中藥有效成分防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展*

吳霜霜戚益銘沈敏鶴，2△阮善明，2馮 波方芝嬪

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，浙江 杭州 310053；2.浙江省中醫(yī)院，浙江 杭州310006）

·綜 述·

中藥有效成分防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展*

吳霜霜1戚益銘1沈敏鶴1，2△阮善明1，2馮 波1方芝嬪1

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，浙江 杭州 310053；2.浙江省中醫(yī)院，浙江 杭州310006）

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎 中藥有效成分 研究進(jìn)展

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是一種急性風(fēng)濕性疾病，常由尿酸鹽結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)囊、滑囊、軟骨、骨質(zhì)和其他組織中而引起病損及炎性反應(yīng)［1-2］。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性發(fā)作期通常用非甾體類抗炎藥、秋水仙堿和糖皮質(zhì)激素治療，其引起的皮疹、水腫、腹瀉、胃腸道出血、心肌梗死、慢性腎乳頭壞死及致死性超敏綜合征等副作用以及痛風(fēng)患者自身常伴隨的腎、心血管、胃腸道疾病及糖尿病都限制了西藥的臨床使用［2-3］。中醫(yī)文獻(xiàn)有對(duì)痛風(fēng)病因病機(jī)及方藥辨治的記載，中藥因高效低毒的天然優(yōu)勢得到了近代諸多學(xué)者的青睞。體外研究表明，黃酮類、生物堿、酚類化合物、單寧酸、環(huán)烯醚萜苷和香豆素能通過抑制黃嘌呤氧化酶發(fā)揮抗痛風(fēng)作用，而三萜類、葉黃素、木脂素則通過抗炎作用發(fā)揮療效。動(dòng)物研究表明，生物堿能抑制尿酸形成，酚類化合物和黃酮類化合物不僅能抑制尿酸形成，還可促進(jìn)尿酸排泄發(fā)揮抗炎作用［4］。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是痛風(fēng)的主要表現(xiàn)形式之一，中藥有效成分直接作用于痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的研究尚處于起步階段，相關(guān)研究較少。本文就中藥有效成分直接防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究及其機(jī)制綜述如下，以期為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究及臨床用藥提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 黃酮類化合物

1.1 槲皮素 黃敬群等將雄性SD大鼠48只隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，吲哚美辛（3.0 mg/kg）組和槲皮素（100、200、400 mg/kg）組，每天給藥1次，連續(xù)7 d。第5日給藥后1 h采用大鼠右后肢踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射注入3.0%尿酸鈉溶液100 μL制備急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，造模后2、4、8、12、24、48 h用縛線法測量右后肢小腿踝關(guān)節(jié)同一部位周徑，酶聯(lián)免疫吸附法、比色法等測定大鼠血清、肝臟和滑膜中炎癥因子 （IL-1β、TNF-α、PGE2）含量、脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物（MDA）水平和抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)槲皮素能夠顯著抑制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度，抑制炎癥因子IL-1β，TNF-α，PGE2含量，降低機(jī)體脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物MDA水平，提高機(jī)體抗氧化酶SOD，GSH-Px，CAT活性，從而通過抗炎和抗氧化作用治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎［5］。

1.2 落新婦苷 劉二剛等將56只雄性大鼠隨機(jī)平均分為空白組、模型組、秋水仙堿組和落新婦苷組，向大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射60 μL尿酸鈉混懸液誘導(dǎo)炎癥，建立痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)落新婦苷可顯著抑制尿酸鹽引起的大鼠關(guān)節(jié)腫脹，促進(jìn)大鼠炎癥部位抗炎因子IL-4的表達(dá)，并促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化［6］。落新婦苷抑制模型動(dòng)物關(guān)節(jié)腫脹的機(jī)制可能為：藥物可以抑制Th1型細(xì)胞的分化，從而抑制了Th1型細(xì)胞因子如IFN-γ、IL-1、IL-6等的表達(dá)；同時(shí)細(xì)胞可產(chǎn)生抗炎因子如IL-4、IL-10等，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)炎癥和腫脹的抑制。

