• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    短柄五加果實多糖對果蠅非特異性刺激下生存函數(shù)的影響

    2015-01-02 03:00:10李東波周天林肖朝霞張博
    衛(wèi)生職業(yè)教育 2015年5期
    關(guān)鍵詞:短柄氯化銅五加

    李東波,周天林,肖朝霞,張博

    (隴東學(xué)院甘肅省高校隴東生物資源保護(hù)與利用省級重點實驗室,甘肅慶陽745000)

    短柄五加果實多糖對果蠅非特異性刺激下生存函數(shù)的影響

    李東波,周天林,肖朝霞,張博

    (隴東學(xué)院甘肅省高校隴東生物資源保護(hù)與利用省級重點實驗室,甘肅慶陽745000)

    目的研究短柄五加果實多糖對果蠅非特異性刺激(冷、熱和重金屬)下生存函數(shù)的影響。方法用短柄五加果實多糖(0.00%、0.01%、0.05%、0.20%、1.00%)飼喂果蠅,然后分別置于冷(3℃)、熱(35℃)和重金屬(Cd、Cu、Pb)脅迫下,統(tǒng)計其不同時段死亡數(shù)。用Kaplan-meier模型建立對數(shù)生存函數(shù)并求得果蠅的平均生存時間、中位生存時間和最長生存時間。結(jié)果0.05%的短柄五加果實多糖使果蠅在高溫脅迫下生存能力提高27.3%、在低溫脅迫下生存能力提高18.6%,在鎘脅迫環(huán)境下生存能力提高91.7%,且不受果蠅身體素質(zhì)影響。結(jié)論短柄五加果實多糖可能具有提高動物冷、熱適應(yīng)能力及解重金屬毒害的作用,為短柄五加進(jìn)一步的藥物和功能食品開發(fā)提供理論依據(jù)。

    短柄五加多糖;果蠅;非特異性刺激;生存函數(shù)

    短柄五加(Acanthopanax brachypus)是五加科五加屬藥食兩用植物。世界上僅我國西北部黃土高原區(qū)有少量分布,屬我國特有瀕危珍稀灌木[1]。五加科植物多具有重要的藥理活性,《本草綱目》記載“寧要五加一握,不要金玉滿車”。短柄五加根及莖皮具有益氣健脾、寧心安神、開郁活血等功效[2]。其根、莖等常用于治療神經(jīng)衰弱、男子性功能障礙、婦女更年期綜合征等疾病[3]。目前對短柄五加的研究主要集中在根莖化學(xué)成分[4,5]、生殖生物學(xué)和生態(tài)學(xué)方面[6],而對其有效成分的藥理學(xué)研究相對不足。

    五加科植物多糖常具有重要而明顯的生物活性,如抗衰老、抗腫瘤、增強對非特異性刺激的耐受性、免疫調(diào)節(jié)等,且低毒甚至無毒,是目前藥學(xué)研究的熱門之一[7]。通過文獻(xiàn)查新可知,由于短柄五加珍貴稀少,其果實多糖藥理活性目前尚未見相關(guān)報道。

    果蠅是目前被研究透徹的模式生物之一,將其作為疾病模型進(jìn)行藥理活性研究和新藥開發(fā)已被國際認(rèn)可[8]。目前,果蠅已廣泛用于藥物抗衰老[7]、抗非特異性刺激等方面[9,10]。本研究以黑腹果蠅為動物模型,研究短柄五加果實多糖對果蠅非特異性刺激下(高、低溫和重金屬)生存函數(shù)的影響,旨在為高效、合理開發(fā)短柄五加和新藥研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)及數(shù)據(jù)參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    短柄五加果實多糖(本實驗室自制)、w1118野生型果蠅(Drosophila melanogaster)(隴東學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院遺傳學(xué)教研室提供)、乙酸鉛、氧化鎘、氯化銅、丙酸、乙醚、玉米粉、酵母膏、瓊脂、食品級白砂糖。

    1.2 儀器與設(shè)備

    MGC-300A型智能光照培養(yǎng)箱(北京中科浩宇科技發(fā)展有限公司),DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司),BS-223S電子精密天平(北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

