平胃膠囊的小鼠急性毒理學(xué)研究*

毛蘭芳汪龍德劉俊宏張宏偉杜曉娟梁乾坤李云霞

（1.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730020；2.甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州大學(xué)，甘肅 蘭州 730000）

·研究報(bào)告·

平胃膠囊的小鼠急性毒理學(xué)研究*

毛蘭芳1汪龍德2△劉俊宏2張宏偉1杜曉娟1梁乾坤3李云霞3

（1.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730020；2.甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州大學(xué)，甘肅 蘭州 730000）

目的觀察平胃膠囊臨床用藥的安全性。方法以昆明小鼠40只隨機(jī)分為對照組和給藥組，每組20只，雌雄各半。給藥組給予平胃膠囊混懸液1 mL灌胃，對照組給予等量生理鹽水灌胃，各組每日均連續(xù)灌胃5次。灌胃結(jié)束后觀察一般情況和體質(zhì)量變化，連續(xù)觀察14 d后處死，檢測血清肝腎功能和臟器指數(shù)，采用HE染色鑒別兩組小鼠組織病理學(xué)差異。結(jié)果觀察期間給藥組小鼠均未出現(xiàn)中毒反應(yīng)及死亡，兩組小鼠體質(zhì)量、臟器指數(shù)均無明顯差異性變化（P＞0.05）；主要臟器大體標(biāo)本顏色、形態(tài)未見明顯異常改變，肝、腎、胃等組織HE染色無變性、炎癥、壞死等改變；兩組血清肝腎功能指標(biāo)無明顯差異（P＞0.05）。結(jié)論小鼠每日最大給藥量為150 kg/d，相當(dāng)于臨床每日用量的125倍（＞100倍），表明平胃膠囊臨床劑量服用安全。

平胃膠囊 急性毒理學(xué) 研究

平胃膠囊由宋代《太平惠民和劑局方》［1］中的平胃散加減化裁而來。臨床研究表明，平胃膠囊具有健脾燥濕、舒肝和胃、抑酸止痛的功效，能夠明顯改善上腹部疼痛、燒灼感、噯氣、惡心等癥狀，該藥用于治療消化性潰瘍、萎縮性胃炎及功能性胃腸病已取得了滿意的臨床療效［2-3］。為明確該藥物臨床用藥的安全性，對其進(jìn)行毒理學(xué)研究。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 SPF級昆明小鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物室提供，合格證號：SCKX（甘）2014-0001，動物飼料及消毒墊料來源同上。飼養(yǎng)于蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理所實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)室。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 平胃膠囊：甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院脾胃病科院內(nèi)制劑（批準(zhǔn)文號：甘藥制字Z120022224）。平胃膠囊內(nèi)容物為棕褐色粉末，氣微，味微苦，臨用前取膠囊內(nèi)容物研磨并用生理鹽水配制成最大濃度的混懸液，含生藥0.6 g/mL（以不堵塞灌胃器為限度）。

1.3 主要儀器 Beck man高速冷凍離心機(jī)、萊卡（Leila）切片機(jī)RM2235、全自動組織包埋機(jī)、Olympus倒置熒光顯微鏡BX-51、Image-Pro Plus 5.1（IPP5.1）圖像分析系統(tǒng)、NU-6613W34超低溫冰箱（美國產(chǎn)）、美國貝克曼Cx7全自動生化分析儀及灌胃器、燒杯、量筒、天平等。

1.4 分組及給藥 40只昆明小鼠經(jīng)環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用隨機(jī)數(shù)字表分為對照組和給藥組，每組20只，雌雄各半，用5%苦味酸標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)前小鼠均禁食（不禁水）12 h，給藥組給予平胃膠囊混懸液1mL灌胃，對照組給予等量生理鹽水灌胃。兩組均于1 d內(nèi)連續(xù)灌胃5次，每次間隔4.8 h，灌胃結(jié)束后不予再次灌胃。所有小鼠均在25℃室溫下常規(guī)飼養(yǎng)（自由攝食、飲水）14 d后處死。

