發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血液部分免疫指標(biāo)的影響

李旋亮，張 偉2，蘆 剛，李曉峰，張 武，霍 洋

（1.遼寧省盤錦市雙臺(tái)子區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 盤錦 124000；2.遼寧省盤錦市雙臺(tái)子區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 盤錦 124000；3.遼寧省盤錦市雙臺(tái)子區(qū)畜牧獸醫(yī)局，遼寧 盤錦 124000）

發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血液部分免疫指標(biāo)的影響

李旋亮1，張 偉2，蘆 剛1，李曉峰3，張 武1，霍 洋1

（1.遼寧省盤錦市雙臺(tái)子區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 盤錦 124000；2.遼寧省盤錦市雙臺(tái)子區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 盤錦 124000；3.遼寧省盤錦市雙臺(tái)子區(qū)畜牧獸醫(yī)局，遼寧 盤錦 124000）

本試驗(yàn)旨在研究發(fā)酵飼料對斷奶仔豬腸血液部分指標(biāo)的影響。將27頭平均體重6.83 kg的28日齡斷奶仔豬分為3個(gè)組。試驗(yàn)I組（正對照組，含基礎(chǔ)日糧）、試驗(yàn)Ⅱ組（負(fù)對照組，含基礎(chǔ)日糧+20%的過夜水）、試驗(yàn)Ⅲ組（負(fù)對照組，含基礎(chǔ)日糧+菌液+20%過夜水）。試驗(yàn)結(jié)果表明，水拌發(fā)酵組和菌液發(fā)酵組的中期Ⅲ組中IgA的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了30.00%（P＜0.05）、28.13%（P＜0.05）；后期Ⅲ組中IgA的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了24.32%（P＜0.05）、12.20%（P＜0.05）；中期各組間IgG的含量差異顯著（P＜0.05），后期Ⅲ組中IgG的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了27.64%（P＜0.05）、21.37%（P＜0.05）；Ⅰ組和Ⅱ組間差異不顯著（P＞0.05）。中期和后期各組間IgM的含量差異都不顯著（P＞0.05）。在中期Ⅲ組與Ⅰ組的溶菌酶含量差異顯著（P＜0.05），而Ⅲ組和Ⅱ組、Ⅱ組和Ⅰ組差異不顯著（P＞0.05）；在后期，溶菌酶的含量Ⅲ組與Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05），分別比Ⅰ組提高了24.95%（P＜0.05）和23.21%（P＜0.05）。中期各組間SOD的含量差異不顯著（P＞0.05）；后期SOD的含量Ⅲ組分別比Ⅰ組合Ⅱ組提高了53.79%（P＜0.05），25.35%（P＞0.05）；Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）。發(fā)酵飼料可改善斷奶仔豬血液部分免疫指標(biāo)，有助于減少仔豬腹瀉和增強(qiáng)仔豬對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力。

發(fā)酵飼料；溶菌酶；IGA；斷奶仔豬

隨著養(yǎng)豬生產(chǎn)集約化程度的不斷提高，仔豬早期斷奶變得越來越重要。但早期離乳易造成仔豬腸道功能紊亂，各項(xiàng)免疫指標(biāo)下降，因而造成仔豬消化道消化吸收的面積減少，進(jìn)而影響生長性能[1]，誘發(fā)“仔豬斷奶應(yīng)激綜合征”[2]。而發(fā)酵飼料以飼料為基礎(chǔ)物質(zhì)，添加有益微生物使其大量繁殖，先進(jìn)行體外消化，分解飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)，當(dāng)動(dòng)物采食后，營養(yǎng)物質(zhì)得到充分吸收，有益微生物又可定植在腸道中，從而改善仔豬的腸道結(jié)構(gòu)，彌補(bǔ)早期斷奶帶來的缺點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 發(fā)酵用菌液成分：含有乳酸菌、枯草芽孢桿菌，總均數(shù)5×1010CFU/g。菌液和基礎(chǔ)日糧均由沈陽愛特杰牧業(yè)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和日糧配制 選用28日齡美系大白和長白斷奶仔豬27頭，按體重相近原則隨機(jī)分為3個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3頭仔豬。試驗(yàn)I組即正對照組（PD），含有基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)Ⅱ組即負(fù)對照組（ND），含有基礎(chǔ)日糧+20%水；試驗(yàn)Ⅲ組為發(fā)酵飼料組（ND+P），含基礎(chǔ)日糧+20%水+菌液?；A(chǔ)日糧組成見表1。預(yù)飼期為7 d，試驗(yàn)期為15 d。仔豬采用分欄飼養(yǎng)，自由采食和飲水。豬舍溫度保持在28℃左右。仔豬由沈陽市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所種豬場提供。