1.3 白藜蘆醇 王鵬選取Wista大鼠36只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、秋水仙堿組、白藜蘆醇低劑量組、白藜蘆醇中劑量組、白藜蘆醇高劑量組，連續(xù)灌胃7 d（每日1次）。模型組及各實(shí)驗(yàn)組于灌胃第4日注射25 g/mL（0.05 mL）的尿酸鹽溶液到大鼠踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)，制備急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，正常對(duì)照組大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射生理鹽水0.05 mL，72 h后留取踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液及關(guān)節(jié)滑膜，應(yīng)用ELISA法觀察關(guān)節(jié)液中IL-1β、CXCL10的變化。關(guān)節(jié)滑膜用10%甲醇固定待做病理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與模型組比較，白藜蘆醇能顯著降低關(guān)節(jié)液中IL-1β、CXCL10水平（P＜0.05）。病理結(jié)果顯示，白藜蘆醇可減輕急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)組織的水腫和炎性細(xì)胞浸潤。這提示白藜蘆醇可有效抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作，其機(jī)制與降低關(guān)節(jié)液中IL-1β、CXCL10水平相關(guān)，且該作用呈一定的劑量依賴性［7］。

2 香豆素類化合物

趙軍寧等用微晶型尿酸鈉誘導(dǎo)小鼠足拓腫脹和家兔急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，觀察灌胃給予秦皮總香豆素對(duì)足拓腫脹程度、關(guān)節(jié)液及滑膜組織的影響。用正常小鼠以及腹腔注射黃漂吟造成的高血尿酸模型小鼠，觀察灌胃給予秦皮總香豆素對(duì)血尿酸代謝的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)秦皮總香豆素20、40、80、160 mg/kg劑量組可顯著抑制關(guān)節(jié)腫脹和減少關(guān)節(jié)腔積液量。關(guān)節(jié)囊組織病理學(xué)觀察可見：模型組滑膜組織表層可見明顯充血水腫，滑膜細(xì)胞可見變性，甚至壞死，伴有淋巴細(xì)胞、中性白細(xì)胞浸潤，秦皮總香豆素所試劑量范圍可以顯著減輕上述病理改變，且秦皮總香豆素對(duì)正常小鼠血尿酸以及高尿酸小鼠血尿酸均有顯著降低作用［8］。

曹世霞將雄性Wistar大鼠90只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、陽性組（秋水仙堿組）、秦皮（440 mg/kg）、中（220 mg/kg）、低（110 mg/kg）高劑量，采用先給干預(yù)性藥物4 d，然后尿酸鈉關(guān)節(jié)內(nèi)注射造模法致痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，72 h后取大鼠血清，應(yīng)用ELISA法測定IL-1B、IL-8、TNF-α的含量。結(jié)果表明秦皮總香豆素能夠顯著抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1B、IL-8和TNF-α的表達(dá)，其作用與秋水仙堿相近［9］。

3 皂苷類化合物

3.1 牛膝總皂苷 項(xiàng)崢采用單因素考察及正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確立牛膝總皂苷最佳提取工藝，利用大孔吸附樹脂法對(duì)牛膝有效成分進(jìn)行純化，并以大鼠足腫脹為指標(biāo)，對(duì)純化后的牛膝總皂苷治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)牛膝總皂苷提取物灌胃給藥 （生藥劑量8 g/kg，每日1次，連續(xù)給藥3 d），可明顯緩解由弗氏完全佐劑引起的大鼠足趾腫脹，但其具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究［10］。

3.2 穿山龍總皂苷 薛劍等將60只清潔級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、穿山龍總皂苷高、中、低劑量組和陽性藥吲哚美辛組。穿山龍總皂苷和吲哚美辛于造模前3 d開始連續(xù)給藥，每24小時(shí)1次；正常組和模型組同時(shí)灌胃生理鹽水。從給藥第3日開始，灌胃給藥1 h后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉后雙側(cè)膝關(guān)節(jié)注射MSU混懸液造模。連續(xù)給藥7 d，造模5 d。采用β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性檢測試劑盒檢測肝組織中的β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)穿山龍總皂苷可通過對(duì)β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性的調(diào)節(jié)，即溶酶體酶的調(diào)節(jié)作用達(dá)到治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的目的［11］。

周琦等將40只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、穿山龍總皂苷低（40 mg/kg）、高劑量組（160 mg/kg），連續(xù)灌胃穿山龍總皂苷5 d。第3日灌胃穿山龍總皂苷1 h后，膝關(guān)節(jié)上方髕上韌帶注射0.2 mL質(zhì)量濃度為25 mg/mL的微晶尿酸鈉結(jié)晶混懸液到關(guān)節(jié)腔，造成實(shí)驗(yàn)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。采用HE和伊紅染色觀察關(guān)節(jié)滑膜組織病理學(xué)變化，免疫組化法檢測膝關(guān)節(jié)滑膜組織中IL-1β、SDF-1、CXCR4、PI3K、PKC和NF-κB表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)穿山龍總皂苷高劑量組能顯著降低IL-1β、CXCR4、PI3K、PKC和NF-κB表達(dá)水平，通過抑制IL-1β及其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路緩解痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎［12］。

