孕激素膜受體1在40例卵巢癌中的表達(dá)及意義

任峻青 鄭洪

（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴州 遵義563003）

近年來發(fā)現(xiàn)孕激素膜受體1（PGRMC1）是一種新型膜激素受體，廣泛存在于細(xì)胞膜、微粒體及突觸膜上。PGRMC1是作為一種接頭蛋白并參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，與腫瘤細(xì)胞增殖，侵襲密切相關(guān)。PGRMC1在乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌和肺癌等多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織系中高表達(dá)，表明PGRMC1促進(jìn)腫瘤的生存和發(fā)展 。目前關(guān)于PGRMC1在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中作用少有報(bào)道，因此，本文探討PGRMC1表達(dá)水平和卵巢癌分期、分級的相關(guān)性，為卵巢癌的治療提供新的治療靶點(diǎn)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 采集遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2011－2013年卵巢漿液性囊腺癌石蠟標(biāo)本40例，10%甲醛固定，石蠟包埋。年齡28～69歲，平均46.7歲，全部患者術(shù)前未化療，術(shù)后予以化療，具有完整的臨床病理資料。年齡 ＜50歲18例，≥50歲22例；腫瘤大小＜5cm 11例，≥5cm 29例；病理分級：Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ期27例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的10例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的30例。另選擇正常輸卵管傘端上皮10例（來自尸檢，病理證實(shí)輸卵管上皮組織無異常者，年齡28～46歲，平均38.9歲）為對照組，漿液性囊腺瘤10例（年齡23～45歲，平均31.5歲），交界性腫瘤10例（年齡32～62歲，平均47.5歲）。

1.2 試劑 兔抗人PGRMC1一抗購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，抗體工作濃度1∶200，EnVision試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 PGRMC1的免疫組化定位 每例石蠟標(biāo)本脫蠟，水化；用3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。在pH 9.0的EDTA緩沖液中微波修復(fù)抗原后，加入已稀釋的一抗PGRMC1（1∶200）4℃孵育過夜；加入生物素標(biāo)記的二抗，滴加DAB顯色劑顯色，蘇木素復(fù)染核，脫水、透明、封片。以PBS緩沖液代替一抗作空白對照，正常腎臟組織為陽性對照。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)胞質(zhì)染成淡黃色至棕黃色為陽性標(biāo)志，將陽性細(xì)胞數(shù)和顯色強(qiáng)度分為3級：弱陽性（＋），陽性細(xì)胞數(shù)＜10%，顯色強(qiáng)度為淡黃色或僅個(gè)別細(xì)胞為黃至棕黃色；強(qiáng)陽性（＋＋＋），陽性細(xì)胞數(shù)＞60%，多數(shù)細(xì)胞為黃至棕黃色；中度陽性（＋＋）陽性細(xì)胞數(shù)及強(qiáng)度介于前兩者之間。

1.5 圖像分析 每張切片應(yīng)用美國 MediaCybemetics公司生產(chǎn)的Image－ProPlus圖像分析軟件（IPP6.0）進(jìn)行圖像分析平均光密度值（MOD）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，PGRMC1陽性表達(dá)率和卵巢癌臨床病理學(xué)計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 PGRMC1在卵巢癌中的陽性表達(dá)率 對照組10例，PGRMC1陽性表達(dá)率20%；良性組10例，PGRMC1陽性表達(dá)率30%，F(xiàn)＝12.370，P＝0.006；交界性組10例，PGRMC1陽性表達(dá)率50%；惡性組40例，PGRMC1陽性表達(dá)率72.5%。各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。陽性部位主要以癌細(xì)胞胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色。見圖1。

