荊門地區(qū)人群ACE基因I/D多態(tài)性和飲酒在高血壓中的交互作用

武凌寧，胡龍才，楊 波(武漢大學人民醫(yī)院心內(nèi)科，武漢 430060;湖北省咸寧市通城縣人民醫(yī)院內(nèi)二科;通訊作者，E-mail:Yangbo@sina．com)

原發(fā)性高血壓是心血管系統(tǒng)較為常見疾病。原發(fā)性高血壓在其疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)生諸多病理生理改變。其中全身血管異常舒縮在原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用［1］。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme，ACE)作為RAS中的重要組成部分，在血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的產(chǎn)生以及緩激肽的降解中起著至關(guān)重要作用。［1］?，F(xiàn)有報道指出不同地區(qū)不同種族中ACE基因第16內(nèi)含子的插入/缺失(I/D)多態(tài)性可以直接影響血清ACE及血漿AngⅡ水平［2-3］。ACE基因I/D基因多態(tài)性在原發(fā)性高血壓中發(fā)揮著重要的作用［4］。為此，本研究通過采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)探討荊門地區(qū)ACE基因I/D多態(tài)性與原發(fā)性高血壓易感性關(guān)系以及ACE基因I/D多態(tài)性飲酒在原發(fā)性高血壓中的交互作用。

1 對象與方法

1．1 研究對象

病例組選取2014-02～2015-08于我院心內(nèi)科醫(yī)院心內(nèi)科罹患高血壓的住院患者;健康個體作為對照人群，對照組人群要求無血糖調(diào)節(jié)受損。受試者年齡范圍45-86歲，最終納入原發(fā)性高血壓120例和對照140例。原發(fā)性高血壓診斷符合《原發(fā)性高血壓診斷與治療指南》(2014)診斷標準。本文若男性酒精消耗大于140 g/周，女性大于＞70 g/周至少2年則定義飲酒。

1．2 研究方法

1．2．1 一般資料的收集 通過詢問及形態(tài)學測量，收集受試者的年齡性別高血壓家族史以及體重身高等一般資料。

1．2．2 生化指標檢測 抽取受試者空腹靜脈血，全部采用日本東芝全自動生化分析儀測定所有受試者的血清總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-C)，空腹血糖(FPG)。

1．2．3 ACE基因I/D多態(tài)性性檢測 采取經(jīng)典酚-氯仿方法提取外周血基因組DNA。根據(jù)eNOS基因的核苷酸序列設(shè)計各個位點的擴增引物，使用PCR擴增目的基因片段。PCR擴增引物序列:eNOS(rs1799983)引物為:上游:5＇-TGGCCTTGCCAGAGCCGGGG-3＇;下游:5＇-CTCTTTACTCCCCGCTCCGAC-3＇;PCR 反應(yīng)體系(25 μl)包含100 ng 提取 DNA，1．0 U Taq酶，2 μl上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反應(yīng)條件:95℃變性6 min;94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 45 s 30個循環(huán);最后72℃延伸10 min。限制性內(nèi)切酶BsaHⅠ，NlaⅢ酶切。酶切產(chǎn)物進行3%瓊脂糖電泳;EB染色成像以此判定酶切基因型。

1．3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS19．0進行資料數(shù)據(jù)分析?；蛐秃偷任换蝾l率比較采用非條件Logistic回歸分析，基因型Hardy-Weinberg平衡法χ2檢驗。計量資料符合正態(tài)分布則采用±s表示，用t檢驗。運用Logistic分析ACE基因I/D多態(tài)性在高血壓中作用。通過非條件Logistic以及Bootstrap方法估ACE基因I/D多態(tài)與飲酒間的相加交互作用［5］，計算相對超額危險度比(RERI)、歸因比(AP)和交互作用指數(shù)(S)及其95%CI。如RERI和AP值95%CI包括0、S值95%CI包括1，表明不存在相加交互作用。以P＜0．05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2．1 一般情況

病例組和對照組年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)無明顯差異(見表1)。而吸煙、飲酒、高血壓家族史方面有統(tǒng)計學差異(P ＜0．05)。

