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    煅石膏外用對急性軟組織損傷的治療作用及其機制研究*

    2015-01-05 00:32:44李心亮李劉月平李若存謝芳一
    中國中醫(yī)急癥 2015年7期
    關(guān)鍵詞:石膏低劑量證候

    李心亮李 珂△劉月平李若存謝芳一

    (1.湖南省中醫(yī)藥研究院,湖南 長沙 410006;2.湖南省兒童醫(yī)院,湖南 長沙 410007)

    ·研究報告·

    煅石膏外用對急性軟組織損傷的治療作用及其機制研究*

    李心亮1李 珂1△劉月平2李若存1謝芳一1

    (1.湖南省中醫(yī)藥研究院,湖南 長沙 410006;2.湖南省兒童醫(yī)院,湖南 長沙 410007)

    目的觀察煅石膏對實驗性急性軟組織損傷模型大鼠的治療作用并對其可能存在的作用機制進行研究。方法采用砝碼自由落體運動制備大鼠急性軟組織損傷模型,分組給藥后,在給藥后1、4、7 d分別處死動物,動態(tài)檢測大鼠損傷癥候指數(shù)并測定給藥后不同時間血清白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、前列腺素2(PGE2)的水平改變。結(jié)果煅石膏、扶他林軟膏均能顯著改善模型大鼠損傷證候指數(shù),與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義。煅石膏能夠顯著降低急性軟組織損傷大鼠模型血清中IL-1、IL-6、PGE2水平,與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論煅石膏具有較好的活血化瘀、抗炎消腫等功效,能夠顯著改善急性軟組織損傷的腫脹、瘀斑,促進軟組織的修復與再生,其作用機制可能與抑制IL-1、IL-6等炎性因子及抑制PGE2的生成有關(guān)。

    煅石膏 急性軟組織損傷 外用 炎性因子 大鼠

    煅石膏為石膏的炮制品,收載于2010版《中國藥典》,功能為收濕、生肌、斂瘡、止血。臨床除外用治療瘡瘍不斂、濕疹瘙癢、水火燙傷和外傷出血外,對于骨折、軟損傷引起的紅、腫、熱、痛等癥狀,局部外用有確切的療效,已在臨床得到廣泛的應(yīng)用[1-2],但其藥效學及作用機制未見報道。本實驗通過復制大鼠軟組織損傷模型,觀察了煅石膏對急性軟組織損傷的治療作用,采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測煅石膏干預(yù)后急性軟組織損傷模型大鼠血清白細胞介素-1(IL-1)、白細胞介素-6(IL-6)及前列腺素2(PGE2)的影響對其可能存在的軟組織損傷的機制進行研究,為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 動物 健康清潔級SD大鼠60只,體質(zhì)量180~ 220 g,雌雄各半。購自湖南長沙斯萊克景達動物實驗公司,實驗前適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d。

    1.2 藥物及試劑 煅石膏用大豆油(6.6∶3.4)配制,由湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所課題組提供,生產(chǎn)批號:20131026。雙氯芬酸由北京諾華制藥有限公司生產(chǎn),每支20 g,批號X4447,購自長沙永康堂大藥房。IL-1 ELISA試劑盒,美國RD公司,批號:DZE30418。IL-6 ELISA試劑盒,美國RD公司,批號:DZE30646。PGE2ELISA試劑盒,美國RD公司,批號:DZE30446。

    1.3 分組與造模 參考文獻 [3]的方法造模。采用10%硫化鈉溶液脫除大鼠的小腿部鼠毛,用自制撞擊器,質(zhì)量160 g,固定高度,撞擊接觸面直徑0.8 cm在大鼠小腿中部外側(cè)連續(xù)打擊7次,造成局部軟組織挫傷模型。造模成功后將動物隨機分為模型對照組,陽性組(予雙氯芬酸0.75 g/kg)、煅石膏低劑量組(0.15 g/kg)和高劑量組(0.75 g/kg),另設(shè)空白對照組,每組12只動物。其中模型對照組與空白對照組不作處理,其余各組給予相應(yīng)的藥物,每天換藥1次,共給藥7 d。分別于給藥后1、4、7 d各組隨機選取4只動物10%水合氯醛0.3 mL/kg麻醉后腹主動脈取血,3000 r/min離心15 min后取血清采用酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)檢測IL-1β、IL-6、PGE2水平的變化。

