殺螺胺乙醇胺鹽原藥的反相高效液相色譜測(cè)定

曹 佳，宋思思，李曉剛，劉一平，楊雪清

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410128；2.湖南省生物農(nóng)藥與制劑加工工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙410128；3.湖南省農(nóng)藥檢定所，湖南 長(zhǎng)沙410005；4.湖南京西祥隆化工有限公司，湖南 株洲412005）

殺螺胺乙醇胺鹽原藥的反相高效液相色譜測(cè)定

曹 佳1,2，宋思思1,2，李曉剛1,2，劉一平3，楊雪清4

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410128；2.湖南省生物農(nóng)藥與制劑加工工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙410128；3.湖南省農(nóng)藥檢定所，湖南 長(zhǎng)沙410005；4.湖南京西祥隆化工有限公司，湖南 株洲412005）

利用反相高效液相色譜法研究了兩種色譜柱，3種流動(dòng)相對(duì)殺螺胺乙醇胺鹽分離效果的影響，并對(duì)測(cè)定方法進(jìn)行比較。結(jié)果表明，以S purs i lTMC18為色譜柱，流動(dòng)相為甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1（V/V）時(shí)，測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.185，變異系數(shù)為0.240%，平均回收率為97.12%，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9。這說(shuō)明在該條件下殺螺胺乙醇胺鹽的分離效果較好，同時(shí)該方法簡(jiǎn)單快捷，可作為分析殺螺胺乙醇胺鹽原藥的分析方法。

殺螺胺乙醇胺鹽；氯硝柳胺；高效液相色譜法；三乙胺

殺螺胺乙醇胺鹽又名氯硝柳胺乙醇胺鹽，屬酰胺類(lèi)殺軟體動(dòng)物劑，具有胃毒作用，對(duì)螺卵、血吸蟲(chóng)尾蚴等有較強(qiáng)的殺滅作用，是WHO推薦使用的滅螺藥[1-2]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)殺螺胺乙醇胺鹽的加工應(yīng)用[3]、殺螺活性[4]、殘留[5-6]及環(huán)境毒理[7]進(jìn)行了大量研究報(bào)道。目前，國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的殺螺胺乙醇胺鹽分析方法有電位滴定法[8]、分光光度計(jì)法[9]和高效液相色譜法[10-12]。但是，電位滴定法和分光光度計(jì)法的分析時(shí)間較長(zhǎng)、雜質(zhì)分離效果不佳。高效液相色譜法是用于檢測(cè)殺螺胺乙醇胺鹽的常用方法，在實(shí)際檢測(cè)中，相同的色譜條件下，不同廠家生產(chǎn)的色譜柱對(duì)殺螺胺乙醇胺鹽的分離效果有差異，有的甚至達(dá)不到分離要求，而在研究制定高效液相色譜方法時(shí)，選擇適宜的流動(dòng)相也很重要。因此，試驗(yàn)擬采用反相高效液相色譜法，篩選不同的色譜柱及流動(dòng)相，以期建立較為完善的殺螺胺乙醇胺鹽原藥測(cè)定方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試儀器設(shè)備主要有島津LC-20AT高效液相色譜儀，配備LC-20AT泵、20μL定量環(huán)以及紫外檢測(cè)器和LC-solution色譜工作站；色譜柱：SpursilTMC18（250mm×4.6mm，5μm，北京迪科馬科技有限公司）、C18-WP（250mm×4.6 mm，5μm，德國(guó)CNW科技公司）；超聲波清洗器；濾膜孔徑0.45μm的過(guò)濾器。試驗(yàn)主要試劑有甲醇（色譜純）、超純水、三乙胺（分析純），殺螺胺標(biāo)樣（已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99%，某公司），殺螺胺原藥（湖南京西祥隆化工有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣的配制 （1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。準(zhǔn)確稱(chēng)取殺螺胺標(biāo)準(zhǔn)品0.020 0 g于50ML容量瓶中，加入適量甲醇試劑溶解，置于超聲浴槽中約10 Min，取出降至室溫后，用甲醇補(bǔ)至刻度線搖勻，再用0.45μm濾膜過(guò)濾后備用。（2）試樣配制。準(zhǔn)確稱(chēng)取殺螺胺乙醇胺鹽0.020 0 g，操作同（1）。