1.5 標(biāo)本采集及檢測

1.5.1 一般檢查 飼養(yǎng)期間，每日觀察動物毛色、自主活動、精神狀態(tài)、瞳孔黏膜、毛發(fā)色澤、呼吸、尿液、進(jìn)食量、糞便性狀及顏色，觀察眼、鼻、外陰分泌物等，及時(shí)記錄體質(zhì)量、毒性反應(yīng)和死亡情況，連續(xù)觀察14 d。

1.5.2 血清肝腎功能檢測 動物處死前，先進(jìn)行股動脈取血，3000 r/min離心10 min，分離血清，測定尿素（BUN）、肌酐（CREA）、直接膽紅素（DBIL）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、谷氨酰胺基轉(zhuǎn)移酶（GGT）。

1.5.3 病理組織學(xué)檢查 14 d觀察期結(jié)束后處死小鼠，肉眼觀察小鼠主要臟器大體標(biāo)本形態(tài)、顏色的變化，將心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸臟器取出，除去瘀血、脂肪和結(jié)締組織等非臟器部分，用生理鹽水沖洗并用精密儀器測取其濕重，并計(jì)算臟器指數(shù) （臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量）。分別將給藥組和對照組小鼠心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸放入4%甲醛溶液中固定，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，觀察組織切片HE染色有無水腫、變性、壞死等情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，其中服從正態(tài)分布的兩組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組小鼠的一般急性毒理反應(yīng) 給藥后給藥組小鼠精神較對照組稍差，第2天進(jìn)食水量減少，行動稍有遲緩，第3天即恢復(fù)如常。連續(xù)觀察14 d，全部動物存活，活動自如，毛發(fā)光滑，大小便正常，飲食正常，體質(zhì)量增加，鼻、眼、口腔無異常分泌物，無特殊不良反應(yīng)，觀察14 d動物無死亡。見表1。給藥后兩組小鼠體質(zhì)量均增加，分析給藥后第7天及第14天兩組小鼠體質(zhì)量變化，發(fā)現(xiàn)雌性、雄性小鼠體質(zhì)量與對照組比較，均無顯著差異（P＞0.05），見表2。

表1 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)前后小鼠死亡觀察（n）

表2 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)前后體質(zhì)量比較（分，±s）

表2 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)前后體質(zhì)量比較（分，±s）

與本組給藥前比較，*P＜0.05。

組別 性別 給藥后14 d給藥前 給藥后7 d給藥組 雌性 40.87±1.78*（n＝20） 雄性 39.74±1.34*對照組 雌性 40.95±1.92*27.30±1.84 30.69±2.56*29.44±2.52 32.65±2.67*25.08±2.39 29.31±2.42*（n＝20） 雄性 41.23±1.61*27.13±1.33 33.92±1.90*

2.2 兩組血清肝腎功能比較 見表3，表4。通過血清肝腎功能測定，兩組小鼠血清肝腎功能組間均無明顯差異（P＞0.05）。

表3 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)血清肝功能指標(biāo)觀察比較（±s）

表3 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)血清肝功能指標(biāo)觀察比較（±s）

組別 n ALP（U/L）GGT（g/L）DBIL（μmol/L）給藥組 20 186.95±48.83 2.79±1.27 12.68±14.39對照組 20 198.25±57.70 3.63±2.06 12.75±13.48 ALT（U/L） AST（U/L）37.65±23.36 131.20±41.60 25.65±25.61 129.85±23.41

表4 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)?zāi)I功能指標(biāo)觀察比較（±s）

表4 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)?zāi)I功能指標(biāo)觀察比較（±s）

組 別 n BUN（mmol/L） Cr（μmol/L）給藥組 20 10.41±2.99 21.24±8.33對照組 20 10.43±1.31 21.77±4.43