表1 兩組患者一般資料比較Table 1 Comparison of clinical characteristics between two groups

2．2 ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓易感性

PCR酶切產(chǎn)物EB染色成像圖見圖1。高血壓組以及對照組ACE基因I/D基因型頻分布見表2，ACE基因I/D對照組和病例組均符合Hardy-Weinberg平衡法(χ2=0．34，P=0．24;χ2=0．41，P=0．19);ACE基因I/D基因型DI的患病風險是基因型DD的1．14倍(OR=1．14，95%CI 1．05-1．52，P=0．038);II基因型者患病風險是基因型DD的1．54倍(OR=1．54，95%CI 1．22-2．89，P=0．000);I基因攜帶者(II+DI)患病風險是非I基因攜帶者(DD)的1．44倍(OR=1．44，95%CI 1．28-2．61，P=0．000)。利用非條件Logistic回歸分析校正吸煙、飲酒、高血壓家族等因素，I基因攜帶者(II+DI)患病風險是非I基因攜帶者(DD)1．53倍(OR=1．53，95%CI 1．31-3．01，P=0．000，見表2)。

2．3 ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒交互作用

圖1 PCR酶切產(chǎn)物EB染色成像圖Figure 1 Electrophoretogram of amplified and digested PCR products

采用非條件Logistic分析ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒交互作用，與攜帶DD基因不飲酒個體相比，攜帶DI/II基因型不飲酒個體罹患高血壓風險增加1．26 倍(OR=1．26，95%CI 1．12-1．97，P=0．024)，攜帶DD基因型飲酒個體罹患高血壓風險增加1．19倍(OR=1．19，95%CI 1．06-2．14，P=0．041)，攜帶DI/II基因型飲酒個體罹患高血壓風險增加3．39倍(OR=3．39，95%CI 2．66-5．36，P=0．000)(RERI=1．83，95%CI 1．21-2．78;AP=0．46，95%CI 0．28-0．76;S=1．31，95%CI 1．08-2．17)。RERI和 AP 值95%CI不包括0、S值95%CI不包括1，表明ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒在原發(fā)性高血壓中存在交互作用(OR=1．67，95%CI 1．21-2．87，校正 Padd=0．000);相乘交互作用表明ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒在原發(fā)性高血壓中存在交互作用(OR=1．47，95%CI 1．09-2．01，校正 Pmulti=0．011，見表 3)。

表2 ACE基因I/D基因型與高血壓易感性關(guān)系Table 2 ACE I/D polymorphism and susceptibility to essential hypertension

表3 ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒二者在高血壓中交互作用Table 3 Interaction between drinking and ACE I/D polymorphism in essential hypertension

3 討論

人類ACE基因位于染色體因定位于染色體17q23 區(qū)［7，8］，目前發(fā)現(xiàn)該基因存在多個多態(tài)性位點，ACE基因第16內(nèi)含子的插入/缺失(I/D)多態(tài)性可以直接影響血清ACE及血漿AngⅡ水平［2，3］。高血壓發(fā)病除與生活環(huán)境有關(guān)外，還與飲食以及遺傳密切相關(guān)［1］?，F(xiàn)已有研究報道提示，ACE基因I/D多態(tài)性與各種心腦血管易感性密切相關(guān)［7］。近年來，流行病學不斷證實遺傳因素在高血壓發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。從遺傳易感性角度確定高血壓高危人群，并進行針對性的預防是目前降低高血壓發(fā)生風險的有效措施。迄今為止，國內(nèi)外均可見ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓易感性的關(guān)系相關(guān)報道。研究發(fā)現(xiàn)在我國西南四川地區(qū)人群中高血壓發(fā)病ACE基因I/D多態(tài)性有明顯相關(guān)［8］。而另外一位學者發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)男性高血壓發(fā)病與ACE基因I/D多態(tài)性無明顯的相關(guān)［9］。上述結(jié)果提示，不同地區(qū)ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓的關(guān)聯(lián)性表現(xiàn)出一定的差異。荊門處于我國華中地區(qū)，為此我們選取湖北荊門地區(qū)個體為研究對象，探討荊門地區(qū)人群ACE基因I/D多態(tài)性與易感性關(guān)聯(lián)性及多態(tài)性與飲酒交互作用。