1.3 血樣采集 36日齡（中期）、43日齡（末期）時(shí)，每個(gè)重復(fù)選取2頭仔豬，用10 mL的一次性注射器，在酒精火焰下無菌操作，前腔靜脈采血6～8 mL注射到促凝管中。

1.4 血清中IgA、IgM、IgG的測定 試驗(yàn)中期及結(jié)束時(shí)，分別給仔豬前腔靜脈采血6～8 mL，用免疫比濁儀測定血清中IgG、IgA和IgM的含量。

1.4.1 試驗(yàn)結(jié)果IgA的計(jì)算

IgA（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作對照的校準(zhǔn)管吸光度值

CS校準(zhǔn)管中IgA的濃度

1.4.2 試驗(yàn)結(jié)果IgM的計(jì)算

IgM（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作對照的校準(zhǔn)管吸光度值

CS校準(zhǔn)管中IgM的濃度

1.4.3 試驗(yàn)結(jié)果IgG的計(jì)算

IgG（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作對照的校準(zhǔn)管吸光度值CS校準(zhǔn)管中IgG的濃度

1.5 血清中超氧化物歧化酶（SOD）的測定 血清中SOD的測定原理：通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基（O2-），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下形成紫色，用可見光分光光度計(jì)測其吸光度。當(dāng)被測樣品中含SOD時(shí)，則對超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用，形成的亞硝酸鹽減少，比色時(shí)測定管的吸光度值低于對照管的吸光度值，通過公式計(jì)算可求出被測樣品中的SOD活力。

高等動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)只有兩種SOD即銅鋅-SOD（CuZn-SOD）與錳-SOD（Mn-SOD），二者相加等于總SOD（T-SOD）。經(jīng)樣本前處理過的樣本中Mn-SOD活力喪失，但Cu-SOD活力不變。

總SOD活力（U/mL）=（對照管吸光度-測定管吸光度）/對照管吸光度÷50%×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)×樣本測試前的稀釋倍數(shù)

1.6 血清中溶菌酶的測定 血清中溶菌酶的測定原理：在一定濃度的混濁菌液中，由于溶菌酶能水解細(xì)菌細(xì)胞壁上肽聚糖使細(xì)菌裂解而濃度降低，透光度增強(qiáng)，故可以根據(jù)透光度變化來推測溶菌酶的含量。

計(jì)算公式：

溶菌酶含量（μg/mL）=（測定管吸光度T15-空白管吸光度T15）/（標(biāo)準(zhǔn)管吸光度T15-空白管吸光度T15）×標(biāo)準(zhǔn)管濃度（10μg/mL）×樣本測試前稀釋倍數(shù)

1.7 數(shù)據(jù)分析 將試驗(yàn)所測得的各項(xiàng)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)整理及作圖（使用Excel 2003軟件），試驗(yàn)結(jié)果用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和鄧肯氏法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

