E-cad、Ep-CAM在頭頸部腺樣囊性癌中表達(dá)的臨床意義*

李雷激，張 迪，覃 綱，向 蘭，劉躍華，祝 琳，駱文龍

(1.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，四川瀘州 646000；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科 400016)

論著·臨床研究

E-cad、Ep-CAM在頭頸部腺樣囊性癌中表達(dá)的臨床意義*

李雷激1，張 迪1，覃 綱1，向 蘭1，劉躍華1，祝 琳1，駱文龍2

(1.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，四川瀘州 646000；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科 400016)

目的研究細(xì)胞黏附分子(CAM)上皮性鈣黏連蛋白(E-cad)、上皮細(xì)胞黏附分子(Ep-CAM)在頭頸部腺樣囊性癌(ACC)中的表達(dá)情況，探討其在頭頸部ACC發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測60例頭頸部ACC及30例正常腺體組織中E-cad、Ep-CAM的表達(dá)情況，采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)對免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果E-cad在頭頸部ACC中的表達(dá)低于正常腺體組織(P<0.05)，Ep-CAM在頭頸部ACC中的表達(dá)高于正常腺體組織(P<0.05)；E-cad在頭頸部ACC組織中的相對低表達(dá)分別與ACC的病例分型、臨床分期、有無神經(jīng)癥狀及有無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；Ep-CAM在頭頸部ACC組織中的高表達(dá)分別與ACC的病例分型、臨床分期、有無神經(jīng)癥狀及有無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。E-cad與Ep-CAM在頭頸部ACC中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.890,P=0.000)。結(jié)論E-cad可能具有抑制頭頸部ACC發(fā)生、發(fā)展的作用，Ep-CAM在頭頸部ACC中表達(dá)越高，提示頭頸部ACC惡性程度越高。

E-cad；Ep-CAM；腺樣囊性癌；免疫組織化學(xué)

腺樣囊性癌(ACC)是常發(fā)生在大小涎腺的惡性腫瘤之一，約占所有頭頸部腫瘤的2%～4%[1]。其突出的特點(diǎn)是腫瘤生長緩慢，患者可長期帶瘤生存，易局部復(fù)發(fā)、嗜神經(jīng)侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，但少有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生與原發(fā)部位的腫瘤是否控制無關(guān)[2]。腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移發(fā)生的基礎(chǔ)是腫瘤細(xì)胞的黏附與去黏附，細(xì)胞黏附分子(CAM)正是介導(dǎo)這一系列黏附與去黏附的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。本實(shí)驗(yàn)旨在檢測上皮性鈣黏連蛋白(E-cad)、上皮細(xì)胞黏附分子(Ep-CAM)在頭頸部ACC中的表達(dá)，揭示其在頭頸部ACC發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床標(biāo)本 收集四川醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2004年1月至2009年1月住院治療的60例頭頸部ACC患者臨床資料，并予以隨訪。收集病理科同期正常腺體組織30例(來源于因腺體的良性腫瘤或增生行腺體淺葉或全部切除術(shù)后的標(biāo)本)作為對照。

1.2 免疫組織化學(xué)方法 病理科石蠟組織塊，3 μm切片，常規(guī)脫蠟水化，抗原修復(fù)(E-cad用Tris/EDTA修復(fù)液，pH 9.0；Ep-CAM用檸檬酸鹽緩沖液，pH 6.0)，滅活內(nèi)源性過氧化物酶，滴加一抗(鼠抗人E-cad單克隆抗體稀釋度為1∶100；鼠抗人Ep-CAM單克隆抗體為工作液不稀釋直接滴加)，滴加EnVision二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水透明封片。

1.3 指標(biāo)分析 對E-cad、Ep-CAM的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行定位觀察及圖像采集。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)不重疊的高倍視野拍照，保持統(tǒng)一的光源亮度、對比度、飽和度，以及相同的曝光時(shí)間。利用Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)，計(jì)算出陽性區(qū)域的平均光密度(MOD)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用單因素方差分析、SNK兩兩比較、t檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 E-cad及Ep-CAM在頭頸部ACC及正常腺體組織中的表達(dá) E-cad及Ep-CAM的陽性表達(dá)部位均主要位于細(xì)胞膜及少許細(xì)胞質(zhì)。E-cad在正常腺體組織中，呈強(qiáng)陽性表達(dá)，特別是導(dǎo)管上皮表達(dá)最強(qiáng)(圖1A)。在頭頸部ACC腫瘤細(xì)胞中表達(dá)較低，頭頸部ACC實(shí)體型中可見E-cad表達(dá)明顯缺失，實(shí)體型形成的大小不一的癌巢中，基本無E-cad的表達(dá)(圖1B)。E-cad在頭頸部ACC中的表達(dá)低于正常腺體組織，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.652,P=0.000)。Ep-CAM在正常腺體組織中呈弱陽性表達(dá)(圖1C)，在頭頸部ACC腫瘤細(xì)胞中呈強(qiáng)陽性表達(dá)，特別是頭頸部ACC實(shí)體型中，腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜及細(xì)胞漿均呈強(qiáng)陽性表達(dá)(圖1D)。Ep-CAM在頭頸部ACC中表達(dá)明顯高于正常腺體組織，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.898,P=0.000)。