2.2 PGRMC1在實(shí)驗(yàn)各組的陽性表達(dá)量 對照組10例，MOD（0.0 180±0.00 789）；良性組10例，MOD（0.0 210±0.00 738），F(xiàn)＝14.648，P＝0.000；交界性組10例，MOD（0.0 320±0.0 103）；惡性組40例，MOD（0.0 470±0.01 870）。良性組與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；交界性組與良性組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；惡性組分別與對照組、良性組、交界性組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 PGRMC1在各組中的表達(dá)（×400）

2.3 PGRMC1的表達(dá)與卵巢癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 PGRMC1的表達(dá)與卵巢癌腫瘤大?。≒＝0.02）、病理分級（P＝0.011）密切相關(guān)，與年齡（P＝0.498）和臨床分期（P＝0.4）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P＝0.838）無關(guān)。見表1。

表1 PGRMC1在卵巢癌中的表達(dá)及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系 （n＝40）

3 討 論

PGRMC1在多種腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系中高表 達(dá)［1－2］。 本 研 究 表 明，卵 巢 良 性 腫 瘤 組 織 中PGRMC1的表達(dá)水平相對于正常對照組來說增高不明顯（P＞0.05），且交界性組相對于良性組增高不明顯（P＞0.05），惡性組與正常組、良性組、交界組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨著惡性程度的增加，PGRMC1的陽性表達(dá)量顯著增多，與上述結(jié)果基本一致。可以推測PGRMC1在卵巢癌中過度表達(dá)。

Peluso等［3］研究顯示PGRMC1／Hpr6.6跨膜區(qū)的C末端參與孕激素抗正常顆粒細(xì)胞凋亡的調(diào)控，而PGRMC1與纖溶酶原激活物抑制劑RNA結(jié)合蛋白1（PAIRBP1）結(jié)合位點(diǎn)也在其C末端的70～130aa的位置，敲除PGRMC1表達(dá)后，可使3－H孕激素入胞率下降60%，孕激素抗卵巢癌細(xì)胞凋亡效應(yīng)喪失。體內(nèi)外PGRMC1均與卵巢癌細(xì)胞對順鉑的敏感度密切相關(guān)，敲除PGRMC1基因后，瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)生長緩慢，荷瘤裸鼠瘤體明顯小于對照組［4］。因此，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)中卵巢漿液性囊腺癌組織中PGRMC1表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系表明，在卵巢癌臨床病理特征分組中PGRMC1在各組中表達(dá)，組與組間比較有腫瘤大小、病理分級差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?？赏茰yPGRMC1在一定程度上減弱或阻止凋亡及阻斷凋亡通路引起細(xì)胞凋亡，腫瘤直徑越大、分化越差的卵巢癌PGRMC1表達(dá)較高，提示卵巢癌的發(fā)生與PGRMC1密不可分，PGRMC1可能是指示腫瘤進(jìn)展的潛在標(biāo)志物和治療腫瘤的潛在靶標(biāo)分子。因此需進(jìn)一步深入研究PGRMC1與卵巢癌發(fā)生的關(guān)系有助于尋找新的腫瘤標(biāo)志物，將為卵巢癌的早期診斷提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］ H.Neubauer，S.E.Clare，W.Wozny，et al.Breast cancer proteomics reveals correlation between estrogen receptor status and differential phosphorylation of PGRMC1［J］.Breast Cancer Research，2008，10（5）：R85.

［2］ G.Crudden，R.Loesel，R.J.Craven.Overexpression of the cytochrome p450activator hpr6 （heme－1 domain protein／human progesterone receptor）in tumors［J］.Tumour Biology，2005，26（3）：142－146.

［3］ J.J.Peluso，X.Liu，M.M.Saunders，et al.Regulation of ovariancancer cell viability and sensitivity to cisplatin by progesterone receptor membrane component－1［J］.Journal of Clinical Endocrinloogy ＆ Metabolism，2008，93（5）：1592－1599.

［4］ 紀(jì)術(shù)峰，吳愛國，楊華峰.孕激素膜受體1在乳腺癌的表達(dá)及其生物學(xué)意義［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（5）：635－638.