苜蓿根瘤菌對(duì)不同形態(tài)磷利用效率的研究

劉盧生，玉永雄＊，郭蕾，胡艷，周磊，王榮

（1.西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，重慶市高校草食動(dòng)物工程中心，重慶400715；2.農(nóng)民日?qǐng)?bào)社，北京100089）

紫花苜蓿（Medicagosativa）作為一種優(yōu)質(zhì)牧草，在世界草食畜牧業(yè)中起著不可替代的作用，我國(guó)畜牧業(yè)對(duì)苜蓿的需求量也逐年攀升，但我國(guó)的供應(yīng)遠(yuǎn)不能滿足需求，因此近年來，我國(guó)苜蓿的種植面積不斷擴(kuò)大，甚至在南方的四川、云南、貴州、江蘇等地也開始種植［1］。紫花苜蓿是豆科植物，苜蓿－根瘤菌這一共生固氮體系的穩(wěn)定高效是栽培苜蓿獲得高產(chǎn)的關(guān)鍵因素，而在實(shí)際生產(chǎn)中有效磷的缺乏常常是限制苜蓿－根瘤菌體系高效運(yùn)轉(zhuǎn)的重要原因。在我國(guó)，不管是北方還是南方，種植苜蓿的地塊多數(shù)為較貧瘠、土層薄的邊緣地帶，這些地區(qū)在北方通常為鹽堿地，在南方則多數(shù)為酸性土，這些土壤中的磷多數(shù)為難溶性的磷酸鈣、磷酸鋁和磷酸鐵［2］，可溶性的有效磷含量很少，因此，土壤有效磷缺乏是限制苜蓿在這類土壤中產(chǎn)量提高的主要因素。

已有的研究表明，在有效磷缺乏的土壤上，豆科植物接種根瘤菌可以促進(jìn)植株對(duì)磷的吸收利用，增加植株磷含量［3－7］。近年來，研究已發(fā)現(xiàn)部分豆科根瘤菌存在多種解磷機(jī)制［4，8－9］，正是這些解磷機(jī)制使根瘤菌－豆科植物能利用難溶性磷，保證了這些豆科植物在低有效磷土壤上的正常生長(zhǎng)。

雖然苜蓿是一種重要的豆科植物，但苜蓿根瘤菌對(duì)難溶性磷利用的研究較少，僅有的少數(shù)研究也是針對(duì)堿性土壤中普遍存在的鈣－磷進(jìn)行［10－11］，而酸性土壤中主要的難溶性磷為鋁－磷和鐵－磷，目前尚未見苜蓿根瘤菌對(duì)它們利用性的報(bào)道。因此，本研究利用多種土壤中常見的難溶性磷替代普通培養(yǎng)基中的磷，研究耐酸的根瘤菌對(duì)不同難溶性磷的利用和根瘤菌生長(zhǎng)對(duì)磷可利用性的影響，為根瘤菌的選育、改造和生產(chǎn)實(shí)際提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

供試菌種是菌株S01和S02，為西南大學(xué)重慶市牧草與草食家畜重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室篩選出的耐酸苜蓿根瘤菌，2個(gè)菌株都能在紫花苜蓿植株上正常結(jié)瘤。

1.2 培養(yǎng)基

預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)基：采用酵母瓊脂培養(yǎng)基（yeast morphology agar medium，YMA培養(yǎng)基）：甘露醇10g／L、酵母膏1.5g／L、K2HPO4·3H2O 681mg／L、MgSO4·7H2O 0.2g／L、NaCl 0.1g／L，Rh微量2mL（Rh微量：H3BO35g／L，Na2MoO45g／L），固體培養(yǎng)基加8g／L的瓊脂。

試驗(yàn)處理的培養(yǎng)基：

1）無磷培養(yǎng)基：作為無磷對(duì)照（CK），為無磷低酵母含量的YMA培養(yǎng)基，因酵母膏含大量有機(jī)氮、磷、多種未知營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子，為降低有機(jī)磷和未知營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，將酵母膏添加量減少到0.1g／L（根瘤菌生長(zhǎng)必需酵母膏提供生長(zhǎng)因子，否則難以正常生長(zhǎng)），同時(shí)為補(bǔ)充根瘤菌生長(zhǎng)必需的氮源，添加（NH4）2SO40.2g／L；為補(bǔ)充 K，添加 KCl 0.2g／L。

