長(zhǎng)春西汀注射液與臨床常用輸液配伍的穩(wěn)定性考察

鄧 麗 ，汪秋蘭，王世民，施春陽(yáng)，方建國(guó)，王文清#(.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 武漢 430030;.武漢華龍生物制藥有限公司新藥研發(fā)部，湖北 武漢 430030)

長(zhǎng)春西汀是從夾竹桃科小蔓長(zhǎng)春花提取的生物堿經(jīng)合成、篩選而開(kāi)發(fā)的吲哚類生物堿長(zhǎng)春胺的衍生物，系腦血管擴(kuò)張劑，能維持或恢復(fù)腦血管的生理性擴(kuò)張，增加缺血區(qū)的正常腦血流量，提高腦對(duì)血氧的利用率，改善缺氧腦組織的代謝［1-3］。長(zhǎng)春西汀注射液的原研產(chǎn)品由匈牙利Gedeon Richter公司生產(chǎn)，規(guī)格為2 ml∶10 mg。我國(guó)長(zhǎng)春西汀注射液共3 種規(guī)格:2 ml∶10 mg、2 ml∶20 mg 和5 ml∶30 mg。長(zhǎng)春西汀注射液的說(shuō)明書(shū)“用法用量”項(xiàng)中注明，可用本品20 ～30 mg 加入0.9%氯化鈉注射液或5%氯化鈉注射液500 ml 內(nèi)緩慢滴注(滴注速度不能超過(guò)80 滴/min)，配制好的輸液須在3 h 內(nèi)使用?？梢?jiàn)，500 ml 輸液至少需要125 min(約2 h)才能滴注完畢，故配制好的輸液應(yīng)至少能在室溫(20 ～25 ℃)下穩(wěn)定保存6 h。本研究考察了長(zhǎng)春西汀注射液分別與5%葡萄糖注射液和0.9%氯化鈉注射液配伍后的穩(wěn)定性，以探討中試處方工藝的合理性，為臨床用藥的安全性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試劑

LC-20AD 型高效液相色譜儀(日本島津公司)，包括LC solution 工作站、LC-20AD 泵、SIL-20A 型自動(dòng)進(jìn)樣器、SPDM20A 型二極管陣列檢測(cè)器(190 ～800 nm);AUW 220D 型雙量程分析天平(日本島津公司，感量0.1 mg/0.01 mg)。長(zhǎng)春西汀注射液中試樣品(武漢華龍生物制藥有限公司，規(guī)格:2 ml∶10 mg，批 號(hào):1330001、1330003、1330008、1330009、1330010);長(zhǎng)春西汀注射液市售樣品(鄭州羚銳制藥股份有限公司，批號(hào):1206111;匈牙利吉瑞大藥廠，批號(hào):A27161A);氯化鈉注射液(武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司，規(guī)格:250 ml∶2.25 g，批號(hào):1403110303);葡萄糖注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格:250 ml∶12.5 g，批號(hào):A12112705-1);長(zhǎng)春西汀對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100947-201203，供含量測(cè)定用，供高效液相色譜法測(cè)定，按C22H26N2O2計(jì)，含量為99.4%);歐洲藥典委員會(huì)長(zhǎng)春西汀雜質(zhì)對(duì)照品，包括雜質(zhì)A(批號(hào):Y0000590)、雜質(zhì)B(批號(hào):Y0000591)、雜質(zhì)C(批號(hào):Y0000790)、雜質(zhì)D(批號(hào):Y0000760)，均購(gòu)自歐洲藥典委員會(huì);甲醇、乙腈(美國(guó)天地公司，色譜純);其他試劑均為分析純，水為新制多效純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定分析方法驗(yàn)證