2.3 兩組病理組織學(xué)檢查比較 見表5，表6。肉眼大體觀察兩組小鼠的心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸組織顏色、形態(tài)未見異常改變。兩組小鼠的臟器指數(shù)變化無明顯差異（P＞0.05）。

表5 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)臟器指數(shù)比較（±s）

表5 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)臟器指數(shù)比較（±s）

組別 肝脾給藥組 1.872±0.387 0.140±0.073對照組 1.639±0.298 0.108±0.193 n 心肺20 20 0.185±0.346 0.140±0.733 0.193±0.359 0.108±0.193

表6 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)臟器指數(shù)比較（±s）

表6 兩組小鼠急性毒性試驗(yàn)臟器指數(shù)比較（±s）

組別 大腸 小腸給藥組 0.221±0.110 0.514±0.206對照組 0.215±0.125 0.574±0.295 n 腎胃20 20 0.140±0.074 0.365±0.058 0.108±0.193 0.318±0.058

顯微鏡下觀察兩組小鼠肝、腎、胃等組織HE染色，鏡下見對照組肝組織中肝小葉形態(tài)如常，細(xì)胞未見改變，肝小葉中央靜脈及間質(zhì)小靜脈血管輕度擴(kuò)張充血，匯管區(qū)未見異常改變；給藥組肝組織與對照組對比，除肝小葉中央靜脈及間質(zhì)小靜脈血管輕度擴(kuò)張充血外，偶見小灶性肝細(xì)胞輕度水腫，但未見出血壞死及炎性改變。鏡下見對照組腎組織中腎小球及腎小管形態(tài)如常，細(xì)胞未見改變，間質(zhì)血管輕度擴(kuò)張充血；給藥組腎組織與對照組對比無顯著差異。鏡下見對照組胃組織黏膜層、黏膜下層、肌層及漿膜層形態(tài)如常，細(xì)胞未見改變，僅見黏膜下層血管輕度擴(kuò)張充血；給藥組胃組織與對照組對比無明顯改變。