2）酵母膏有機(jī)磷培養(yǎng)基：作為對(duì)照CKYE－P，為添加正常含量酵母膏的YMA培養(yǎng)基，即：對(duì)照培養(yǎng)基［不添加（NH4）2SO4］＋酵母膏1.5g／L。

3）可溶性無機(jī)磷培養(yǎng)基：作為對(duì)照CKP，為添加正常含量K2HPO4的培養(yǎng)基，即對(duì)照培養(yǎng)基（不加KCl）＋K2HPO4·3H2O 0.681g／L。

4）植酸鈣鎂培養(yǎng)基（TPhy－P）：對(duì)照培養(yǎng)基＋植酸鈣鎂3g／L。

5）磷酸鈣培養(yǎng)基（TCa－P）：對(duì)照培養(yǎng)基＋Ca3（PO4）23g／L。

6）磷酸鋁培養(yǎng)基（TAl－P）：對(duì)照培養(yǎng)基＋AlPO43g／L。

7）磷酸鐵培養(yǎng)基（TFe－P）：對(duì)照培養(yǎng)基＋FePO4·4H2O 3g／L。

固體培養(yǎng)基添加15g／L的瓊脂粉和25mg／L的剛果紅。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)在2014年3－5月進(jìn)行，分固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)兩類處理。

1.3.1 固體平板培養(yǎng)基上不同磷源對(duì)苜蓿根瘤菌菌落生長(zhǎng)的影響 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：采用三因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)包括3個(gè)pH 條件（pH 4.1，7.0和9.0）、7個(gè)不同磷源（CK、CKYE－P、CKP、TPhy－P、TCa－P、TAl－P和 TFe－P），2個(gè)耐酸苜蓿根瘤菌菌株（S01和S02），共3×7×2＝42個(gè)處理，每個(gè)處理2個(gè)重復(fù)（平板），每個(gè)平板接種6個(gè)點(diǎn)。

固體培養(yǎng)基的配制：Ca3（PO4）2、AlPO4、FePO4·4H2O和植酸鈣鎂121℃各自單獨(dú)滅菌17min，隨后與滅菌后的其他成分混合，用1mol／L的鹽酸或者NaOH調(diào)節(jié)至所需的pH，隨后培養(yǎng)基放置24h后再次用鹽酸或NaOH調(diào)節(jié)至所需pH，再與滅菌后的瓊脂剛果紅混合，持續(xù)攪拌搖勻，使固體沉淀平均分布于培養(yǎng)基中，待溫度降低到40℃時(shí)倒入直徑9cm培養(yǎng)皿中。因CK、CKYE－P和CKp3個(gè)對(duì)照培養(yǎng)基的pH變化較小，故直接將所有成分混合滅菌倒培養(yǎng)皿。

根瘤菌的接種和培養(yǎng)：2014年3月，將2個(gè)保存菌株經(jīng)正常培養(yǎng)30h后的培養(yǎng)液12000r／min離心2min，棄上清（棄去有磷培養(yǎng)液），將菌體用無菌蒸餾水稀釋，調(diào)整吸光度至0.2，吸取6μL接種一個(gè)點(diǎn)，每個(gè)平板接種6個(gè)點(diǎn)，每個(gè)處理接種兩個(gè)平板，隨后置于28℃靜置培養(yǎng)96h后記錄菌落形態(tài)并利用直尺測(cè)定菌落直徑。

1.3.2 液體培養(yǎng)條件下不同磷源對(duì)苜蓿根瘤菌生長(zhǎng)、培養(yǎng)液pH和有效磷含量的影響 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：采用三因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)包括3個(gè)pH 條件（pH 4.1，7.0和9.0）、7個(gè)不同磷源（CK、CKYE－P、CKP、TPhy－P、TCa－P、TAl－P和 TFe－P），2個(gè)耐酸根瘤菌菌株（S01和S02）和未接種對(duì)照，共3×7×3＝63個(gè)處理，每個(gè)處理2個(gè)重復(fù)。