2.1.1 色譜條件:色譜柱:InertSustain C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相:0.2 mol/L 醋酸銨溶液-乙腈(V∶V =40∶60)，檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm，流速:1 ml/min，柱溫:30 ℃，進(jìn)樣量:10 μl。長(zhǎng)春西汀主峰與各雜質(zhì)峰之間分離度良好，雜質(zhì)B 和雜質(zhì)D的分離度＞2.0，理論板數(shù)按長(zhǎng)春西汀峰計(jì)算不低于3 000。

2.1.2 溶液制備:(1)對(duì)照品溶液:精密稱取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品12.88 mg(相當(dāng)于長(zhǎng)春西汀12.8 mg)，置于50 ml 棕色量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液;再精密量取2 ml，置于10 ml 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。(2)系統(tǒng)適用性溶液:分別精密稱取雜質(zhì)A、B、C、D 4.97、5.18、4.99、5.23 mg，分別置于100 ml 量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品貯備液2 ml，雜質(zhì)A、B、C、D 各1 ml，置于10 ml 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。(3)供試品溶液:精密量取本品1 ml，置于20 ml 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻;再精密量取2 ml，置于10 ml 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。(4)空白對(duì)照溶液:按長(zhǎng)春西汀注射液處方制備不含長(zhǎng)春西汀的陰性樣品，再按照供試品溶液的制備方法制備空白對(duì)照溶液。

2.1.3 專屬性試驗(yàn):按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件，精密量取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品溶液、系統(tǒng)適用性溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、空白輸液各10 μl 進(jìn)樣，記錄色譜圖。對(duì)照品溶液色譜圖中，長(zhǎng)春西汀主峰tR為18.38 min，理論板數(shù)為14 204.36;系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中，雜質(zhì)A、D、B 和C 的tR分別為6.39、12.25、13.73 和15.08 min，雜 質(zhì)B 和 雜 質(zhì)D 的 分 離 度 為3.29 ＞2.0;供試品溶液色譜圖中，在與對(duì)照品溶液主峰色譜圖相應(yīng)的位置上，顯相同的色譜峰;陰性對(duì)照溶液和空白輸液對(duì)長(zhǎng)春西汀的測(cè)定無(wú)干擾。

2.1.4 線性關(guān)系考察:精密量取“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液0.5、1、2、3、5、10 ml，分別置于10 ml 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品系列溶液。分別取上述溶液各10 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積(A)對(duì)濃度(C)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。長(zhǎng)春西汀在12.80 ～256.00 μg/ml 的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為:A=15 969C-8 432.3(r=0.999 95，n=6)。2.1.5 儀器精密度試驗(yàn):精密量取“2.1.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5 次，測(cè)得長(zhǎng)春西汀峰面積的RSD為0.16%(n=5)，即儀器精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn):取同一批中試樣品(批號(hào):1330001)，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6 份并進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，長(zhǎng)春西汀標(biāo)示量百分含量的平均值為98.17%(n=6)，RSD為0.59%，重復(fù)性良好。

2.1.7 中間精密度試驗(yàn):在不同時(shí)間由3 個(gè)不同的分析人員用不同的高效液相色譜儀(Agilent 1100)，按“2.1.2”項(xiàng)下方法各制備2 份供試品溶液，按照上述色譜條件，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示，長(zhǎng)春西汀標(biāo)示量百分含量的平均值為96.66%(n=6)，RSD為0.98%。

2.1.8 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn):取“2.1.2”(項(xiàng)下的供試品溶液1 份，于室溫(20 ～25 ℃)下放置，在不同時(shí)間段(0、2、4、6、8、10 h)分別定點(diǎn)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示:長(zhǎng)春西汀峰面積的RSD為0.28%(n=6)，說(shuō)明供試品溶液在10 h 內(nèi)測(cè)定，其含量保持穩(wěn)定。

2.1.9 范圍:根據(jù)供試品取樣量的80%為低濃度，供試品取樣量的120%為高濃度，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法分別制備3 份供試品溶液，精密量取10 μl 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示:長(zhǎng)春西汀標(biāo)示量百分含量的平均值為98.07%(n=6)，RSD為0.96%。