    1.3 果蠅實驗

    1.3.1 基本培養(yǎng)基和多糖培養(yǎng)基配制基本培養(yǎng)基采用瓊脂玉米培養(yǎng)基[11]:玉米粉28 g、白砂糖22 g、水150 ml,混勻加熱至糊狀;瓊脂2.5 g加入100 ml水中,加熱溶解,倒入玉米糊中,攪勻冷卻至室溫,加酵母膏2.5 g,丙酸2 ml,攪拌混勻,分裝至果蠅管中備用。多糖培養(yǎng)基:在基本培養(yǎng)基中添加短柄五加果實多糖溶液,制成終濃度為0.01%、0.05%、0.20%、1.00%的4個多糖培養(yǎng)基[12]。

    1.3.2 果蠅飼養(yǎng)w1118野生型果蠅,回交6代,以確保遺傳背景一致。在溫度25℃,相對濕度65%,光周期為12 h/d條件下培養(yǎng)果蠅,收集12 h內(nèi)羽化果蠅,乙醚麻醉,分雌雄,收集處女蠅以備實驗。

    1.3.3 短柄五加果實多糖對高溫脅迫下果蠅死亡率的影響將處女蠅分別在基本培養(yǎng)基(0.00%)及多糖培養(yǎng)基(0.01%、0.05%、0.20%、1.00%)中培養(yǎng)7d,然后將不同處理組果蠅轉(zhuǎn)入相應(yīng)含1%瓊脂的果蠅管中,在溫度35℃,相對濕度65%,光周期為12 h/d的恒定條件下培養(yǎng)[13],每隔12 h統(tǒng)計一次,直至果蠅全部死亡。每處理組50只果蠅(每管10只,共5個平行管),實驗重復(fù)3次。

    1.3.4 短柄五加果實多糖對低溫脅迫下果蠅死亡率的影響將處女蠅分別在基本培養(yǎng)基(0.00%)及多糖培養(yǎng)基(0.01%、0.05%、0.20%、1.00%)中培養(yǎng)7 d,然后將不同處理組果蠅轉(zhuǎn)入相應(yīng)含1%瓊脂的果蠅管中,在溫度3℃(經(jīng)多次預(yù)實驗確定),相對濕度65%,光周期為12 h/d的恒定條件下培養(yǎng),每隔12 h統(tǒng)計一次,直至果蠅全部死亡。每處理組50只果蠅(每管10只,共5個平行管),實驗重復(fù)3次。

    1.3.5 短柄五加果實多糖對重金屬脅迫下果蠅存活率的影響通過半數(shù)致死率實驗求得重金屬對果蠅的半致死濃度(氧化鎘0.5%、氯化銅0.5%、乙酸鉛5%)。將處女蠅分別在多糖培養(yǎng)基(0.00%、0.05%)中培養(yǎng)7 d,分別轉(zhuǎn)入基本培養(yǎng)基和重金屬培養(yǎng)基(鎘、銅、鉛)中,在溫度25℃,相對濕度65%,光周期為12 h/d的恒定條件下培養(yǎng),每隔12 h統(tǒng)計一次,直至果蠅全部死亡。每處理組50只果蠅(每管10只,共5個平行管),實驗重復(fù)3次。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

    用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析和作圖,用Kaplan-meier模型做數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

    2 實驗結(jié)果

    2.1 短柄五加果實多糖對高溫脅迫下果蠅生存函數(shù)的影響(見圖1)

    圖1 短柄五加果實多糖對高溫脅迫下果蠅生存函數(shù)的影響

    由圖1可知:高溫脅迫下果蠅平均生存時間分別為55 h(0.00%)、60 h(0.01%)、70 h(0.05%)、56 h(0.20%)和63 h(1.00%)。經(jīng)Log-Rank比較分析可知,0.05%組與0.00%組生存時間差異顯著(P<0.05),說明濃度為0.05%的短柄五加果實多糖對果蠅抗高溫脅迫效果最好(比0.00%組提高27.3%)。

    高溫脅迫下果蠅中位生存時間分別為48 h(0.00%)、60 h(0.01%)、60 h(0.05%)、60 h(0.20%)和48 h(1.00%),說明0.01%~0.20%的短柄五加果實多糖對體弱果蠅的抗低溫脅迫效果均好,1.00%的短柄五加果實多糖效果不明顯。最長生存時間分別為120 h(0.00%)、132 h(0.01%)、156 h(0.05%)、120 h(0.20%)和132 h(1.00%),說明0.05%的短柄五加果實多糖對強壯果蠅的抗高溫脅迫效果也最好。