液體培養(yǎng)基的配制：Ca3（PO4）2、AlPO4、FePO4·4H2O和植酸鈣鎂121℃各自單獨(dú)滅菌17min，隨后與滅菌后的其他成分混合，用1mol／L的鹽酸或者NaOH調(diào)節(jié)至所需的pH，隨后培養(yǎng)基放置24h后再次用鹽酸或NaOH調(diào)節(jié)至所需pH。因CK、CKYE和CKp培養(yǎng)基的pH變化較小，故直接將所有成分混合滅菌倒培養(yǎng)皿。

根瘤菌的接種和培養(yǎng)：菌液的預(yù)培養(yǎng)和稀釋同1.3.1，吸取蒸餾水稀釋后的菌液20μL接入各三角瓶，28℃120r／min培養(yǎng)72h后測(cè)定菌液吸光度、培養(yǎng)液pH和有效磷含量（未接種對(duì)照一起培養(yǎng)，一起測(cè)定）。吸光度使用的是HITACHI U－1800分光光度計(jì)在600nm處進(jìn)行測(cè)定，比色皿為1.0cm×0.5cm的玻璃比色皿，為減小不溶沉淀對(duì)吸光度測(cè)定的影響，所有處理的吸光度測(cè)定都以相應(yīng)未接種對(duì)照作為空白進(jìn)行調(diào)0；培養(yǎng)后培養(yǎng)液的pH使用雷磁PHS－3CpH計(jì)進(jìn)行測(cè)定；液體培養(yǎng)結(jié)束后，吸取2mL培養(yǎng)液12000r／min 4℃離心20min，然后吸取上清液測(cè)定溶液中的有效磷，磷測(cè)定采用鉬銻抗比色法［8］。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)的方差分析和多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 固體平板上不同磷源對(duì)苜蓿根瘤菌菌落生長(zhǎng)的影響

酸性、中性和堿性條件下，苜蓿根瘤菌菌株S01和S02在不同磷培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)96h后的菌落直徑見表1。比較3個(gè)對(duì)照的菌落直徑發(fā)現(xiàn)，無磷CK的菌落直徑最小，顯著低于酵母膏對(duì)照CKYE－P和無機(jī)可溶性磷對(duì)照CKP，且其菌落中根瘤菌生長(zhǎng)量很小，顯著小于CKYE－P和CKP菌落，說明磷是影響根瘤菌生長(zhǎng)和菌落直徑的關(guān)鍵因素，缺磷使根瘤菌生長(zhǎng)受到顯著的抑制。

4個(gè)不同磷源處理中，植酸鈣鎂處理（TPhy－P）菌落直徑最大，磷酸鈣處理（TCa－P）次之，而磷酸鋁處理（TAl－P）和磷酸鐵處理（TFe－P）在各條件下的菌落直徑都較小，說明在固體培養(yǎng)條件下植酸鈣鎂和磷酸鈣是根瘤菌生長(zhǎng)的較有效的磷源，而磷酸鋁和磷酸鐵則較難被根瘤菌利用。

表1 不同磷源固體平板上的根瘤菌菌落直徑Table 1 The rhizobia’s colony diameter in solid medium with different form phosphorus mm

2.2 液體培養(yǎng)基中不同磷源對(duì)苜蓿根瘤菌生長(zhǎng)、培養(yǎng)液pH和有效磷含量的影響

2.2.1 不同pH條件下不同磷源對(duì)苜蓿根瘤菌生長(zhǎng)的影響 在中性和堿性條件下，添加到液體培養(yǎng)基中的不溶性磷以沉淀形態(tài)存在，在調(diào)節(jié)pH前后、滅菌前后無明顯變化，培養(yǎng)后仍見明顯沉淀。但在酸性條件下（pH 4.1），添加植酸鈣鎂的培養(yǎng)基在調(diào)節(jié)pH過程中，植酸鈣鎂溶解，高壓滅菌和接種培養(yǎng)后也一直保持澄清。其原因在于植酸鈣鎂在酸性條件下轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄缘闹菜幔?］，故沉淀消失。