2.1.10 準(zhǔn)確度考察:精密量取已知含量的長(zhǎng)春西汀注射液(批號(hào):1330001)0.5 ml，分別置于9 個(gè)20 ml 量瓶中，精密量取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為500.98 μg/ml)4、5、6 ml各3 份，分別加入上述9 個(gè)量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻;再分別精密量取上述溶液2 ml，置于10 ml 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為回收率供試品溶液。測(cè)定其含量并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。2.1.11 樣品含量測(cè)定:取5 批長(zhǎng)春西汀注射液中試樣品及2 批市售樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定其長(zhǎng)春西汀標(biāo)示量的百分含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 長(zhǎng)春西汀加樣回收率測(cè)定結(jié)果(n=9)Tab 1 The determination results of recovery of vinpocetine(n=9)

表2 7 批樣品中長(zhǎng)春西汀標(biāo)示量的百分含量測(cè)定結(jié)果(n=3)Tab 2 The determination results of the percent content of labeled amount of vinpocetine in 7 batches of samples(n=3)

2.2 配伍穩(wěn)定性考察

2.2.1 輸液配伍方法:按照臨床常用最低治療質(zhì)量濃度(0.04 mg/ml)和最高治療質(zhì)量濃度(0.06 mg/ml)，將批號(hào):1330008(中試樣品)、1206111(鄭州羚銳制藥股份有限公司)和A27161A(匈牙利吉瑞大藥廠)分別與5%葡萄糖注射液或0.9%氯化鈉注射液配伍，具體配伍方法見(jiàn)表3。在室溫(20 ～25 ℃)下放置，分別于0、1、2、4、6、8 h 考察配伍溶液的性狀、pH 值、含量和不溶性微粒的變化情況。

2.2.2 配伍溶液性狀和pH 值變化:燈檢結(jié)果顯示，配伍后的輸液均為無(wú)色的澄明液體，在室溫(20 ～25 ℃)下放置8 h 內(nèi)，所有樣品性狀均未發(fā)生明顯變化，顏色未發(fā)生改變，未檢出明顯可見(jiàn)異物和細(xì)微可見(jiàn)異物。配伍后的輸液在不同時(shí)間點(diǎn)的pH 值均未發(fā)生明顯改變，見(jiàn)表4。

表3 輸液配制方法Tab 3 The preparation of infusion solutions

表4 12 種配伍溶液在不同時(shí)間點(diǎn)的pH 值測(cè)定結(jié)果Tab 4 pH value of 12 kinds of infusion solutions at different time points

2.2.3 配伍溶液含量變化:取“2.2.1”項(xiàng)下各配伍溶液，分別于0、1、2、4、6、8 h 精密量取10 μl，注入高效液相色譜儀，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以0 h 時(shí)長(zhǎng)春西汀的含量為100%計(jì)算相對(duì)含量。結(jié)果顯示，12 種配伍溶液中長(zhǎng)春西汀的相對(duì)含量均未發(fā)生明顯變化，見(jiàn)表5。

2.2.4 配伍溶液不溶性微粒變化:分別于0、1、2、4、6、8 h 取各配伍溶液適量，依照《中華人民共和國(guó)藥典:二部》(2010 年版)附錄ⅨC 所述操作規(guī)程，按光阻法，用GWJ-4 智能微粒檢測(cè)儀測(cè)定各配伍溶液中的微粒變化情況，結(jié)果見(jiàn)表6。《中華人民共和國(guó)藥典:二部》(2010 年版)附錄ⅨC 規(guī)定:“(1)標(biāo)示裝量為100 ml 或以上的靜脈用注射液，除另有規(guī)定外，每1 ml中含10 μm 及10 μm 以上的微粒不得過(guò)25 粒，含25 μm及25 μm 以上的微粒不得過(guò)3 粒。(2)標(biāo)示裝量為100 ml 以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無(wú)菌原料藥，除另有規(guī)定外，每個(gè)供試品容器(份)中含10 μm 及10 μm 以上的微粒不得過(guò)6 000 粒，含25 μm 以上微粒不得過(guò)600 粒?！币虼?，換算后，配伍前長(zhǎng)春西汀注射液和5%葡萄糖注射液的不溶性微粒均符合規(guī)定，配伍后的溶液在室溫(20 ～25 ℃)下放置8 h 的不溶性微粒合格，且在此時(shí)間內(nèi)未出現(xiàn)不溶性微粒增加的趨勢(shì)，見(jiàn)表7。