表1 日糧組成及營養(yǎng)成分Table1 The com position and nutrient level of basal diet

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白的影響 見表2～4和圖1～3。

表2和圖1結(jié)果顯示，中期Ⅲ組中IgA的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了30.00%（P＜0.05）、28.13%（P＜0.05）；后期Ⅲ組中IgA的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了24.32%（P＜0.05）、12.20%（P＜0.05）。

表2 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中IgA的含量Table2 Effect o f ferm ented feed on serum IgA of weaned piglets g/L

圖1 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中IgA的含量Fig.1 Effect o f ferm ented feed on serum IgA of weaned piglets

表3 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中IgG的含量Table3 Effect o f ferm ented feed on serum IgG of weaned piglets g/L

圖2 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中IgG的含量Fig.2 Effect of fermented feed on serum IgG of weaned piglets

表3和圖2結(jié)果顯示，中期各組間IgG的含量差異顯著（P＜0.05），后期Ⅲ組中IgG的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了27.64%（P＜0.05）、21.37%（P＜0.05）；Ⅰ組和Ⅱ組間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中IgM的含量Tab le4 Effect of ferm ented feed on serum IgM of weaned piglets g/L

圖3 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中IgM的含量Fig.3 Effect o f ferm ented feed on serum IgM o f weaned pig lets

表4和圖3結(jié)果顯示，中期和后期各組間IgM的含量差異都不顯著（P＞0.05）。2.2 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中溶菌酶的影響 見表5和圖4。

表5 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中溶菌酶的含量Table5 Effect of fermented feed on serum lysozym e of weaned piglets μg/mL

圖4 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中溶菌酶的含量Fig.4 Effect of fermented feed on serum lysozyme of weaned piglets

表5和圖4結(jié)果顯示，在中期Ⅲ組與Ⅰ組的溶菌酶含量差異顯著（P＜0.05），而Ⅲ組和Ⅱ組、Ⅱ組和Ⅰ組差異不顯著（P＞0.05）；在后期，溶菌酶的含量Ⅲ組與Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05），分別比Ⅰ組提高了24.95%（P＜0.05），23.21%（P＜0.05）。

2.3 對仔豬血清中超氧化物歧化酶（SOD）的影響見表6和圖5。

表6 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中SOD的含量Table6 Effect o f ferm ented feed on serum SOD of weaned piglets U/m L

圖5 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中SOD的含量Fig.5 Effect of fermented feed on serum SOD of weaned piglets

表6和圖5結(jié)果顯示，中期各組間SOD的含量差異不顯著（P＞0.05）；后期SOD的含量Ⅲ組分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了53.79%（P＜0.05）、25.35%（P＞0.05）；Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白的影響 斷奶仔豬血清中免疫球蛋白水平反映了其抵抗外界病原菌和病毒侵襲的能力。研究表明[3]，免疫球蛋白IgG、IgA和IgM可以給機(jī)體提供局部保護(hù)、預(yù)防腸道疾病發(fā)生、抵抗病原菌的侵襲等。研究發(fā)現(xiàn)[4]，仔豬最初的IgG、IgA和IgM來源于初乳，但由于飼養(yǎng)管理和個(gè)體差異較大，使其獲得量和時(shí)間有限，在仔豬階段，由于免疫器官發(fā)育的不完善，主動(dòng)免疫很受限制，B細(xì)胞分泌的免疫球蛋白量非常有限，因此，提高仔豬自身免疫球蛋白水平相當(dāng)關(guān)鍵。現(xiàn)代養(yǎng)殖中，采取的是早期斷奶技術(shù)，缺少了母源的免疫將導(dǎo)致仔豬主動(dòng)免疫停止甚至倒退，另外，斷奶后食物和環(huán)境上的應(yīng)激直接改變仔豬的免疫狀態(tài)[5]，因此采取一定的措施來增強(qiáng)斷奶仔豬的免疫機(jī)能刻不容緩。近年來，發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中免疫機(jī)能的報(bào)道較少。

