不同自身抗體吸收法的比較與分析

易 峰，何銳洪，袁文聲，林惠燕

(中山市中心血站，廣東中山 528400)

·經(jīng)驗交流·

不同自身抗體吸收法的比較與分析

易 峰，何銳洪，袁文聲，林惠燕

(中山市中心血站，廣東中山 528400)

目的通過比較和分析不同的自身抗體吸收法，尋找一個合適、經(jīng)濟和有效的自身抗體吸收法，以更好地篩選和鑒定自身免疫性溶血性貧血(AIHA)患者血清中的同種抗體。方法取20例AIHA患者血清，分別采用木瓜蛋白酶自身紅細胞溫吸收法、聚乙二醇(PEG)自身紅細胞溫吸收法、木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收法和PEG同種紅細胞吸收法對自身抗體進行吸收，比較吸收時間、吸收次數(shù)、吸收后血清抗體鑒定結(jié)果。結(jié)果PEG同種紅細胞吸收法平均每例吸收1.8次，明顯低于木瓜蛋白酶同種紅細胞法的平均值4.1次(P<0.05)。兩種方法平均吸收時間分別為90.0 min和225.1 min，二者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩種吸收方法同種抗體的特異性、效價檢測結(jié)果一致，均為RH系統(tǒng)的同種抗體。結(jié)論PEG法可以快速、經(jīng)濟和有效去除AIHA患者血清中的自身抗體，便于同種抗體鑒定。

貧血，溶血性，自身免疫性；吸收法；聚乙二醇；木瓜蛋白酶；自身抗體；同種抗體

自身免疫性溶血性貧血(autoimmune hemolytic anemia，AIHA)系體內(nèi)免疫功能調(diào)節(jié)紊亂，產(chǎn)生自身抗體和(或)補體吸附于紅細胞表面，通過抗原抗體反應加速紅細胞破壞而引起的一種溶血性貧血。嚴重溶血和嚴重貧血的AIHA患者需要輸注血液，但由于多次輸血或是妊娠等原因，大約12%～40%AIHA患者血清中可測得同種抗體，這些同種抗體可導致溶血性輸血反應，故在輸血前若能檢測出這些同種抗體的特異性，選擇更“兼容”的血細胞輸注，可減少溶血性輸血反應的發(fā)生，而因自身抗體的存在會干擾同種抗體的篩選和鑒定，故AIHA患者的輸血前檢查首先要通過各種方法去除自身抗體，以排除其干擾，選擇合適的供者血液。目前常用的自身抗體吸收方法有自身紅細胞溫吸收法和同種紅細胞吸收法，而因聚乙二醇(PEG)或木瓜蛋白酶能增強紅細胞吸附自身抗體的能力，被廣泛應用于自身抗體吸收試驗[1-2]。本研究擬采用木瓜蛋白酶自身紅細胞溫吸收法、PEG自身紅細胞溫吸收法、木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收法和PEG同種紅細胞吸收法對自身抗體進行吸收，比較4種自身抗體吸收法的吸收時間、吸收次數(shù)、吸收后血清抗體鑒定結(jié)果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年1月至2014年3月AIHA患者20例，其中男6例，女14例，年齡23～72歲。原發(fā)性患者12例，繼發(fā)性患者8例，均有輸血史或妊娠史，直抗、間抗試驗陽性(++～++++)，13例紅細胞表面結(jié)合的單一的免疫球蛋白G(IgG)類型的自身抗體，其余7例紅細胞表面同時結(jié)合IgG和補體C3(C3c/C3d)。

1．2 儀器與方法

1.2.1 試劑與儀器 抗體篩選細胞購自上海血液生物公司，譜細胞購自上海血液生物公司，抗人球蛋白試劑購自長春博德生物技術(shù)公司，1%木瓜酶，PEG購自珠海貝索公司。4200型平板離心機購自日本KUBOTA公司，恒溫振搖式水浴箱購自韓國。

1.2.2 檢測方法選取 對于同一份標本選擇一種或者多種吸收方法取決于標本量或者患者輸血史和貧血嚴重程度。采用木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收技術(shù)的有2例，PEG同種紅細胞吸收技術(shù)3例，采用木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收技術(shù)和PEG同種紅細胞吸收技術(shù)7例，采用木瓜蛋白酶自身紅細胞吸收技術(shù)和木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收技術(shù)3例，采用PEG自身紅細胞吸收技術(shù)和PEG同種紅細胞吸收技術(shù)3例，采用木瓜蛋白酶自身紅細胞吸收技術(shù)和PEG自身紅細胞吸收技術(shù)2例。

1.2.3 PEG自身紅細胞/同種紅細胞PEG吸收法 PEG溶液的制備方法參照文獻[3]。把等量的患者血清、PEG溶液、未經(jīng)熱放散處理的自身紅細胞或同種紅細胞混合，在37 ℃孵育15 min,1 000×g離心5 min，吸取上清液進行間抗試驗，若陽性，則繼續(xù)吸收，直至間抗試驗陰性。