    2.2 短柄五加果實多糖對低溫脅迫下果蠅生存函數(shù)的影響(見圖2)

    由圖2可知:低溫脅迫下果蠅平均生存時間分別為102 h(0.00%)、115 h(0.01%)、121 h(0.05%)、105 h(0.20%)和103 h(1.00%)。經(jīng)Log-Rank比較分析可知,0.05%組和0.00%組結(jié)果差異顯著(P>0.05),說明0.05%的短柄五加果實多糖對果蠅抗低溫脅迫效果最好(比0.00%組提高18.6%)。

    低溫脅迫下果蠅中位生存時間分別為96 h(0.00%)、108 h(0.01%)、120 h(0.05%)、108 h(0.20%)和96 h(1.00%),最長生存時間分別為156 h(0.00%)、156 h(0.01%)、170 h(0.05%)、156 h(0.20%)和156 h(1.00%),說明0.05%的短柄五加果實多糖對體弱和強壯果蠅的抗低溫脅迫效果最好。

    圖2 短柄五加果實多糖對低溫脅迫下果蠅生存函數(shù)的影響

    2.3 0.5%氧化鎘脅迫下0.05%短柄五加果實多糖對果蠅生存函數(shù)的影響(見圖3)

    圖3 0.5%氧化鎘脅迫下短柄五加果實多糖對果蠅生存函數(shù)的影響

    由圖3可知:果蠅平均生存時間分別為36 h(0.00%)、69 h(0.05%)。經(jīng)Log-Rank比較分析可知,0.05%組和0.00%組差異顯著(P<0.01),說明0.05%的短柄五加果實多糖對果蠅抗氧化鎘脅迫效果好(比0.00%組提高91.7%)。

    0.5%氧化鎘脅迫下果蠅中位生存時間分別為36 h(0.00%)、60 h(0.05%),最長生存時間分別為60 h(0.00%)、108 h(0.05%),說明0.05%的短柄五加果實多糖對體弱和強壯果蠅的抗氧化鎘脅迫效果也好。

    2.4 0.5%氯化銅脅迫下0.05%短柄五加果實多糖對果蠅生存函數(shù)的影響(見圖4)

    由圖4可知:0.5%氯化銅脅迫下果蠅平均生存時間分別為68 h(0.00%)、59 h(0.05%)。經(jīng)Log-Rank比較分析可知,0.05%組和0.00%組差異無顯著性(P>0.05),說明0.05%的短柄五加果實多糖對果蠅抗氯化銅脅迫效果不顯著。

    圖4 0.5%氯化銅脅迫下短柄五加果實多糖對果蠅死亡函數(shù)的影響

    0.5%氯化銅脅迫下果蠅中位生存時間分別為84 h(0.00%)、60 h(0.05%),最長生存時間分別為84 h(0.00%)、84 h(0.05%),說明0.05%的短柄五加果實多糖對體弱和強壯果蠅的抗氯化銅脅迫效果不顯著。

    2.5 5%乙酸鉛脅迫下0.05%短柄五加果實多糖對果蠅生存函數(shù)的影響(見圖5)

    圖5 5%乙酸鉛脅迫下短柄五加果實多糖對果蠅生存函數(shù)的影響

    由圖5可知:5%乙酸鉛脅迫下果蠅平均生存時間分別為62 h(0.00%)、72 h(0.05%)。經(jīng)Log-Rank比較分析可知,0.05%組和0.00%組差異無顯著性(P>0.05),說明0.05%的短柄五加果實多糖對果蠅抗乙酸鉛脅迫效果不顯著。

    5%乙酸鉛脅迫下果蠅中位生存時間分別為60 h(0.00%)、60 h(0.05%),最長生存時間分別為84 h(0.00%)、84 h(0.05%),說明0.05%的短柄五加果實多糖對體弱和強壯果蠅的抗乙酸鉛脅迫效果不顯著。

    3 討論

    藥物篩選是一個成本高、時間長的艱苦工作,用小鼠或大鼠做藥物模型,常由于人道主義問題、成本高和飼養(yǎng)管理不便受到限制。果蠅遺傳背景清晰,飼養(yǎng)簡便,成本低,繁殖快,不存在倫理問題,而且其在生長發(fā)育、生理功能、代謝途徑等方面與哺乳動物基本相似,超過60%的人類疾病基因在果蠅中具有同源基因,這些優(yōu)勢使其成為很好的代替人的動物模型。郭俊生等[13]證明果蠅可以用做研究提高熱適應(yīng)能力物質(zhì)的動物模型,黃云鵬等[10]認(rèn)為果蠅可以作為研究金屬元素和疾病之間關(guān)系的動物模型。