1.2.2 流動(dòng)相的影響 以SpursilTMC18為色譜柱，分離條件為柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，進(jìn)樣量10 μL，當(dāng)流動(dòng)相分別為甲醇︰水=90︰10（V︰V，下同）、甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1、甲醇︰水︰三乙胺=54︰46︰0.115時(shí)，對(duì)流動(dòng)相的影響進(jìn)行分析。1.2.3 色譜柱的影響 在流動(dòng)相為甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1、柱溫為25℃、檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm、流速1.0ML/Min、進(jìn)樣量10μL時(shí)，分別采用以SpursilTMC18和Athena C18-WP兩種色譜柱，對(duì)色譜柱影響進(jìn)行分析。

1.2.4 測(cè)定 在1.2.2和1.2.3下，待儀器基線穩(wěn)定后連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至相鄰兩針的峰面積變化小于1.5%，按標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.2.5 對(duì)色譜條件的檢測(cè) （1）線性關(guān)系檢測(cè)。稱(chēng)取一定量的殺螺胺標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制一定質(zhì)量濃度的殺螺胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用梯度稀釋法配制成質(zhì)量濃度分別為0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，按條件進(jìn)行反相高效液相色譜測(cè)定。以殺螺胺標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度（x，mg/L）對(duì)其所對(duì)應(yīng)的色譜峰面積（y）做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到相應(yīng)的線性關(guān)系曲線。（2）精密度檢測(cè)。對(duì)同一樣品分別進(jìn)行5次重復(fù)測(cè)定，考查樣品回收率的標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)。（3）準(zhǔn)確度檢測(cè)。稱(chēng)取5份已知準(zhǔn)確含量的殺螺胺乙醇胺鹽試樣，分別加入一定量的殺螺胺標(biāo)準(zhǔn)品，按條件進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，考查平均回收率。

1.2.6 計(jì)算 將測(cè)得的兩針試樣溶液和試樣溶液前后兩針標(biāo)準(zhǔn)溶液中的殺螺胺的峰面積分別進(jìn)行平均。以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示的殺螺胺乙醇胺鹽的含量X按公式（1）計(jì)算：

式中：A1表示標(biāo)準(zhǔn)溶液中殺螺胺峰面積的平均值；A2表示試樣溶液中殺螺胺乙醇胺鹽峰面積的平均值；m1表示殺螺胺標(biāo)樣的質(zhì)量（g）；P表示標(biāo)準(zhǔn)品中殺螺胺的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)（%）；1.186 8為殺螺胺換算成殺螺胺乙醇胺鹽系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相影響

由圖1和圖2可知，以SpursilTMC18為色譜柱，當(dāng)分別以甲醇︰水=90︰10和甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1作為流動(dòng)相時(shí)，殺螺胺乙醇胺鹽的保留時(shí)間分別為4.988Min和1.785Min，甲醇與水的比例一樣，但是加入三乙胺后，保留時(shí)間提前，并且避免了前沿峰。Huber[13]提出，三乙胺會(huì)和固定相上殘留的硅羥基結(jié)合，還會(huì)與C18發(fā)生疏水作用，可減弱溶質(zhì)與固定相的相互作用，促使溶質(zhì)更快地從固定相上被流動(dòng)相洗脫。由于三乙胺的這種有機(jī)調(diào)節(jié)劑作用，在液相色譜分析中將其加入到流動(dòng)相中，在減少樣品中堿性組分前沿的同時(shí)，對(duì)峰形和保留時(shí)間也有一定影響。

圖1 色譜柱SpursilTMC18

圖2 色譜柱SpursilTMC18（流動(dòng)相為甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1）

以甲醇︰水︰三乙胺=54︰46︰0.115為流動(dòng)相時(shí)，從圖3中可以看出，樣品中的成分沒(méi)有完全分離。這與伍一紅[5]在殺螺胺乙醇胺鹽在水稻和稻田中的殘留及消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)的報(bào)道不一致。因此，在具體操作中，要使物質(zhì)得到較好地分離，使峰形、峰純度、分離度等達(dá)到要求，需要適當(dāng)調(diào)整流動(dòng)相比例。