圖1 兩組病理組織學(xué)切片圖（HE染色）

3 討 論

平胃膠囊組方中，蒼術(shù)燥濕醒脾運(yùn)脾為君藥?，F(xiàn)代藥理研究表明［4］，蒼術(shù)具有抗?jié)?、抗炎、抗菌、促進(jìn)胃腸運(yùn)動等作用。厚樸行氣消積除滿，為消除脹滿之要藥，現(xiàn)代研究證實(shí)了厚樸酚有明顯的抗炎作用，能有效地抑制急性炎癥疼痛，對胃潰瘍有防治作用，能夠調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動，抑制胃酸分泌［5］。陳皮功善理氣健脾，燥濕化痰，能辛開苦降，調(diào)理脾胃氣機(jī)；具有促進(jìn)胃排空，抑制胃腸平滑肌胃腸推進(jìn)運(yùn)動的作用，其中所含的甲基橙皮苷具有抗?jié)兊淖饔茫惼に鍎╋@著降低小鼠胃殘留率，并顯著提高小腸推進(jìn)率［6-7］。枳殼長于破氣消積，化痰除痞，為脾胃氣分藥。藥理研究表明［8］，枳殼調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動，促進(jìn)胃排空和加快腸蠕動，可松弛胃腸平滑肌痙攣性收縮，還具有抗炎的作用。枳殼對胃腸平滑肌呈雙相調(diào)節(jié)作用，既興奮胃腸，使其蠕動增強(qiáng)，又有降低胃腸平滑肌張力和解痙作用［9］。海螵蛸長于收澀，制酸止痛和胃，為治胃痛吐酸之佳品。海螵蛸所含的碳酸鈣能中和胃酸，促進(jìn)潰瘍面愈合，改變胃內(nèi)容物pH值，降低胃蛋白酶活性；海螵蛸所含膠質(zhì)與胃中的有機(jī)質(zhì)和胃液作用后，可在潰瘍面上形成保護(hù)膜，具有保護(hù)胃黏膜、抗?jié)兊淖饔茫?0］。木香具有改善胃腸功能，促進(jìn)膽囊收縮，抗炎癥，抗?jié)?，抗腫瘤等作用［11］。柴胡減少胃酸分泌，對胃黏膜保護(hù)作用、使內(nèi)源性胃動素分泌增加，從而引起胃排空及小腸推進(jìn)功能的增強(qiáng)、鎮(zhèn)痛及抗炎的作用［12］。赤芍有抗炎、抗腫瘤作用，亦能抑制胃酸分泌［13］。白及具有保護(hù)胃黏膜，抗菌抗癌的作用［14］。三棱及其提取物具有抗腫瘤、抗血栓、抑制血小板聚集和鎮(zhèn)痛等多種藥理活性［15］。雞內(nèi)金能改善胃黏膜層的炎癥及纖維化，可促進(jìn)消化液、酶分泌，還能促進(jìn)胃蠕動，幫助消化［16］。浙貝母具有鎮(zhèn)痛抗炎，活血化瘀，抗菌抗腫瘤作用［17］。黃連有抗菌抗炎、抗腫瘤作用［18］。蒲公英具有抗炎、抗癌作用［19］。延胡索鎮(zhèn)痛、抑酸、抗?jié)儯?0］。莪術(shù)具有抗腫瘤、抗血小板聚集、抗菌、抗病毒、抗白血病、抗癇、抗前列腺增生，促進(jìn)機(jī)體免疫力，改善胃動力等作用［21］。綜合全方，重在健脾利濕、制酸和胃為主，使?jié)駶岬没?，氣機(jī)調(diào)暢，脾氣健運(yùn)，胃和降，則諸癥自除。

本研究因以最大給藥濃度、最大給藥量實(shí)驗(yàn)，均無法測出半數(shù)致死量（LD50），故進(jìn)行小鼠的最大給藥量測定。結(jié)果表明14 d內(nèi)小鼠均未出現(xiàn)中毒反應(yīng)及死亡，兩組小鼠體質(zhì)量、臟器指數(shù)變化均無明顯差異（P＞0.05），且重要臟器無變性、炎癥、壞死等病理性改變。平胃膠囊懸濁液最大藥物容量為 0.6 g/mL，因此，小鼠每日5次用藥量為3 g/mL，成人標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量（60 kg）臨床用藥量為0.1 g/（kg·d），故小鼠最大用藥量為1.2 g/（kg·d），小鼠（體質(zhì)量按0.02 g計(jì)算）日累積用藥量為150 g/（kg·d），相當(dāng)于成人（體質(zhì)量按60 kg計(jì)算）臨床每日用藥量的125倍（＞100倍），表明平胃膠囊臨床劑量服用安全有效。

［1］ 太平惠民和劑局.太平惠民和劑局方［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：125-126.

［2］ 王寧，汪龍德.平胃膠囊治療脾胃濕熱型耐藥幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎療效觀察［J］.中國中醫(yī)藥信息，2011，18（12）：78-79.

［3］ 王四兵，汪龍德，劉曉燕.平胃膠囊治療慢性萎縮性胃炎伴腸化生45例［J］.中國中醫(yī)藥信息，2014，9（20）：75-76.

［4］ 陳炎明，陳靜，侴桂新.蒼術(shù)化學(xué)成分和藥理活性研究進(jìn)展［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，20（4）：95-97.

［5］ 張勇，唐方.厚樸酚藥理作用的最新研究進(jìn)展［J］.中國中藥雜志，2012，37（23）：3526-3530.

［6］ 歐立娟，劉啟德.陳皮藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2006，17（10）：787-788.