    果蠅生存試驗可以靈敏地反映環(huán)境、藥物等因素對壽命的影響,其中,平均生存時間是最重要的指標(biāo),為綜合藥效的反映;中位生存時間反映藥物對體弱果蠅的延壽效果;最長生存時間反映藥物對強壯果蠅的延壽效果。本研究表明,0.05%的短柄五加果實多糖能增強果蠅耐高、低溫能力和抗重金屬鎘的毒害,且不受身體素質(zhì)的影響。這些結(jié)果提示短柄五加果實多糖可能具有提高動物冷、熱適應(yīng)能力及解重金屬毒害的作用,為短柄五加的藥物開發(fā)提供又一方向。

    [1]岳春雷,江洪,魏偉,等.短柄五加瀕危趨勢和致瀕因素的初步分析[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報,2003,9(1):24-27.

    [2]胡浩斌,鄭旭東,胡懷生.短柄五加莖皮的HPLC指紋圖譜研究[J].藥物分析雜志,2014,34(2):355-359.

    [3]李興運,張盛橋,李曉珍,等.短柄五加沖劑治療婦女更年期綜合征雙盲試驗研究[J].中藥藥理與臨床,1989,5(1):45-47.

    [4]李東波,張博,劉靈霞,等.短柄五加果實中黃酮提取工藝優(yōu)化研究[J].隴東學(xué)院學(xué)報,2013(5):42-45.

    [5]胡浩斌.短柄五加的化學(xué)成分及生物活性研究[D}.西安:西北大學(xué),2010.

    [6]鄭萬鈞.中國木本植物志[M].北京:中國林業(yè)出版社,1985.

    [7]Lee K S,Lee B S,Semnani S,et al.Curcumin extends life span,improves health span,and modulates the expression of age-associated aging genes in drosophila melanogaster[J].Rejuvenation research,2010,13(5):561-571.

    [8]Pandey U B,Nichols C D.Human disease models in drosophila melanogaster and the role of the fly intherapeutic drug discovery[J].Pharmacological reviews,2011(63):411-436.

    [9]李向輝,郭俊生,趙法伋,等.強化苦丁茶提高熱耐受能力的觀察[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2001,19(2):92-94.

    [10]黃云鵬,周兵.利用黑腹果蠅研究微量金屬元素代謝[J].生命科學(xué),2012,24(8):927-938.

    [11]張會宜.果蠅飼料玉米粉培養(yǎng)基配方的改進(jìn)[J].唐山師范學(xué)院學(xué)報,2005(5):46-47.

    [12]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002.

    [13]郭俊生,趙法伋,王楓,等.熱暴露對果蠅壽命及熱應(yīng)激蛋白(Hsp70)含量的影響[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,1998,16(4):247-249.

    G424.31

    B

    1671-1246(2015)05-0102-03

    注:本文系甘肅省教育廳項目(1010-08);慶陽市重大科技支撐項目(1003NKCM020);隴東學(xué)院科研基金項目(lyzk1101)