1.2.4 木瓜蛋白酶自身紅細胞/同種紅細胞吸收法 取輕度熱放散處理后的自身紅細胞或同種紅細胞適量，加入1%木瓜蛋白酶溶液處理后，洗滌3遍，加入等量患者血清，37 ℃孵育20 min，1 000×g離心5 min，吸取上清液進行間抗試驗，若陽性，則繼續(xù)吸收，直至間抗試驗陰性。

1.2.5 吸收上清液同種抗體鑒定 取自身抗體已徹底吸收干凈的上清液作同種抗體特異性鑒定，方法參照文獻[4]。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料用頻數(shù)表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 4種自身抗體吸收試驗的比較 PEG同種紅細胞吸收法完全吸收自身抗體的吸收循環(huán)次數(shù)平均為1.8次，遠低于木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收法的4.1次(P<0.05)。所需要的平均時間，PEG同種紅細胞吸收法為90.0 min而木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收法為225.1 min，比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 4種自身抗體吸收試驗的比較

2.2 PEG法與木瓜蛋白酶法對同種抗體檢測影響的比較 20例標本中7例同時采用了PEG同種紅細胞吸收技術(shù)和木瓜蛋白酶同種細胞吸收技術(shù)，其中3例被檢測出同種抗體(42.9%)，均為RH系統(tǒng)的同種抗體，單純自身抗體4例，同種抗體的特異性、效價檢測結(jié)果一致，見表2。

表2 PEG法與木瓜蛋白酶法對同種抗體檢測影響的比較

3 討 論

自身抗體是引起血型鑒定和交叉配血困難的常見因素，當AIHA患者血清中同時存在自身抗體和同種抗體時，自身抗體常易遮蓋同種抗體的特異性，使同種抗體漏檢而導致嚴重的輸血反應，及時排除自身抗體的干擾，鑒定出同種抗體，可保證臨床輸血安全，傳統(tǒng)自身抗體吸收(ZAPP)法不僅是耗功和耗時，而且可能延遲重癥患者的緊急輸血，PEG、低離子鹽(LISS) 木瓜蛋白酶可以增強抗原抗體反應，已經(jīng)開始逐漸取代ZAPP法[5-6]。

大部分AIHA患者超過40歲，且多為女性[7]，在本研究中，女性占70%(14/20)，年齡較大，所有患者間接球蛋白試驗(IAT)試驗呈較強陽性(++～++++)。由于本研究對象大部分近期都曾接受過輸血，或者貧血癥狀較嚴重，因此限制了本研究，大部分標本不能用自身細胞溫吸收法吸收患者血清中的自身抗體，只有8個近期沒有接受過輸血且病情比較穩(wěn)定的患者血清應用了自身紅細胞溫吸收法吸收患者血清中的自身抗體，其中只有2名患者取得充足的自身紅細胞，并且同時進行了PEG自身紅細胞溫吸收法和木瓜蛋白酶自身紅細胞溫吸收法。自身細胞溫吸收法較同種紅細胞吸收法更快地完成血清自身抗體的吸收，因為后者需要有適當表型的紅細胞，而要準確獲得患者紅細胞的表型信息需要對患者紅細胞作放散試驗，或者應用分子技術(shù)檢測患者紅細胞表型信息。本研究所有患者的同種抗體均為Rh系統(tǒng)特異性，推薦輸注患者紅細胞Rh表現(xiàn)型的紅細胞。

PEG同種紅細胞吸收法完全吸收自身抗體的吸收循環(huán)次數(shù)平均為1.8次，遠低于木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收法的4.1次(P<0.05)。結(jié)果與相關(guān)研究相符[1-2]，完全將血清中自身抗體吸收所需要的平均時間，PEG同種紅細胞吸收法為90 min而木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收法為225.1 min，本研究木瓜蛋白酶同種紅細胞吸收法所需時間較長的確切原因暫時沒法解釋。要在統(tǒng)計學上得出PEG自身紅細胞吸收法和木瓜蛋白酶自身紅細胞吸收法的比較結(jié)論，需要做更多的樣本，但本研究提示前者所花的時間較少(平均88.0 min和122.5 min)。

有研究提示，PEG能誘導免疫球蛋白沉淀而減弱抗原抗體反應強度，從而減低同種抗體的測定效價[8-11]，但在本研究中，所有同時進行PEG吸收法和木瓜蛋白酶吸收法的血清，同種抗體特異性鑒定結(jié)果及效價均一致，但因為本研究的標本量較少，不足以證明PEG對同種抗體鑒定結(jié)果無影響，可見PEG法主要是在時間上，方便性上有一定的優(yōu)勢，在其他方面同木瓜蛋白酶優(yōu)勢并不大。所以，對于AIHA患者需要緊急輸血時，推薦用PEG吸收法，而基于木瓜蛋白酶吸收法對檢測血清中同種抗體更敏感，對于高度懷疑存在同種抗體的患者，如接受過多次重復輸血的患者或孕婦，經(jīng)PEG吸收法吸收后同種抗體鑒定結(jié)果陰性，建議使用木瓜蛋白酶吸收法，自身抗體吸收法最好采用自身細胞進行抗體的吸收，以避免同種抗體的漏檢。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2015.28.035

易峰(1960-)，本科，副主任醫(yī)師，主要從事輸血方面的研究。

R446.6

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1671-8348(2015)28-3996-03

2015-04-14

2015-05-16)