    1.4 觀察指標 損傷證候指數(shù)自造模后每天觀察傷肢腫脹和瘀斑等證候表現(xiàn),并分級評分。皮下瘀血:多量塊狀計2分,少量點狀計1分,無瘀血者計0分。肌肉腫脹:明顯腫脹計2分,稍有腫脹計1分,無腫脹者計0分。皮膚顏色:紫暗色深計2分,暗紅色淺計1分,色澤正常計0分。血清IL-1、檢測采用ELISA方法測定,按操作說明書進行。

    1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理。計量資料以(±s)表示,多組間比較方差分析采用單因素分析。組間比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 煅石膏對急性軟組織損傷模型大鼠損傷證候的影響 見表1。大鼠經(jīng)過打擊造模后迅速出現(xiàn)腫脹、皮膚瘀斑及皮下出血現(xiàn)象,說明造模成功。與模型組比較,陽性組大鼠在給藥第3天后損傷證候指數(shù)顯著降低(P<0.01);煅石膏高劑量組大鼠在給藥第4天后損傷證候指數(shù)顯著降低(P<0.05或P<0.01);煅石膏低劑量組大鼠在給藥第6天后損傷指數(shù)顯著降低(P<0.01)。

    表1 各組急性軟組織損傷模型大鼠損傷證候指數(shù)比較(分,±s)

    表1 各組急性軟組織損傷模型大鼠損傷證候指數(shù)比較(分,±s)

    與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01。下同。

    組別 n 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d空白組 12 1.42±0.51 1.33±0.49 1.25±0.62 0.92±0.79 0.75±0.75 0.83±0.72 0.75±0.75模型組 12 5.42±0.51**5.00±0.74**4.42±0.51**3.92±0.51**3.25±0.45**3.00±0.60**2.17±0.39**陽性組 12 5.33±0.78 4.42±0.79 3.67±0.65△△3.00±0.74△△2.58±0.51△△2.00±0.60△△1.58±.051△△煅石膏高劑量組12 5.50±0.90 4.42±0.95 4.08±0.90 3.25±0.87△2.58±0.79△2.00±0.60△△1.58±0.51△△煅石膏低劑量組12 5.75±0.45 5.17±0.58 4.58±0.51 4.00±0.43 3.08±0.29 2.25±0.45△△1.50±0.52△△

    2.2 煅石膏對急性軟組織損傷模型大鼠IL-1水平的影響 見表2。與空白組比較,模型組大鼠血清IL-1水平在給藥后1、4、7 d均顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與模型組比較,陽性組、煅石膏高劑量組大鼠血清IL-1水平在1、4、7 d均顯著降低(P<0.01);煅石膏低劑量組大鼠血清IL-1水平在給藥后1、4、7 d有所降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    表2 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-1水平比較(pg/mL,±s)

    表2 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-1水平比較(pg/mL,±s)

    組別n 7 d空白組 12 195.4±27.1模型組 12 299.4±19.9**陽性組 12 244.4±20.7**△△1 d 4 d 190.8±25.4 201.5±30.39 315.8±29.9**376.3±34.6**280.8±25.5**△△324.6±22.1**△△煅石膏高劑量組 12 256.5±25.8**△△278.4±19.5**△△329.3±27.7**△△煅石膏低劑量組 12 300.3±30.2**△335.4±17.9**△288.8±24.7**△

    2.3 煅石膏對急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-6的影響 見表3。與空白組比較,模型組大鼠血清IL-6水平在給藥后1、4、7 d均顯著升高(P<0.01)。與模型組比較,陽性組大鼠在給藥4 d后血清IL-6水平顯著降低差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。煅石膏高劑量、煅石膏低劑量組大鼠在給藥7 d時血清IL-1水平顯著降低。

    表3 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-6水平比較(pg/mL,±s)

    表3 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-6水平比較(pg/mL,±s)