表5 12 種配伍溶液在不同時(shí)間點(diǎn)的長(zhǎng)春西汀相對(duì)含量Tab 5 Relative contents of vinpocetine in 12 kinds of infusion solutions at different time points

表6 12 種配伍溶液在不同時(shí)間點(diǎn)的不溶性微粒測(cè)定結(jié)果(個(gè)/ml)Tab 6 The results of particulate matter of 12 kinds of infusion solutions at different time points (species/ml)

表7 不同樣品不溶性微粒的合格標(biāo)準(zhǔn)Tab 7 Acceptance criteria of particulate matter for different samples

3 討論

長(zhǎng)春西汀為吲哚類生物堿，幾乎不溶于水，結(jié)構(gòu)中含有2 個(gè)叔胺氮原子，顯弱堿性(pKa=7.31)，易與色譜柱中的硅醇基相互作用，使峰形拖尾。參考標(biāo)準(zhǔn)［4］及文獻(xiàn)［5］色譜條件，選用甲醇-碳酸銨溶液-乙醚(V∶V∶V =80∶25∶3)為流動(dòng)相時(shí)，峰形拖尾;更換色譜柱及調(diào)整流動(dòng)相比例后，未見(jiàn)明顯改善，同時(shí)，乙醚的強(qiáng)揮發(fā)性易導(dǎo)致流動(dòng)相配比發(fā)生變化。本研究選用0.2 mol/L 醋酸銨溶液-乙腈(V∶V=40∶60)為流動(dòng)相［6-8］，流動(dòng)相顯弱堿性，以抑制長(zhǎng)春西汀的解離，主成分的峰形對(duì)稱，與雜質(zhì)峰分離度良好。本研究選用的檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器，選擇在200 ～400 nm 查看光譜圖。在長(zhǎng)春西汀相對(duì)應(yīng)保留時(shí)間處查看光譜圖可知，長(zhǎng)春西汀在273 nm 波長(zhǎng)處具有最大吸收。參考?xì)W洲藥典EP 7.0［6］和美國(guó)藥典USP 35［7］的長(zhǎng)春西汀的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及本研究中長(zhǎng)春西汀注射液有關(guān)物質(zhì)檢查的檢測(cè)波長(zhǎng)，選擇280 nm 作為本研究的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，本方法準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，可用于長(zhǎng)春西汀原料及其制劑的含量測(cè)定。

本研究結(jié)果表明，長(zhǎng)春西汀注射液上市產(chǎn)品和自研中試產(chǎn)品與0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液分別配伍后，在室溫(20 ～25 ℃)下放置8 h，配伍溶液的性狀、pH 值、長(zhǎng)春西汀含量均未發(fā)生明顯改變，不溶性微粒符合規(guī)定且未呈現(xiàn)明顯增加趨勢(shì)，說(shuō)明輸液配伍穩(wěn)定性良好。靜脈輸液的外觀性狀、pH 值和含量是用藥的安全性、有效性的重要指標(biāo)，而輸液中的不溶性微粒會(huì)引起靜脈炎、血管栓塞、肉芽腫、肺動(dòng)脈高壓、輸液不良反應(yīng)等，因此，靜脈輸液中不溶性微粒的大小和數(shù)量對(duì)于臨床用藥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)的意義越來(lái)越受到醫(yī)藥工作者的重視［9-10］。

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