨晴 岑 嶺 馮益萍 楊靜婷（通訊作者）南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州市第二人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 常州 213003

表皮生長(zhǎng)因子測(cè)定在判斷帕金森病認(rèn)知障礙中的價(jià)值

李普蕾 惲文偉 梅雨晴 岑 嶺 馮益萍 楊靜婷（通訊作者）
南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州市第二人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 常州 213003

目的 探討帕金森病患者血漿EGF水平及事件相關(guān)電位P300電位測(cè)定波幅和潛伏期改變與PD認(rèn)知障礙間的關(guān)系，為臨床醫(yī)生診斷病情，判斷預(yù)后提供更準(zhǔn)確有效的參考依據(jù)。方法 選擇我院2010—2012年門診及住院的原發(fā)性PD患者50例和健康體檢者50例為研究對(duì)象，應(yīng)用蒙特利爾認(rèn)知評(píng)價(jià)量表（MoCA）進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)估，分為PD組認(rèn)知損害28例，PD組認(rèn)知正常22例及對(duì)照組認(rèn)知正常24例，認(rèn)知損害26例，應(yīng)用蒙特利爾認(rèn)知評(píng)價(jià)量表（MoCA）對(duì)4組患者進(jìn)行評(píng)分，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)量血漿EGF濃度，采用短音刺激測(cè)定P300電位的潛伏期及波幅，分析并比較三者間的相互關(guān)系。結(jié)果 在MoCA各項(xiàng)評(píng)分方面，除定向不存在差異（P＞0.05），PD組定向障礙與PD組正常間其余各項(xiàng)均存在差異（P＜0.05）；對(duì)照組定向障礙與正常組正常之間存在差異（P＜0.05）；在EGF濃度方面，PD組定向障礙與PD組正常間存在顯著差異（P＜0.01），對(duì)照組定向障礙與正常組正常間存在顯著差異（P＜0.01）；在P300電位方面，PD組定向障礙與PD組正常間存在顯著差異（P＜0.01），對(duì)照組定向障礙與正常組正常間存在顯著差異（P＜0.01）；患者M(jìn)oCA總分、血漿EGF濃度及P300電位潛伏期及波幅兩兩行Pearson相關(guān)分析，均存在相關(guān)性（P＜0.05）。結(jié)論 PD患者血清表皮生長(zhǎng)因子（EGF）濃度與PD認(rèn)知功能障礙存在密切關(guān)系，低濃度的EGF對(duì)判斷帕金森病認(rèn)知障礙及預(yù)后有預(yù)測(cè)價(jià)值。

帕金森病；蒙特利爾認(rèn)知評(píng)價(jià)量表；血漿EGF；事件相關(guān)電位；P300電位

帕金森病（PD）是以靜止性震顫、強(qiáng)直、動(dòng)作緩慢和姿勢(shì)協(xié)調(diào)性障礙等運(yùn)動(dòng)癥狀為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)慢性變性疾病，在確診初期即有20％會(huì)出現(xiàn)輕度認(rèn)知障礙（MCI），20％～80％會(huì)在以后發(fā)生癡呆（PDD）［1］。MoCA評(píng)定認(rèn)知障礙受到多因素影響，有時(shí)并不能真實(shí)反映患者的認(rèn)知功能障礙［2-3］。因此，加強(qiáng)對(duì)PD相關(guān)的認(rèn)知障礙的早期判斷和適當(dāng)干預(yù)，對(duì)PD患者的治療和改善遠(yuǎn)期生活質(zhì)量有重要意義。研究顯示［4］，在模擬PD的小鼠中也發(fā)現(xiàn)EGF濃度低于正常水平的現(xiàn)象，給予小鼠EGF將阻止多巴胺能神經(jīng)元變性，因此說明EGF濃度水平與帕金森病認(rèn)知障礙間存在密切關(guān)系。本次課題旨在探討帕金森病患者血漿EGF水平及事件相關(guān)電位P300電位測(cè)定的波幅和潛伏期改變與PD認(rèn)知障礙間的關(guān)系，結(jié)果如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選擇我院2010—2012年門診及住院的原發(fā)性PD患者50例，所有患者診斷均符合英國(guó)腦庫PD診斷標(biāo)準(zhǔn)和2006年制定的PD診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)頭顱CT或MRI檢查，排除腦血管病、腦炎、外傷、藥物所致的帕金森綜合征、帕金森疊加綜合征、惡性腫瘤，排除視力、聽力、肢體嚴(yán)重功能障礙，不能用語言交流及精神疾病患者，另選取健康體檢者50例為研究對(duì)象，應(yīng)用蒙特利爾認(rèn)知評(píng)價(jià)量表（MoCA）進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)估，分為PD組認(rèn)知損害28例，PD組認(rèn)知正常22例及對(duì)照組認(rèn)知正常24例，認(rèn)知損害26例，4組間性別構(gòu)成和年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方案