    組別n 7 d空白組 12 89.3±17.1模型組 12 235±15.4**陽性組 12 180.3±25.4**△△1 d 4 d 95.8±15.7 100.7±10.4 258.8±19.9**299.0±17.7**240.9±17.8**256.4±18.5**△煅石膏高劑量組 12 195.4±17.3**△△244.4±9.8**266.5±18.4**煅石膏低劑量組 12 255.7±14.6**273.9±28.4**210.5±20.3**△

    2.4 煅石膏對急性軟組織損傷模型大鼠血清PGE2的影響 見表4。與空白組比較,模型組大鼠給藥1、4、7 d血清PGE2水平均顯著升高(P<0.01)。與模型組比較,陽性組、煅石膏高劑量組、煅石膏低劑量組大鼠給藥1、4、7 d后血清PGE2水平均有所降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。

    表4 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清PGE2水平比較(pg/mL,±s)

    表4 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清PGE2水平比較(pg/mL,±s)

    組別n 7 d空白組 12 195.7±17.5模型組 12 350.4±35.5**陽性組 12 284.6±19.9**△△1 d 4 d 198.6±8.1 201.7±14.4 355.9±26.4**438.8±34.7**299.9±24.1**△△359.5±20.2**△△煅石膏高劑量組 12 276.5±25.4**△△305.4±19.8**△△330.3±27.9**△△煅石膏低劑量組 12 320.6±28.5**△367.8±32.3**△△300.7±22.5**△

    3 結(jié) 論

    急性軟組織損傷的發(fā)病機制主要是局部損傷后炎癥介質(zhì)滲出,組織缺氧及酸性物質(zhì)堆積,破壞細胞有氧呼吸功能氧化磷酸化進程受阻,致ATP生成下降或終止,最終導致組織傷害[4]。其主要治療方法是抗炎止痛。中醫(yī)學認為急性軟組織損傷屬于“筋傷”范疇,是指多因外力強烈作用而引起的筋肉、脈絡(luò)損傷、血溢脈外、氣血凝滯等病證,其主要病機是氣滯血瘀、脈絡(luò)不通[5],其治療主要以消腫止痛、疏通筋絡(luò)、活血化瘀等。本實驗的結(jié)果顯示煅石膏能夠顯著改善急性軟組織損傷大鼠模型證候積分,對軟組織對大鼠軟組織損傷模型有較顯著的治療作用。

    現(xiàn)代醫(yī)學認為急性軟組織損傷的關(guān)鍵是炎性介質(zhì)促進炎性反應(yīng)導致。IL-1β是白介素1家族中的一個亞型,研究顯示在急性軟組織損傷過程中IL-1β主要是促進炎性反應(yīng)導致機體發(fā)熱[6]。另有研究顯示IL-1β的釋放與軟組織損傷的疼痛相關(guān)[5]。本實驗結(jié)果顯示,大鼠急性軟組織損傷后血液內(nèi)IL-1β含量迅速上升,煅石膏能夠有效降低其血液中IL-1β含量,說明其治療軟組織損傷的作用機制可能與抑制IL-1β釋放,抑制炎性反應(yīng),緩解疼痛有關(guān)。

    IL-6是一種具有多生物效應(yīng)的細胞因子,是反應(yīng)炎癥和組織損傷程度的重要指標[7]。其在炎癥反應(yīng)中占據(jù)重要地位。在急性軟組織損傷的初期IL-6會迅速升高,而康復治療過程中治療藥物的干預(yù)可對升高的IL-6含量產(chǎn)生抑制作用[8]。抑制急性軟組織損傷引起的IL-6的升高能夠促進淤血消退,有利于肌纖維的修復[9]。本實驗的結(jié)果顯示煅石膏能夠抑制急性軟組織損傷引起的IL-6升高可能是其消腫散瘀作用機制的重要方面。