A:E-cad在正常腺體組織中陽性表達(dá)；B:E-cad在ACC中弱陽性表達(dá)；C:Ep-CAM在正常腺體組織中弱陽性表達(dá)；D:Ep-CAM在ACC篩狀型中陽性表達(dá)；E:E-cad在ACC管狀型中陽性表達(dá)；F:E-cad在ACC實(shí)體型中表達(dá)缺失；G:Ep-CAM在ACC管狀型中陽性表達(dá)；H:Ep-CAM在ACC實(shí)體型中強(qiáng)陽性表達(dá)。

圖1 E-cad及Ep-CAM在不同部位的表達(dá)(EnVision×400)

表1 E-cad、Ep-CAM在頭頸部ACC不同分組中的表達(dá)情況

2.2 E-cad及Ep-CAM在頭頸部ACC不同分組中的表達(dá) E-cad在頭頸部ACC篩狀型、管狀型(圖1E)及實(shí)體型(圖1F)患者中的表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.119,P=0.000)，兩兩比較發(fā)現(xiàn)實(shí)體型中的表達(dá)較篩狀型及管狀型明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在篩狀型與管狀型中的表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。E-cad在頭頸部ACC臨床Ⅲ～Ⅳ患者中表達(dá)比臨床Ⅰ～Ⅱ期患者減少，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.239,P=0.029)。E-cad在頭頸部ACC有神經(jīng)癥狀患者中的表達(dá)比無神經(jīng)癥狀患者中的表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.454，P=0.001);在有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)比無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.433,P=0.018)。見表1。

Ep-CAM在頭頸部ACC的篩狀型、管狀型(圖1G)和實(shí)體型(圖1H)患者中的表達(dá)情況3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.240,P=0.004)。經(jīng)兩兩比較發(fā)現(xiàn)，實(shí)體型中表達(dá)較篩狀型及管狀型明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在篩狀型與管狀型中的表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Ep-CAM在頭頸部ACC臨床Ⅲ～Ⅳ期患者中的表達(dá)比臨床Ⅰ～Ⅱ期患者增加，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.489，P=0.001)。Ep-CAM在頭頸部ACC有神經(jīng)癥狀患者中的表達(dá)比無神經(jīng)癥狀患者中的表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.222,P=0.002)，Ep-CAM在頭頸部ACC有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)比無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.830,P=0.006)。見表1。

2.3 頭頸部ACC中E-cad及Ep-CAM表達(dá)的相關(guān)性分析 采用Pearson相關(guān)分析顯示，頭頸部ACC中E-cad蛋白與Ep-CAM蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.890,P=0.000)。

3 討 論

E-cad屬于CAM的鈣黏素族，可見于所有的上皮細(xì)胞中，其在維持上皮細(xì)胞極性和穩(wěn)定性中起重要作用。E-cad的缺失，破壞了相鄰細(xì)胞間正常的黏附，導(dǎo)致惡性細(xì)胞從上皮細(xì)胞層中分離，并且直接影響與腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號通路，比如激活經(jīng)典的Wnt信號通路、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)信號通路等，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[3]。因此，E-cad是上皮性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的決定性因子，E-cad基因又被認(rèn)為是腫瘤侵襲抑制基因[4]。大量研究發(fā)現(xiàn)，E-cad的表達(dá)較少、缺失和表達(dá)異常與胃癌、乳腺癌、鼻咽癌、喉癌等的侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[5-6]。本研究發(fā)現(xiàn)，E-cad在正常腺體組織中大量表達(dá)。在頭頸部ACC組織中，E-cad表達(dá)缺失或者表達(dá)紊亂，實(shí)體型中E-cad的表達(dá)較其他兩型明顯降低，特別是在實(shí)體型形成的大小不一的癌巢中，基本無E-cad的表達(dá)。E-cad的表達(dá)在頭頸部ACC臨床Ⅲ～Ⅳ期和有神經(jīng)癥狀及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者中表達(dá)明顯降低，說明E-cad表達(dá)越低的頭頸部ACC分期越晚，越容易出現(xiàn)神經(jīng)癥狀及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，即惡性程度越高。因此E-cad在頭頸部ACC的惡性進(jìn)展中起重要作用，E-cad可能具有抑制頭頸部ACC發(fā)生、發(fā)展的作用。