本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼料經(jīng)過有益菌發(fā)酵之后，IgA、IgM、IgG都有增長的趨勢，可能存在以下原因：添加有益菌后使腸道內(nèi)雙歧桿菌增殖，桿菌細(xì)胞壁和分泌物可產(chǎn)生大量免疫物質(zhì)如IgA免疫球蛋白，其阻止細(xì)菌附著于宿主的腸黏膜組織的能力是其他免疫球蛋白的7～10倍；乳酸桿菌本身還能對腸道免疫細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的刺激，增加抗體細(xì)胞數(shù)量，激活巨噬細(xì)胞的活力，強(qiáng)化機(jī)體免疫體系；芽孢桿菌能促進(jìn)機(jī)體免疫器官、組織的成熟，使這些器官、組織處于高度反應(yīng)準(zhǔn)備狀態(tài)，T、B-淋巴細(xì)胞數(shù)量增多，提高機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫水平。以上都可以使免疫組織分泌免疫球蛋白。

3.2 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清中溶菌酶的影響 溶菌酶（Lysozyme），即N-乙酰胞壁質(zhì)酶（N-acetylmurmidase），作用于細(xì)菌細(xì)胞壁N-乙酰胞壁酸（NAM）與N-乙酰葡萄糖胺（NAG）之間的β-1,4-糖苷鍵，廣泛分布于自然界各種生物體中[6]。溶菌酶是一種水解粘多糖的堿性水解酶，它作為一種存在于機(jī)體正常體液及組織中的非特異性免疫因素，具有多種藥理作用。Imoto報(bào)道[7]，它可與各種誘發(fā)炎癥的酸性物質(zhì)結(jié)合，使其失活，并能增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，改善組織基質(zhì)的粘多糖代謝，從而達(dá)到消炎、修復(fù)組織、改善胃腸道功能的目的。溶菌酶主要作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁，細(xì)菌細(xì)胞裂解刺激免疫系統(tǒng)，激發(fā)機(jī)體內(nèi)吞噬細(xì)胞的噬菌作用。溶菌酶對仔豬腹瀉有防治作用，與免疫球蛋白的功能緊密聯(lián)系。溶菌酶主要來自嗜中性白細(xì)胞、單核細(xì)胞及吞噬細(xì)胞溶酶體中，并能增強(qiáng)補(bǔ)體活性，從而殺滅細(xì)菌[8]。在邱偉海等[9]的試驗(yàn)中可知，斷奶仔豬飼料中不添加任何抗生素或其他抗腹瀉的添加劑，腹瀉嚴(yán)重，在仔豬日糧中添加溶菌酶500 g/t基本可以控制腹瀉，可以替代抗生素。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加發(fā)酵飼料后血清酶濃度增加，分析原因可能是因?yàn)椋喊l(fā)酵飼料中的乳酸桿菌和枯草芽孢桿菌有足夠的活菌數(shù)量和活性[10]，能定植于小腸上皮，調(diào)節(jié)機(jī)體胃腸道微生態(tài)平衡，并可促進(jìn)腸道相關(guān)淋巴組織生理活動(dòng)，使免疫器官發(fā)育加快，免疫系統(tǒng)成熟度提高，T和B淋巴細(xì)胞數(shù)量增加[11]，潘氏細(xì)胞的數(shù)量也增加了，所以分泌的溶菌酶增多。

以上結(jié)果都說明，在添加了乳酸桿菌和枯草芽孢桿菌發(fā)酵后，能明顯提高斷奶仔豬血清中溶菌酶的含量，飼喂效果優(yōu)于干粉料。

3.3 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血清SOD的影響 SOD廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)，其主要功能是去除動(dòng)物體液和組織中代謝所產(chǎn)生的超氧基O2-，O2-具有很強(qiáng)的氧化性，極易破壞細(xì)胞核內(nèi)mRNA，使蛋白質(zhì)變性；它也可破壞血管內(nèi)壁細(xì)胞，使原本光滑的血管內(nèi)壁變的粗糙不平，加速膽固醇等脂質(zhì)沉著等，反應(yīng)式為：O2-+O2-+H+→H2O+O2。SOD活性提高，可削弱或去除超氧基氧化破壞細(xì)胞或細(xì)胞內(nèi)還原性活性成分的作用，保護(hù)細(xì)胞功能的完整性[12]。