    猜你喜歡
    短柄氯化銅五加
    二穗短柄草GRFs基因家族的鑒定及表達(dá)模式分析
    剌五加內(nèi)生真菌分離鑒定及抗菌活性研究
    新資源食品短梗五加開發(fā)應(yīng)用初報
    基于nrITS、psbA-trnH和DMC1序列中國短柄草族的系統(tǒng)進(jìn)化和生物地理學(xué)研究
    植物研究(2018年4期)2018-07-24 01:06:24
    低能耗制備試劑級二水氯化銅的新工藝
    不同培育模式對短梗五加的影響
    間接滴定法測定氯化銅晶體的純度
    瀕危藥用植物短柄烏頭空間分布格局的研究
    電解氯化銅溶液的微型改進(jìn)實驗
    電解氯化銅溶液實驗改進(jìn)
    色哟哟哟哟哟哟| 在线观看66精品国产| 国产激情欧美一区二区| 一级毛片高清免费大全| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 国产一区二区三区视频了| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 午夜两性在线视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 午夜影院日韩av| 国产精品一及| 国产黄色小视频在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 88av欧美| 日韩欧美免费精品| 亚洲精华国产精华精| 一本一本综合久久| 一本久久中文字幕| 国产麻豆成人av免费视频| 国产97色在线日韩免费| 99国产精品一区二区三区| 国产av在哪里看| 久久久久九九精品影院| 性欧美人与动物交配| 日本三级黄在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲国产精品合色在线| 午夜福利高清视频| 国产欧美日韩一区二区三| 国产精品三级大全| 国产高清有码在线观看视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 色综合欧美亚洲国产小说| 99热这里只有是精品50| 免费av不卡在线播放| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 毛片女人毛片| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 日韩大尺度精品在线看网址| 岛国在线观看网站| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲精品色激情综合| 深爱激情五月婷婷| 亚洲国产色片| 一本久久中文字幕| aaaaa片日本免费| or卡值多少钱| 91麻豆av在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美性感艳星| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产精品日韩av在线免费观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 美女大奶头视频| 少妇丰满av| 亚洲激情在线av| 露出奶头的视频| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 三级毛片av免费| 国产一区二区在线av高清观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 97碰自拍视频| 手机成人av网站| 亚洲国产欧美网| 国产 一区 欧美 日韩| 一级黄片播放器| 午夜老司机福利剧场| 我要搜黄色片| 久久6这里有精品| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | or卡值多少钱| 久99久视频精品免费| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美bdsm另类| 久久中文看片网| 18禁在线播放成人免费| 日本免费a在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 免费在线观看成人毛片| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美日韩黄片免| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品三级大全| 亚洲人成电影免费在线| 日日夜夜操网爽| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产成人系列免费观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产美女午夜福利| 国产伦精品一区二区三区四那| av福利片在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 两个人的视频大全免费| 国产免费av片在线观看野外av| 观看美女的网站| 欧美日韩一级在线毛片| 国产综合懂色| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 一夜夜www| 男女视频在线观看网站免费| 欧美另类亚洲清纯唯美| 成年版毛片免费区| 成人av一区二区三区在线看| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲av电影在线进入| 美女cb高潮喷水在线观看| 日韩欧美在线二视频| 91在线观看av| 国产乱人伦免费视频| 精品人妻1区二区| 日韩欧美三级三区| 久久6这里有精品| 国产97色在线日韩免费| 一个人看视频在线观看www免费 | 亚洲黑人精品在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| netflix在线观看网站| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲av美国av| 日本一二三区视频观看| 国产色爽女视频免费观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产真实乱freesex| 亚洲av成人精品一区久久| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 五月玫瑰六月丁香| 国产伦人伦偷精品视频| 日本一二三区视频观看| 特大巨黑吊av在线直播| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲 国产 在线| 精品电影一区二区在线| 99热只有精品国产| 99在线视频只有这里精品首页| 国产高清videossex| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲国产精品999在线| 淫秽高清视频在线观看| 天天添夜夜摸| av在线蜜桃| 中文字幕久久专区| 国产高清三级在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成人18禁在线播放| 99热这里只有是精品50| 国产欧美日韩精品一区二区| 成人一区二区视频在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 怎么达到女性高潮| 中文字幕高清在线视频| 成人18禁在线播放| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费在线观看日本一区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 在线免费观看的www视频| 淫秽高清视频在线观看| 女人被狂操c到高潮| netflix在线观看网站| 久久欧美精品欧美久久欧美| 乱人视频在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲熟妇熟女久久| 国产美女午夜福利| 色综合婷婷激情| 91字幕亚洲| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 18禁在线播放成人免费| 亚洲欧美精品综合久久99| www日本在线高清视频| 国产不卡一卡二| 欧美成人性av电影在线观看| 99热这里只有精品一区| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久久成人免费电影| 一区二区三区免费毛片| 成人18禁在线播放| 