1.2.1 儀器及設(shè)備：采用BIO-RAD 680酶標(biāo)儀，上海醫(yī)療器械有限公司的80-2臺(tái)式低速離心機(jī)（最高轉(zhuǎn)速4 000r/min）、上海一恒科學(xué)儀器有限公司的隔水式恒溫培養(yǎng)箱及keypoint.net肌電-誘發(fā)電位儀進(jìn)行測(cè)試。

1.2.2 試劑：采用北京四正柏生物科技有限公司生產(chǎn)的人EGF定量EIA試劑盒。

1.3 操作步驟

1.3.1 MoCA評(píng)分：應(yīng)用蒙特利爾認(rèn)知評(píng)價(jià)量表（MoCA）對(duì)4組患者進(jìn)行評(píng)分：包括視空間執(zhí)行能力、命名、記憶、注意、語言流暢、抽象思維、延遲記憶、定向力等八個(gè)方面，共計(jì)30分；受試者受教育年限≤12a者，在MoCA測(cè)試結(jié)果上加1分以矯正文化程度的偏倚；MoCA評(píng)分在26分以下屬于認(rèn)知障礙。

1.3.2 EGF濃度測(cè)量：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)量血漿EGF濃度：抽取清晨空腹靜脈血3mL，離心15min，取血清-20℃儲(chǔ)存待測(cè)。

1.3.3 采用短音刺激測(cè)定P300電位的潛伏期及波幅：檢查方法：應(yīng)用丹麥產(chǎn)keypoint.net肌電-誘發(fā)電位儀，采用聽覺Oddball程序測(cè)定P300。靶刺激發(fā)聲頻率2kHz，隨機(jī)出現(xiàn)，占20％；非靶刺激發(fā)聲頻率1kHz，占80％；刺激強(qiáng)度80dB，靈敏度為10uv/cm，帶通范圍1～30Hz，靶刺激疊加30次。受試者清醒，取舒適坐位，囑其微閉雙眼，集中注意力。要求受檢者在測(cè)試中出現(xiàn)靶刺激時(shí)，迅速按鍵。每位受檢者均重復(fù)測(cè)兩輪，取其平均值。記錄P300的潛伏期（PL）和波幅（Amp），記錄電極置于Cz點(diǎn)，參考電極置于一側(cè)耳垂，前額接地，電極與皮膚間阻抗＜5Ω。判斷標(biāo)準(zhǔn)：PL、Amp取正常對(duì)照組的均值±2.5倍標(biāo)準(zhǔn)差（±2.5s）為正常范圍。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（％）表示，采用χ2檢驗(yàn)，血漿EGF水平、P300測(cè)定電位的潛伏期及波幅變化與MoCA評(píng)分相互關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組患者M(jìn)oCA評(píng)分比較 在MoCA各項(xiàng)評(píng)分方面，除定向不存在差異（P＞0.05），PD組定向障礙與PD組正常間其余各項(xiàng)均存在差異（P均＜0.05）；對(duì)照組定向障礙與正常組正常之間存在差異（P均＜0.05），PD組定向障礙與對(duì)照組定向障礙無差異（P＞0.05），PD組正常與對(duì)照組正常無差異（P＞0.05）。見表1。