2.2 色譜柱影響

圖3 色譜柱SpursilTMC18（流動(dòng)相為甲醇︰水︰三乙胺=54︰46︰0.115）

當(dāng)流動(dòng)相及分離條件相同時(shí)，分別以SpursilTMC18和Athena C18-WP作為色譜柱，從圖2和圖4中可以看出，樣品出峰的時(shí)間分別為1.785Min和2.167 Min，峰形也都尖銳、對(duì)稱(chēng)。兩根色譜柱都是高純度硅膠基質(zhì)液相色譜柱，但對(duì)殺螺胺乙醇胺鹽的分離效果卻不同，這可能是因?yàn)楣潭ㄏ嗟闹苽渲貜?fù)性偏差，或不同廠家生產(chǎn)的色譜柱在填料的粒度分布、原材料、硅膠基質(zhì)表面積等方面均有差異，從而引起保留值的變化。色譜柱表面積增加，則有機(jī)相的量與保留值均有所提高，而且硅膠基質(zhì)表面的硅羥基濃度差異，也能引起保留值及分離選擇性的不同[14-15]。

2.3 色譜條件的檢測(cè)

2.3.1 線性關(guān)系 由表1可知，色譜柱為SpursilTMC18，流動(dòng)相為甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1時(shí)，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9，高于另外兩種方法，線性關(guān)系最好。

圖4 色譜柱Athena C18-WP（流動(dòng)相為甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1）

2.3.2 精密度 由表 2可知，色譜柱為SpursilTMC18，流動(dòng)相為甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.185，變異系數(shù)為0.240，均低于另外兩種方法，精密度最高。

2.3.3 準(zhǔn)確度 由表3可知，色譜柱SpursilTMC18、流動(dòng)相甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1時(shí)，平均回收率高于另外兩種方法，準(zhǔn)確度最高。

表1 3種色譜條件線性關(guān)系的比較

表2 3種色譜條件精密度的比較

表3 3種色譜條件準(zhǔn)確度的比較

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在流動(dòng)相中添加適當(dāng)?shù)母男詣┤野?，使保留時(shí)間提前，分析時(shí)間縮短，同時(shí)避免了前沿峰，分離效果好。因此，甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1的流動(dòng)相分離殺螺胺乙醇胺鹽的效果更好。

使用不同廠家生產(chǎn)的色譜柱對(duì)殺螺胺乙醇胺鹽的檢測(cè)效果有差別，這與色譜柱生產(chǎn)廠家填料等因素有關(guān)。因此，在檢測(cè)分析殺螺胺乙醇胺鹽時(shí)，色譜柱的選擇也需要特別注意，合適的色譜柱可以得到更可信的結(jié)果。研究結(jié)果表明，色譜柱SpursilTMC18比色譜柱Athena C18-WP分離殺螺胺乙醇胺鹽的效果要好。

綜上所述，色譜柱為SpursilTMC18，流動(dòng)相為甲醇︰水︰三乙胺=90︰10︰0.1時(shí)，殺螺胺乙醇胺鹽的分離效果好，準(zhǔn)確度較高，可以作為分析殺螺胺乙醇胺鹽原藥的定量分析方法。

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DeterMination of NiclosaMide EthanolaMine Salt by RP-HPLC

CAO Jia1,2，SONG Si-si1,2，LIXiao-gang1,2，LIU Yi-ping3，YANG Xue-qing4
（1.College of Plant Protection,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,PRC;2.Hunan Provincial Engineering&Technology Research Center for Bio-pesticide and Formulating Processing,Changsha 410128,PRC;3.Hunan Agrochemicals Control Institute, Changsha 410005,PRC;4.Hunan Jingxi Lung Cheung Chemical Industry Co.,Ltd,Zhuzhou 412005,PRC）

In order to analyze the influence of tw o kinds of chromatographic column,three typesofmobile phase on the separating effect of NiclosaMide ethanolaMine salt,RP-HPLC wasused.The results showed thatw hen the chromatographic column was SpursilTMC18,and themobile phase ofmethanol,waterand trimethylaminewas90︰10︰0.1（V/V）,the standard deviation ofmeasured valuewas 0.185, the variable coefficientwas0.240%,the average recovery rate w as 97.12%and the linearly dependent coefficientwas0.999 9.Therefore, we can conclude thatunder this condition the Niclosamide ethanolaMine salt had good separating effect,and themethod can be used to measure theactive compound ofNiclosamideethanolaminesaltbecauseof itssimpleand rapid.

NiclosaMideethanolamine salt;Niclosamide;HPLC;triethylamine

TQ450.7

A

1006-060X（2015）04-0102-03

10.16498/j.cnki.hnnykx.2015.04.032

2015-03-13

湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（13JJ5023）；湖南省高等學(xué)校科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目（11A053）

曹 佳（1990-），女，湖南郴州市人，碩士研究生，主要從事農(nóng)藥殘留分析與環(huán)境行為研究。