    PGE2是機體在各類生理病理反應(yīng)中由花生四烯酸在環(huán)氧化酶的作用下產(chǎn)生的一種具有多種生物活性的代謝產(chǎn)物,是一種重要的炎癥物質(zhì),大量研究證實,在炎癥早起PGE2處于高表達狀態(tài),可導致局部紅、熱和組織腫脹。通過抑制急性損傷期PGE2的含量可加速損傷組織炎癥的消退與組織的修復[10]。本實驗結(jié)果顯示煅石膏能夠抑制急性軟組織損傷早期PGE2的表達,說明其治療急性軟組織損傷的消腫散瘀作用機制與抑制PGE2的表達有關(guān)。

    綜上所述煅石膏具有活血化瘀、消腫止痛的功效,治療急性軟組織損傷療效確切,其作用機制可能是通過減少炎性因子IL-1β的釋放,抑制炎性介質(zhì)IL-6的升高及降低PGE2的表達等方面減輕炎癥反應(yīng),加速瘀血消退與促進組織修復而達到治療急性軟組織損傷的目的。

    [1] 神油澤.外敷“白藥膏”治療骨折及軟組織扭挫傷[J].按摩與導引,1995,1(3):21-22.

    [2] 何寶凝.白藥膏的質(zhì)量標準研究[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育,2012,10(3):144-145.

    [3] 朱春城,彭力平,謝增軍.中藥外敷治療急性軟組織損傷的動物實驗研究進展[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(14):298-301.

    [4] 姜鵬飛,王培民.急性軟組織損傷中醫(yī)外治的研究現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥導報,2009,1(6):86-87.

    [5] 瞿億明.傷痛寧搽劑對大鼠急性軟組織損傷IL-1β、IL-6和PGE2影響的實驗研究[D].恩施:湖北民族學院,2014.

    [6] 何朝勇,李楠,陳麗華,等.奇正消痛貼治療急性軟組織損傷實驗研究[J].中醫(yī)正骨,2008,20(11):9-10.

    [7] 樂海浪,羅國強.創(chuàng)傷后早期炎癥因子TNF-α、IL-1、IL-6的研究進展[J].現(xiàn)代診斷與治療,2014,(4):763-765.

    [8] 羅宗鍵,邸琳,冷向陽.丹歸消腫膏對急性軟組織損傷大鼠PGE2、IL-6的影響[J].中國醫(yī)藥指南,2011,9(36):62-63.

    [9] 陳超,杜建海,張幼怡.β腎上腺素受體經(jīng)cAMP/Epac/PKC信號通路介導心肌成纖維細胞分泌IL-6[C]//中國病理生理學會全國代表大會及學術(shù)會議,2010.

    [10]金曉東,張鳴.紅花注射液對兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織學及關(guān)節(jié)滑液PGE2、IL-8的影響[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志,2009,2(3):18-19.

    Experimental Study on the Effect of Plaster of Paris on Acute Soft Tissue Injury and its Mechanism

    LI Xinliang1,LI Ke1,LIU Yueping2,et al. 1 The Hunan Research Institute of Chinese Traditional Medicine,Hunan,Changsha 410006,China;2 Hunan Children′s Hospital,Hunan,Changsha 410007,China

    Objective:To explore the effect and mechanisms of Plaster of paris on acute soft tissue injury.Method:Acute soft tissue injury models in SD rats were established and divided into 4 groups with administrated locally Plaster of paris or voltaren.The indexes of syndrome,plasma,and the levels of IL-1β,IL-6 and PGE2were measured in dynamic style.Results:The results showed that,compared with the model group,Plaster of Paris could improve the symptoms of swelling,bruising and dysfuction(P<0.05 or P<0.01),and significantly inhibit the levels of IL-1β,IL-6 and PGE2(P<0.05 or P<0.01).Conclusion:Plaster of paris has an effect on activating blood dissolving stasis and analgesia,and can significantly improve the swelling,bruising and other symptoms of acute soft tissue injury.The mechanism may related to the inhibition of the levels of IL-1β,IL-6 and PGE2.

    Plaster of paris;Acute soft tissue injury;Extenal application;Inflammatory factors;Rats

    R274.3

    A

    1004-745X(2015)07-1176-03

    10.3969/j.issn.1004-745X.2015.07.017

    2015-03-16)

    湖南省中醫(yī)藥研究院院級課題(廳級)(201417)

    △通信作者(電子郵箱:303962549@qq.com)

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