表1 4組患者M(jìn)oCA各分檢測(cè)狀況分析（±s，分）

表1 4組患者M(jìn)oCA各分檢測(cè)狀況分析（±s，分）

總分PD組定向障礙28 2.43±1.63 2.62±0.68 4.93±1.12 2.46±0.86 1組別 n 視空間和執(zhí)行 命名 注意力 語言 抽象 延遲回憶 定向 MoCA .09±0.84 1.67±1.48 5.72±0.97 20.92±4.02 PD組正常 22 4.56±0.81 2.94±0.28 5.68±0.66 2.97±0.29 1.86±0.43 3.75±1.01 5.98±0.13 27.74±1.35對(duì)照組定向障礙26 2.20±1.57 2.51±0.70 3.98±1.45 1.76±1.05 0.97±0.78 2.01±1.48 5.18±1.51 18.61±4.57對(duì)照組正常 24 4.53±0.83 2.98±0.25 5.86±0.49 2.94±0.32 1.79±0.45 4.21±0.95 5.86±0.15 28.17±1.39

2.2 4組患者血漿EGF濃度測(cè)定及P300電位的潛伏期及波幅狀況 在EGF濃度方面，PD組定向障礙與PD組正常間存在顯著差異（t＝14.47、P＝0.00＜0.01），對(duì)照組定向障礙與正常組正常間存在顯著差異（t＝12.22，P＝0.00＜0.01），PD組定向障礙與對(duì)照組定向障礙存在顯著差異（t＝2.938，P＝0.004＜0.01），PD組正常與對(duì)照組正常無差異（P＞0.05）；在P300電位方面，PD組定向障礙與PD組正常間存在顯著差異（t＝5.204，6.404，P＝0.00＜0.01），對(duì)照組定向障礙與正常組正常間存在顯著差異（t＝3.302，10.19，P ＝0.00＜0.01），PD組定向障礙與對(duì)照組定向障礙存在顯著差異（t＝3.638，2.55，P＜0.05），PD組正常與對(duì)照組正常間波幅上存在顯著差異（t＝5.270，P＜0.01），潛伏期無差異（P ＞0.05）。見表2。

表2 4組患者血漿EGF濃度測(cè)定及P300電位的潛伏期及波幅狀況（±s）

表2 4組患者血漿EGF濃度測(cè)定及P300電位的潛伏期及波幅狀況（±s）

組別 n 血漿EGF（μg/L）電位潛伏期（ms）波幅（uV）P300 PD組定向障礙28 0.52±0.07 389.47±32.53 6.12±1.27 PD組正常 22 0.89±0.11 342.73±30.18 8.94±1.84對(duì)照組定向障礙26 0.58±0.08 357.69±31.57 7.03±1.35對(duì)照組正常24 0.93±0.12 328.94±29.84 11.96±2.03

2.3 PD患者M(jìn)oCA總分、血漿EGF濃度及P300電位潛伏期及波幅相關(guān)關(guān)系分析 對(duì)MoCA總分、血漿EGF濃度及P300電位潛伏期及波幅間行Pearson相關(guān)分析，MoCA總分與血漿EGF濃度存在正相關(guān)（r＝0.486，P＝0.026＜0.05），MoCA總分與P300電位潛伏期存在負(fù)相關(guān)（r＝-0.621，P ＝0.007＜0.01），MoCA總分與P300電位波幅存在正相關(guān)（r＝0.533，P＝0.010＜0.05），血漿EGF濃度與P300電位潛伏期存在負(fù)相關(guān)（r＝-0.512，P＝0.012＜0.05），血漿EGF濃度與P300電位波幅存在正相關(guān)（r＝-0.607，P＝0.008＜0.01）。見表3。