本試驗(yàn)中，乳酸桿菌、芽孢桿菌能刺激動(dòng)物處于高度“免疫準(zhǔn)備狀態(tài)”，同時(shí)刺激免疫器官發(fā)育成熟，產(chǎn)生大量生理活性物質(zhì)，如SOD、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHoPx），刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的作用，從而加強(qiáng)小腸和其他組織對病原物質(zhì)的抵抗力[13]，從而增強(qiáng)了斷奶仔豬的體液免疫功能。另外，乳酸桿菌的添加，降低了腸道的pH，使腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌群雙歧桿菌可能大量增殖，增加超氧化物酶的活性，清除自由基。

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Effects of Fermented Feed on Morphology of Small Intestine of Weaned Piglets

Li Xuanl iang1,Zhang Wei2,Lu Gang1,Li Xiaofeng3,Zhang Wu1,Huo Yang1
（1.Bureau of Panjin City Shuangtaizi Dist rict Rural Economy,Liaoning Panj in 124000；2.Panj in City Shuangtaizi animal disease prevention and control center,Liaoning Panjin 124000；3.Panj in City Shuangtaizi Dist rict Animal Husbandry and Veterinary Bureau,Liaoning Panjin 124000）

This experiment was to study fermented feed of weaning piglets intestinal blood part indicators.27 head average weight 6.83 kg of 28 days of age weaning piglets is divided into three processing.Test group I(positive control group,including basic diet),testⅡ group(negative cont rol group,including basal diet+20%overnight water),testⅢ group(negative cont rol group,including basic diet+bacteria l iquid+20%overnight water).Experimental resul ts show that water mixed bacteria fermentation and l iquid fermentation of medium-termⅢ group content of IgA in 30.00%higher than that ofⅠ,Ⅱ group respectively(P＜0.05)and 28.13%(P＜0.05);Content of IgA in the lateⅢ group thanⅠ,Ⅱ group increased by 24.32%(P＜0.05)and 12.20%(P＜0.05);Medium-term IgG levels signi ficant di f ference between groups(P＜0.05),the lateⅢ IgG levels of 27.64%higher than that ofⅠ,Ⅱ group respectively(P＜0.05)and 21.37%(P＜0.05);Ⅰ group andⅡ no signi ficant dif ference between groups(P＞0.05).Middle and late IgM content were not signi ficant di f ference between groups(P＞0.05).In the medium termⅢ andⅠ group of lysozyme content signi ficant di f ference(P＜0.05),whi leⅢ andⅡ group,Ⅱ andⅠ group no signi f icant di f ference (P＞0.05).In the later,the content of lysozymeⅢ andⅡ group no signif icant di f ference(P＞0.05),and 24.95%higher than that ofⅠ group respectively(P＜0.05)and 23.21%(P＜0.05).Mediumterm SOD content di f ferences between groups was not signif icant(P＞0.05).Post the content of SODⅢ group was 53.79%higher than that ofⅠ combinationⅡ group respectively(P＜0.05)and 25.35% (P＞0.05);Ⅱ group andⅢ no signi ficant di f ference between groups(P＞0.05).Fermented feed can improve weaned piglets part blood immune index,help reduce diarrhea piglets and enhance piglets to the digestion and absorption of the abil ity.

Fermented feed;Lysozyme;IGA;Weaned piglets

S828.5

1672-9692(2015)07-0001-07

2015-05-30

李旋亮（1982-），男，碩士研究生，主要從事飼料添加劑對仔豬生產(chǎn)性能影響的研究。