本研究通過病例-對照研究分析發(fā)現(xiàn)ACE基因I/D攜帶C(II/DI)基因個體患病風險較非C基因攜帶者(DD)風險明顯增加1．44倍。吸煙、家族史、飲酒為高血壓的危險因素［1］。為了排除這些混雜因素在ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓關(guān)聯(lián)性研究中的影響，本文采取非條件Logistic回歸予以校正，校正后發(fā)現(xiàn)ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓仍有顯著的關(guān)聯(lián)性。眾所周知，高血壓患病是個體遺傳因素與外界環(huán)境因素共同作用的結(jié)果［1］，為了進一步探討ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒對高血壓患病是否有交互作用，本文采用非條件Logistic回歸分析予以驗證。結(jié)果表明攜帶II/DI基因型飲酒個體高血壓罹患風險是攜帶DD基因非飲酒個體3．39倍，提示ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒在高血壓發(fā)病中存在協(xié)同作用。ACE基因I/D多態(tài)性和飲酒在高血壓病及其他疾病中交互作用鮮見報道，其機制目前尚無法闡明。參照ACE基因I/D多態(tài)性可以影響血清ACE及血漿 AngⅡ水平［2，3］，飲酒既可直接增加高血壓易感性，同時也可以影響ACE及血漿AngⅡ水平而間接增加高血壓易感性而發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)［10，11］。本研究存在一定不足，最顯著的是診斷時只考慮了是否飲酒，而沒有充分考慮飲酒的嚴重程度。其次，本文僅僅考慮飲酒，而沒有考慮生活習慣以及環(huán)境因素的影響。再次，研究中樣本量較小，需要進一步擴大樣本量。

總之，ACE基因I/D多態(tài)性可以增加個體高血壓罹患風險，且和飲酒在高血壓發(fā)病中發(fā)揮著協(xié)同作用。本研究存在一定不足，為更好研究ACE基因I/D多態(tài)性在高血壓易感性以及與飲酒的交互作用，尚需要開展更大樣本量、設(shè)計更嚴謹?shù)难芯俊?/p>

［1］Carmichael CY，Wainford RD．Hypothalamic signaling mechanisms in hypertension［J］．Curr Hypertens Rep，2015，17(5):39．

［2］Mendez-Torres FR，Urena R，Thomas R．Retro-grade ureteroscopic endopyelotomy［J］．Urol Clin North Am，2004，3l(1):99-106．

［3］Das S，Roy S，Sharma V，et al．Association of ACE gene I/D polymorphism and ACE levels with hemorrhagic stroke:comparison with ischemic stroke［J］．Neurol Sci，2015，36(1):137-142．

［4］Metayer C，Scélo G，Chokkalingam AP，et al．Genetic variants in the folate pathway and risk of childhood acute lymphoblastic leukemia［J］．Cancer Causes Control，2011，22(9):1243-1258．

［5］邱宏，余德新，王曉蓉，等．logistic回歸模型中交互作用的分析及評價［J］．中華流行病學雜志，2008，29(9):934-937．

［6］項青云，霍勇，王夢德，等．輕中度高血壓患者中ACE基因I/D與血清葉酸水平變化的相關(guān)性研究［J］．中華疾病控制雜志，2010，14(3):192-195．

［7］張冬梅，陳忠云，任紅，等．ACE基因多態(tài)性與心血管疾病的相關(guān)性［J］．實用醫(yī)藥雜志，2014，31(10):886-889．

［8］Zhou YF，Yan H，Hou XP，et al．Association study of angiotensin converting enzyme gene polymorphism with elderly diabetic hypertension and lipids levels［J］．Lipids Health Dis，2013，12:187．

［9］He Q，F(xiàn)an C，Yu M，Wallar G，et al．Associations of ACE gene insertion/deletion polymorphism，ACE activity，and ACE mRNA expression with hypertension in a Chinese population［J］．PLoS One，2013，8(10):e75870．

［10］Luo W，Guo Z，Hao C，et al．Interaction of current alcohol consumption and abdominal obesity on hypertension risk［J］．Physiol Behav，2013，122:182-186．

［11］Chang G，F(xiàn)isher ND，Hornstein MD，et al．Identification of risk drinking women:T-ACE screening tool or the medical record［J］．J Womens Health(Larchmt)，2010，19(10):1933-1939．