4 酚酸類化合物

Liu X等將60只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、紫草酸低（10 mg/kg）、中（20 mg/kg）、高劑量（30 mg/kg），吲哚美辛組（20 mg/kg）。通過大鼠右足足墊注射尿酸鈉結(jié)晶混懸液0.2 mL（3 mg）造模痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，并在造模前1 h灌胃紫草酸及吲哚美辛，分別測定造模前及造模后1、2、4、6 h大鼠右足掌直徑。結(jié)果表明紫草酸可有效抑制足掌腫脹程度，并呈劑量依賴性，其抑制尿酸鈉所致實(shí)驗(yàn)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的主要機(jī)制與抑制過氧化物的產(chǎn)生以及直接清除過氧化物，從而抑制過氧化物介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)相關(guān)［13］。

5 胺類化合物

符濤等將50只SPF級(jí)健康Wistar大鼠隨機(jī)分為模型組、別嘌醇陽性對(duì)照組及辣椒素高、中、低劑量組，每組10只，共5組。各組分別按10 mL/kg灌胃生理鹽水、別嘌醇及辣椒素高（0.15 mg/mL）、中（0.10 mg/mL）、低劑量（0.05 mg/mL）溶液，每日2次，連續(xù)給藥3 d。末次給藥1 h后，通過足跖皮下注射0.1 mL的5%尿酸鈉混懸溶液建立大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。測定造模前及造模后1 h大鼠足跖容積，檢測血清IL-1β、TNF-α，觀察足跖關(guān)節(jié)病理組織學(xué)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)辣椒素能顯著抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠關(guān)節(jié)腫脹度，并呈劑量相關(guān)性，能有效減輕尿酸鈉結(jié)晶誘導(dǎo)的炎癥因子1L-1β、TNF-α水平，作用效果與別嘌醇相當(dāng)［14］。

6 結(jié) 語

綜上所述，黃酮類化合物主要通過抗炎和抗氧化作用發(fā)揮療效；香豆素類化合物主要以降低尿酸及抗炎作用為主；皂苷類化合物主要通過抗炎作用發(fā)揮療效；酚酸類化合物主要以抑制氧化物的產(chǎn)生及直接清除氧化物等抗氧化作用為主；胺類化合物主要以抗炎作用發(fā)揮療效。此外，中醫(yī)臨證經(jīng)驗(yàn)表明葛根、土茯苓與萆薢在臨床上抗痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎療效較好［15-16］。實(shí)驗(yàn)研究證明，紅茴香根皮、雞矢藤的醇提物，葛根的水提物以及虎杖提取物等具有抗實(shí)驗(yàn)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用［17-20］；同時(shí)臨床研究顯示注射用燈盞花素、大血藤外敷輔助治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎效果顯著［21-22］。但中藥存在作用靶點(diǎn)多、藥物成分復(fù)雜、提取物純化工藝難度大等問題［23］，多數(shù)中草藥的有效成分、作用部位及作用機(jī)制的研究尚處于起步階段，仍未取得突破性進(jìn)展。

上述實(shí)驗(yàn)研究的動(dòng)物模型主要以反應(yīng)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病理特點(diǎn)為主，無法全面反映臨床上常見的慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎以及繼發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，故痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建待進(jìn)一步改進(jìn)和完善。從整體來看，實(shí)驗(yàn)研究的開展尚且存在較大障礙，如中藥有效成分的提取方法多種多樣，樣本純度得不到保證，實(shí)驗(yàn)條件無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)以及模型構(gòu)建方法不一致，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的準(zhǔn)確性無法確保。且到目前為止，中藥有效成分防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究多為動(dòng)物研究，研究對(duì)象以Wistar大鼠及家兔為主，臨床研究甚少。上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)雖能表明槲皮素、落新婦苷、白藜蘆醇、穿山龍總皂苷等成分的有效性，但無法確切模擬人體多因素綜合的代謝機(jī)制，仍需要在大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，開展多中心、大樣本的臨床研究。為更好地指導(dǎo)臨床用藥和中藥新藥的開發(fā)，未來研究不僅要完善實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?、研究?biāo)準(zhǔn)、提取工藝，更要在臨床研究上全面剖析安全性與作用機(jī)制。

［1］ Lu F，Liu L，Yu DH，et al.Therapeutic effect of rhizoma dioscoreae nipponicae on gouty arthritis based on the SDF-1/ CXCR 4 and p38 MAPK pathway：an in vivo and in vitro study［J］.Phytother Res，2014，28（2）：280-288.