成人特级黄色片久久久久久久| 色吧在线观看| 欧美乱妇无乱码| 中文字幕久久专区| 久久国产精品影院| 日韩精品青青久久久久久| АⅤ资源中文在线天堂| 熟女人妻精品中文字幕| 香蕉久久夜色| 少妇丰满av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品久久久久久成人av| 亚洲午夜理论影院| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 色尼玛亚洲综合影院| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲av熟女| 淫妇啪啪啪对白视频| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 色综合站精品国产| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美成人a在线观看| 麻豆一二三区av精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美日韩一级在线毛片| 动漫黄色视频在线观看| 岛国在线免费视频观看| 久久久久久久久中文| 丰满的人妻完整版| 成年女人毛片免费观看观看9| 成人av一区二区三区在线看| 禁无遮挡网站| 国语自产精品视频在线第100页| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久欧美精品欧美久久欧美| 99国产综合亚洲精品| 亚洲avbb在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 一本一本综合久久| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 夜夜爽天天搞| 欧美乱色亚洲激情| 国产亚洲欧美在线一区二区| xxx96com| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日本黄色片子视频| 婷婷精品国产亚洲av| 男女床上黄色一级片免费看| 免费人成视频x8x8入口观看| www.色视频.com| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美丝袜亚洲另类 | 99在线人妻在线中文字幕| 欧美日韩一级在线毛片| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲自拍偷在线| 欧美黑人巨大hd| 啦啦啦韩国在线观看视频| 悠悠久久av| 久久久精品欧美日韩精品| 久久久久精品国产欧美久久久| 在线播放无遮挡| 精品电影一区二区在线| 嫩草影院精品99| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 麻豆成人av在线观看| 午夜免费观看网址| 久久久久九九精品影院| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 国产成人啪精品午夜网站| 岛国在线观看网站| 香蕉av资源在线| 国产亚洲精品久久久com| 看片在线看免费视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美性猛交黑人性爽| 免费在线观看成人毛片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 欧美bdsm另类| 桃红色精品国产亚洲av| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久草成人影院| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲成av人片在线播放无| 美女大奶头视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产激情偷乱视频一区二区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美精品啪啪一区二区三区| 成人特级黄色片久久久久久久| 成人av一区二区三区在线看| 床上黄色一级片| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲五月天丁香| 国产精品电影一区二区三区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 午夜激情欧美在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 中亚洲国语对白在线视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 午夜免费观看网址| 1024手机看黄色片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 十八禁网站免费在线| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| av在线蜜桃| 18禁在线播放成人免费| 国产精品 欧美亚洲| 悠悠久久av| 香蕉丝袜av| 99久久成人亚洲精品观看| 成人国产一区最新在线观看| 操出白浆在线播放| ponron亚洲| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 免费观看人在逋| 亚洲无线观看免费| 俄罗斯特黄特色一大片| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 观看美女的网站| 一本综合久久免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产精品野战在线观看| 成年女人永久免费观看视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲熟妇熟女久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产成人福利小说| 制服人妻中文乱码| 丰满的人妻完整版| 午夜久久久久精精品| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品一及| 国产综合懂色| 久久久久久久久久黄片| 国产成人a区在线观看| 亚洲av美国av| 欧美最黄视频在线播放免费| 麻豆国产97在线/欧美| 日日夜夜操网爽| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲国产欧美网| or卡值多少钱| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 丝袜美腿在线中文| 在线观看66精品国产| 一区二区三区免费毛片| 精品国产亚洲在线| 毛片女人毛片| 精品人妻偷拍中文字幕| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 又粗又爽又猛毛片免费看| 欧美日韩福利视频一区二区| 好男人电影高清在线观看| 成人av在线播放网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产欧美日韩一区二区精品| 白带黄色成豆腐渣| 色综合站精品国产| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一边摸一边抽搐一进一小说| 一个人看视频在线观看www免费 | 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美午夜高清在线| 国产麻豆成人av免费视频| 麻豆成人av在线观看| 两个人视频免费观看高清| 99精品在免费线老司机午夜| 国产三级在线视频| 国模一区二区三区四区视频| 色综合婷婷激情| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩欧美 国产精品| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产高清三级在线| 亚洲美女视频黄频| 特大巨黑吊av在线直播| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | av中文乱码字幕在线| 男插女下体视频免费在线播放| 99国产精品一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区久久| 在线观看免费午夜福利视频| www日本在线高清视频| 亚洲国产欧美人成| 久久伊人香网站| 精华霜和精华液先用哪个| 