表3 PD患者M(jìn)oCA總分、血漿EGF濃度及P300電位潛伏期及波幅相關(guān)關(guān)系分析

3 討論

帕金森?。≒D）是以靜止性震顫、強(qiáng)直、動(dòng)作緩慢和姿勢(shì)協(xié)調(diào)性障礙等運(yùn)動(dòng)癥狀為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)慢性變性疾?。?］。隨著對(duì)PD認(rèn)識(shí)的加深，PD患者的非運(yùn)動(dòng)癥狀，包括精神癥狀、自主神經(jīng)功能異常，特別是認(rèn)知障礙日漸受到重視。PD患者在確診初期即有20％會(huì)出現(xiàn)輕度認(rèn)知障礙（MCI），20％～80％會(huì)在以后發(fā)生癡呆（PDD）。PD相關(guān)的認(rèn)知障礙和癡呆增加了患者的致殘率和病死率，也給家人和社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)。因此，加強(qiáng)對(duì)PD相關(guān)認(rèn)知障礙的早期判斷和適當(dāng)干預(yù)，對(duì)PD患者的治療和改善遠(yuǎn)期生活質(zhì)量有重要意義。PD患者認(rèn)知功能障礙主要表現(xiàn)在視空間功能、執(zhí)行功能、記憶力、注意力等方面［6］。研究表明，氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙、泛素蛋白酶體系統(tǒng)功能障礙、炎性反應(yīng)、興奮性氨基酸毒性和凋亡均參與PD的發(fā)病過程。PD主要病理特征是黑質(zhì)多巴胺等神經(jīng)元的變性壞死和殘存神經(jīng)元內(nèi)路易小體形成。文獻(xiàn)報(bào)道［7］，PD患者存在額葉功能受損，認(rèn)為PD患者出現(xiàn)認(rèn)知障礙和癡呆可能與額葉紋狀體環(huán)路破壞有關(guān)。多巴胺能、非多巴胺能系統(tǒng)（包括乙酰膽堿、去甲腎上腺素、5-羥色胺等）均與PD認(rèn)知障礙有關(guān)。

目前，對(duì)PD患者認(rèn)知功能評(píng)定主要依賴于神經(jīng)心理學(xué)測(cè)試，如簡(jiǎn)易智能狀態(tài)檢查量表（MMSE）及蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表（MoCA）等，最近多項(xiàng)研究表明MoCA作為一種新的認(rèn)知篩查工具較MMSE更適合用于PD患者早期認(rèn)知障礙的篩查［8］。但由于量表的評(píng)價(jià)受多方面因素（如文化程度、年齡、抑郁情緒、藥物不良反應(yīng)等）的影響，所以有時(shí)并不能真實(shí)反映患者的認(rèn)知功能障礙。表皮生長(zhǎng)因子（EGF）為一種低分子量的多肽類生長(zhǎng)因子，是一種強(qiáng)有力的細(xì)胞分裂促進(jìn)因子，存在于人體組織和細(xì)胞外液，與胚胎發(fā)生與生長(zhǎng)、組織修復(fù)和再生以及腫瘤發(fā)生等均有密切關(guān)系［9］。EGF可促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)的生長(zhǎng)發(fā)育，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，并參與神經(jīng)元的氧化性損傷。EFG對(duì)中腦多巴胺神經(jīng)元產(chǎn)生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)活性，測(cè)量PD患者死后腦中EGF含量［10］，發(fā)現(xiàn)患者額前皮質(zhì)和新紋狀體中EGF和酪氨酸羥化酶減少，且EGF受體的表達(dá)在前腦區(qū)也明顯下調(diào)。在模擬PD的小鼠中也發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象，給予小鼠EGF將阻止多巴胺能神經(jīng)元變性，從而揭示了EGF神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)活性是由中腦多巴胺神經(jīng)元傳入信號(hào)維持的，而在PD患者中EGF的營(yíng)養(yǎng)活性受損。

綜上所述，PD患者血清表皮生長(zhǎng)因子（EGF）濃度與PD認(rèn)知功能障礙存在密切關(guān)系，低濃度的EGF對(duì)判斷帕金森病認(rèn)知障礙及預(yù)后有預(yù)測(cè)價(jià)值。

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（收稿2015-02-12）

R742.5

A

1673-5110（2015）21-0041-03

獲2012年常州市科技局立項(xiàng)（編號(hào)CY 20120011）及2012年南京醫(yī)科大學(xué)科技發(fā)展基金重點(diǎn)項(xiàng)目立項(xiàng)（編號(hào)2012NJMU130）