［2］ Sébastien Ottaviani，Anna Moltó，Hang-Korng Ea，et al.Efficacy of anakinra in gouty arthritis：a retrospective study of 40 cases［J］.Arthritis Res Ther，2013，15（5）：R123.

［3］ 夏道宗，張英，呂圭源.黃酮類化合物防治高尿酸血癥和痛風(fēng)的研究進(jìn)展［J］.中國藥學(xué)雜志，2009，44（10）：721-723.

［4］ Ling X，Bochu W.A review of phytotherapy of gout：perspective of new pharmacological treatments［J］.Pharmazie，2014，69（4）：243-256.

［5］ 黃敬群，孫文娟，王四旺，等.槲皮素對(duì)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎抗炎抗氧化活性研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（2）：169-173.

［6］ 劉二剛.抗痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中藥的研究［D］.杭州：浙江大學(xué)，2012.

［7］ 王鵬，丁慧，孫曉方，等.白藜蘆醇對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的影響 （英文）［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，14（15）：2871-2874.

［8］ 趙軍寧，鄧治文，戴瑛，等.秦皮總香豆素對(duì)實(shí)驗(yàn)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及尿酸代謝的影響［J］.中國藥學(xué)雜志，2009，44（10）：751-754.

［9］ 曹世霞，祝捷，張三印，等.秦皮總香豆素對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型IL-1β、IL-8、TNF-α的影響［J］.四川中醫(yī)，2011，29（3）：68-70.

［10］項(xiàng)崢，楊欣欣，朱瑞卿，等.懷牛膝治療濕熱痹證有效成分提取及純化工藝研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2013，24（11）：2599-2602.

［11］薛劍，朱瑞琪，盧芳，等.穿山龍總皂苷對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠肝臟組織β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2014，42（4）：47-49.

［12］周琦，張寧，盧芳，等.穿山龍總皂苷對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)炎滑膜IL-1β及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響［J］.中藥藥理與臨床，2013，29（6）：52-57.

［13］Liu X，Chen R，Shang Y，et al.Lithospermic acid as a novel xanthine oxidase inhibitor has anti-inflammatory and hypouricemic effects in rats［J］.Chem Biol Interact，2008，176（2-3）：137-142.

［14］符濤，付玉梅，江慶萍，等.辣椒素對(duì)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用［J］.中藥材，2014，37（3）：491-494.

［15］宋永剛.《本經(jīng)》葛根功效釋義［N］.中國中醫(yī)藥報(bào)，2011-06-20004.

［16］徐翔峰，彭江云，肖泓，等.吳生元教授辨治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎經(jīng)驗(yàn)介紹［J］.新中醫(yī)，2012，44（4）：161-162.

［17］桂璇.紅茴香根皮的化學(xué)成分及抗痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的活性研究［D］.福州：福建中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

［18］馬穎，顏海燕，劉梅，等.雞矢藤提取物對(duì)尿酸鈉晶體誘導(dǎo)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎影響的研究［J］.中國藥房，2008，19（6）：411-414.

［19］馬越，呂圭源，陳素紅.葛根提取物抗痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎作用及機(jī)制初探［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，22（3）：241-244.

［20］張瑩.虎杖對(duì)家兔急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中 Caspase-3和PPAR-Y的影響［D］.咸陽：陜西中醫(yī)藥大學(xué)，2008.

［21］劉湘玲.注射用燈盞花素治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎34例臨床觀察［J］.中國中醫(yī)急癥，2009，18（8）：1271-1272.

［22］凌家艷，薛莎，沈霖.大血藤外敷配合中藥內(nèi)服治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎64例［J］.中國中醫(yī)急癥，2013，22（6）：1036-1037.

［23］何立麗，呂文良，孫桂芝.中藥提取物抗原發(fā)性肝癌的研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2014，29（4）：1175-1178.

R589.7

A

1004-745X（2015）07-1215-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.07.032

2015-01-25）

浙江省新苗人才計(jì)劃項(xiàng)目（2014R410057）

△通信作者（電子郵箱：shenminhe@aliyun.com）