Ep-CAM是一類在多數(shù)上皮細(xì)胞中表達(dá)的非鈣離子依賴性CAM，屬于未分類的CAM家族。Ep-CAM具有與免疫球蛋白超家族相似的生物功能，卻缺乏與免疫球蛋白功能區(qū)類似的結(jié)構(gòu)。Ep-CAM表達(dá)在大多數(shù)的正常上皮組織、良性惡性增生組織及胚胎組織中，惡性上皮腫瘤組織中表達(dá)呈強(qiáng)陽性[7]。參與細(xì)胞增殖分化、黏附、信號傳導(dǎo)等過程，能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，且可能與E-cad的缺失相關(guān)。Ep-CAM可能是通過激活經(jīng)典的Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等途徑，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[8]。如果能抑制Ep-CAM的高表達(dá)，可能對阻止ACC的惡性進(jìn)展及侵襲轉(zhuǎn)移起重要作用。Went等[9]研究發(fā)現(xiàn)Ep-CAM在基本上所有的腺癌中高表達(dá)，如胰腺癌、乳腺癌等。本研究發(fā)現(xiàn)，Ep-CAM在正常腺體中低表達(dá)，在頭頸部ACC中高表達(dá)，在實(shí)體型、臨床Ⅲ～Ⅳ期、有神經(jīng)癥狀及有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的頭頸部ACC患者中的表達(dá)明顯增高。通過對Ep-CAM的檢測，能評估頭頸部ACC患者的惡性程度。如果能抑制Ep-CAM的高表達(dá)，可能對阻止頭頸部ACC的惡性進(jìn)展及侵襲轉(zhuǎn)移起重要作用。目前，針對Ep-CAM的免疫治療已在一些腫瘤中開展，并且被證明能降低腫瘤患者的病死率[10]。希望通過對Ep-CAM的研究，能為頭頸部ACC的免疫治療提供幫助。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)指發(fā)生在胚胎發(fā)育和傷口愈合過程中的一種細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)換，近年來發(fā)現(xiàn)EMT與腫瘤的惡性進(jìn)程有關(guān)。有研究者發(fā)現(xiàn)E-cad、Ep-CAM、整合素αvβ6均與EMT有密切關(guān)系，這些CAM的變化參與了EMT的發(fā)生[11]。E-cad減少，使細(xì)胞間的緊密連接被破壞，腫瘤細(xì)胞獲得侵襲性及轉(zhuǎn)移性，這是EMT發(fā)生的重要標(biāo)志之一[12-13]。E-cad及Ep-CAM在頭頸部ACC中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，推測在頭頸部ACC的惡性進(jìn)程中，可能出現(xiàn)E-cad及Ep-CAM這兩種CAM相互拮抗的作用。E-cad及Ep-CAM可能是通過EMT這一途徑在頭頸部ACC的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中起作用。

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Expression of E-cad and Ep-CAM in head and neck adenoid cystic carcinoma and its clinical significance*

LiLeiji1,ZhangDi1,QinGang1,XiangLan1,LiuYuehua1,ZhuLin1,LuoWenlong2

(1.DepartmentofOtolaryngologyAffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege,Luzhou,Sichuan646000,China；2.DepartmentofOtolaryngologyHeadandNeckSurgery,theSecondHospitalAffiliatedtoChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)

ObjectiveTo study the expression of E-cad,Ep-CAM in head and neck ACC and clarify its role and in the malignant progress,invasion and metastasis of ACC.MethodsThe expression of E-cad and Ep-CAM in 60 cases of head and neck ACC specimens and 30 cases of normal gland tissues were detected by immunohistochemistry EnVision method.The result of immunohistochemistry was conducted by the Image-Pro Plus 6.0 image analysis system.ResultsThe expression of E-cad in head and neck ACC was statistically significant lower than that in normal gland tissue(P<0.05).The expression of Ep-CAM in head and neck ACC was statistically significant higher than that in normal gland tissue(P<0.05).The decreasing expression of E-cad in head and neck ACC was closely related to the different pathological patterns,clinical stages,neurological symptom and local recurrences or distant metastases(P<0.05).The high expression of Ep-CAM in head and neck ACC was closely related to the different pathological patterns,clinical stages,neurological symptoms and local recurrences or distant metastases(P<0.05).There was a negative correlation about the expression between E-cad and Ep-CAM in head and neck ACC(r=-0.890,P=0.000).ConclusionE-cad may act as a inhibitor in the occurrence and development of ACC.The higher expression of Ep-CAM in head and neck ACC showed that ACC had a more poorer prognosis.

E-cad;Ep-CAM;adenoid cystic carcinoma;immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.27.005

四川省衛(wèi)生廳立項(xiàng)課題(07107)；重慶市衛(wèi)生局重點(diǎn)項(xiàng)目(2012-1-041)。

：李雷激(1968-)，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事顯微耳神經(jīng)及面神經(jīng)損傷修復(fù)的研究?！?/p>

，E-mail：lileiji0301@163.com。

R739.65

A

1671-8348(2015)27-3759-03

2015-03-07

2015-06-08)