［7］ 王賀玲，李巖，白菡，等.理氣中藥對鼠胃腸動力的影響［J］.世界華人消化雜志，2004，12（5）：1136-1138.

［8］ 章斌，金劍，金芝貴.枳殼的藥理作用與臨床應(yīng)用進(jìn)展［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32（11）：1462-1464.

［9］ 徐歡，陳海芳，介磊，等.枳實(shí)、枳殼的化學(xué)成分及胃腸動力研究概述［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，21（1）：42-43.

［10］沈亞芬，沈金根，朱曙東.中藥海螵蛸藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國藥業(yè)，2010，19（10）：87-88.

［11］張旭，侯影，賈天柱.木香炮制歷史沿革及現(xiàn)代研究進(jìn)展［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，14（4）：36-39.

［12］王曉南，高鵬，劉文娟，等.柴胡在消化系統(tǒng)疾病中應(yīng)用現(xiàn)狀［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2008，2（20）：114-115.

［13］冀蘭鑫，黃浩，李長志，等.赤芍藥理作用的研究進(jìn)展［J］.藥物評價(jià)研究，2010，33（3）：233-235.

［14］韓廣軒，孫義華，羅曉靜.中藥白及藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展［J］.藥學(xué)實(shí)踐雜志，2004，22（4）：10-12.

［15］董學(xué)，姚慶強(qiáng).中藥三棱的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展［J］.齊魯藥事，2005，24（10）：613-615.

［16］汪巖，王月珍，馬千里，等.中藥雞內(nèi)金研究進(jìn)展［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2014，19（3）：10-12.

［17］張明發(fā)，沈雅琴.浙貝母藥理研究進(jìn)展［J］.上海醫(yī)藥，2007，28（10）：459-461.

［18］李彩虹，周克元.黃連活性成分的作用及機(jī)制研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2011，20（2）：466-468.

［19］周震.蒲公英藥理研究與臨床應(yīng)用［J］.光明中醫(yī)，2009，24（9）：1801-1802.

［20］王紅，田明，王淼，等.延胡索現(xiàn)代藥理及臨床研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38（6）：108-110.

［21］張煒，劉雯，覃潔萍.中藥莪術(shù)的研究概況［J］.廣西科學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，22（S）：481-486.

The Acute Toxicology Research of Pingwei Capsule on Mice

MAO Lanfang1，WANG Longde2，LIU Junhong2，et al. 1 Gansu College of Chinese Traditional Medicine，Gansu，Lanzhou 730020，China；2 Affiliated Hospital of Gansu University of Chinese Medicine，Gansu，Lanzhou 730000，China

Objective：To study the clinical safety of the Pingwei Capsule.Methods：40 Kunming mice were randomly divided into the control group and the administration group，10 males and 10 females in each group.The administration group were given 1 mL mixed suspension of Pingwei Capsule by gavage，while the control group were given equal normal saline by gavage，5 times a day for each group.After it，the general situation and the change of body mass were observed.The mice were executed after 14 day continuous observation.Serum and renal function index and the index of viscera were detected.Differences in histopathology were identified with HE staining.Results：During administration，the mice in the administration group were not poisoned and died.The changes of the body mass and viscera index were not significantly different（P＞0.05）.The color and shape of main organs gross specimen had no obvious abnormal change.HE staining of liver，kidney，stomach and other organs had no change，inflammation and necrosis.Serum and renal function index of the two group had no obvious difference（P＞0.05）.Conclusion：Maximum daily dosage of the mice is 150 kg/d，equal to 125 times of clinical daily dosage（＞100 times），which indicates that the Pingwei Capsule has clinical safety.

Pingwei Capsule；Acute toxicology；Research

R285.5

A

1004-745X（2015）07-1129-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.07.001

2015-04-01）

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81360540）；甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（ZDSYS-KJ-2013-003）；甘肅省中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目（GZK-2012-31）

△通信作者（電子郵箱：sue19890129＠163.com）