老司机午夜十八禁免费视频| av在线蜜桃| 男人的好看免费观看在线视频| 一个人看的www免费观看视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 精品午夜福利视频在线观看一区| 午夜两性在线视频| 极品教师在线免费播放| 日本在线视频免费播放| 亚洲自拍偷在线| 亚洲av免费高清在线观看| 国产午夜精品论理片| 亚洲av免费在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 1000部很黄的大片| 老鸭窝网址在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 天堂√8在线中文| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 午夜免费成人在线视频| 久久久久久久精品吃奶| 真实男女啪啪啪动态图| eeuss影院久久| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 午夜福利在线观看吧| av天堂中文字幕网| 亚洲av免费高清在线观看| 国产乱人视频| 欧美一级毛片孕妇| 精品国产美女av久久久久小说| 国产高清三级在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 一个人看视频在线观看www免费 | 悠悠久久av| 免费在线观看亚洲国产| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 最新美女视频免费是黄的| 有码 亚洲区| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产三级黄色录像| 国产高清三级在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲国产精品合色在线| 国产黄a三级三级三级人| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产av在哪里看| 夜夜爽天天搞| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 成年女人永久免费观看视频| 制服人妻中文乱码| 窝窝影院91人妻| 丰满人妻一区二区三区视频av | 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产97色在线日韩免费| 丰满的人妻完整版| 精品国内亚洲2022精品成人| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲av免费高清在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 色综合欧美亚洲国产小说| 宅男免费午夜| 在线国产一区二区在线| 久久亚洲真实| 色哟哟哟哟哟哟| e午夜精品久久久久久久| 日本 av在线| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲av电影在线进入| 亚洲欧美日韩东京热| 免费看十八禁软件| 嫩草影视91久久| 成人亚洲精品av一区二区| 高清日韩中文字幕在线| 国产激情欧美一区二区| 一个人免费在线观看电影| 欧美区成人在线视频| 在线观看日韩欧美| 国产成人系列免费观看| 一本精品99久久精品77| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲最大成人中文| 午夜福利视频1000在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久久久久久久久黄片| 国产午夜精品论理片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 97碰自拍视频| 精品久久久久久成人av| 国产黄a三级三级三级人| 日韩国内少妇激情av| 国产精华一区二区三区| 午夜影院日韩av| 日韩欧美国产在线观看| 久久久国产精品麻豆| www日本在线高清视频| 欧美乱妇无乱码| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲第一电影网av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 老司机在亚洲福利影院| 国产真实乱freesex| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲人成网站高清观看| 我要搜黄色片| 国产极品精品免费视频能看的| 日本黄色片子视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 在线国产一区二区在线| 在线观看午夜福利视频| 此物有八面人人有两片| 精品久久久久久久久久久久久| 90打野战视频偷拍视频| 日本成人三级电影网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 丰满的人妻完整版| 久久精品国产综合久久久| 日韩欧美精品免费久久 | 露出奶头的视频| av天堂中文字幕网| 久久久久性生活片| 丰满的人妻完整版| 韩国av一区二区三区四区| 久久精品91无色码中文字幕| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲专区国产一区二区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 18禁国产床啪视频网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 我的老师免费观看完整版| 国产成人欧美在线观看| 久久精品影院6| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 午夜激情欧美在线| 久久精品国产清高在天天线| 韩国av一区二区三区四区| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩欧美精品v在线| 国产色爽女视频免费观看| 天美传媒精品一区二区| 亚洲成人久久性| 国产精品久久电影中文字幕| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品久久久久久久电影 | 美女黄网站色视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 国内揄拍国产精品人妻在线| 18+在线观看网站| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲真实伦在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| av视频在线观看入口| 日韩人妻高清精品专区| svipshipincom国产片| 淫秽高清视频在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 性欧美人与动物交配| 亚洲18禁久久av| 特级一级黄色大片| 成人av在线播放网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲自拍偷在线| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲精品影视一区二区三区av| h日本视频在线播放| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲av免费在线观看| 国产精品国产高清国产av| 午夜激情福利司机影院| 香蕉av资源在线| 一个人看视频在线观看www免费 | 国产不卡一卡二| 午夜日韩欧美国产| 亚洲成av人片免费观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 在线观看舔阴道视频| 久久久色成人| 黄色女人牲交| 内射极品少妇av片p| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 91在线观看av| 亚洲国产色片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 成人永久免费在线观看视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 最新中文字幕久久久久| 韩国av一区二区三区四区| 久久久国产成人免费| 精品国产美女av久久久久小说| 成人永久免费在线观看视频| 久99久视频精品免费| eeuss影院久久|