苜蓿根瘤菌在添加不同形態(tài)磷的酸性、中性和堿性培養(yǎng)液中培養(yǎng)72h后的吸光度見表2。在3種pH條件下，無磷對(duì)照CK的吸光度皆很小，而添加正常量酵母膏的對(duì)照CKYE－P和可溶性無機(jī)磷對(duì)照CKP的吸光度皆顯著高于無磷對(duì)照CK，說明有效磷（不管是有機(jī)磷還是無機(jī)磷）是影響根瘤菌生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素。

比較不同難溶性磷處理中苜蓿根瘤菌吸光度發(fā)現(xiàn)，不管是在酸性、中性還是堿性條件下，TPhy－P和TCa－P的根瘤菌吸光度皆高于相同pH 條件的 TAl－P和 TFe－P，如中性條件下，TPhy－P和 TCa－P的吸光度在1.2以上，而 TAl－P和 TFe－P的吸光度皆小于1；堿性條件下，TPhy－P和TCa－P的吸光度在0.6以上，而TAl－P和TFe－P的吸光度不到0.1，這說明植酸鈣鎂和磷酸鈣是有效的根瘤菌生長(zhǎng)所需磷源，而磷酸鋁和磷酸鐵則較難被利用。

較為特殊的是酸性條件下的植酸鈣鎂處理（TPhy－P），因植酸鈣鎂在酸性條件下轉(zhuǎn)變?yōu)橹菜岫耆芙猓涓鼍舛葏s很低，其原因在于植酸鈣鎂生成的植酸是防腐劑，能抑制多種細(xì)菌生長(zhǎng)，故根瘤菌的生長(zhǎng)也受到抑制。

2.2.2 不同磷源培養(yǎng)基中根瘤菌生長(zhǎng)對(duì)培養(yǎng)液pH的影響 各處理培養(yǎng)72h后培養(yǎng)液的pH測(cè)定結(jié)果（表3）顯示，除酸性條件下的TCa－P外，所有對(duì)照和處理的培養(yǎng)液pH都呈下降趨勢(shì)，說明根瘤菌生長(zhǎng)中分泌酸性物質(zhì)。

表2 根瘤菌在不同形態(tài)磷的培養(yǎng)液中培養(yǎng)72h后的吸光度Table 2 The rhizobia’s absorbance in medium with different form phosphorus after 72hculture

酸性處理組中，3個(gè)對(duì)照、TPhy－P、TAl－P和 TFe－P的pH 降低程度較大（都在pH 3.5以下），而 TCa－P卻略有上升，原因在于磷酸鈣在酸性條件下能部分溶解，中和了培養(yǎng)基中的H＋，由此導(dǎo)致pH未下降。

中性處理組中，除 TPhy－P和 TCa－P外，其他對(duì)照和處理的pH 大幅度降低（最終pH＜3.7），而 TPhy－P和 TCa－P的pH降低程度較小，原因同樣是因?yàn)橹菜徕}鎂和磷酸鈣在酸性條件下可部分溶解，能中和培養(yǎng)液中的H＋，即植酸鈣鎂和磷酸鈣具有緩沖性，故2個(gè)處理pH下降幅度不大。

堿性處理組中，CK的pH 最高（分別為8.85和8.87），其次為 TAl－P（pH 分別為7.29和7.28），這與二者根瘤菌生長(zhǎng)較弱（吸光度見表2），H＋分泌少，所以培養(yǎng)液pH降低程度小。

表3 根瘤菌在不同形態(tài)磷培養(yǎng)基中培養(yǎng)72h后的pHTable 3 The medium pH after 72hculturing in medium with different form phosphorus

2.2.3 不同pH培養(yǎng)條件下苜蓿根瘤菌對(duì)難溶性磷轉(zhuǎn)化的影響 各處理培養(yǎng)72h后培養(yǎng)液中有效磷的含量見表4。比較不同處理的有效磷含量發(fā)現(xiàn)，酸性和中性條件下TPhy－P和TCa－P的有效磷含量（接種與未接種處理皆在100mg／L以上）遠(yuǎn)高于 TAl－P和 TFe－P（接種與未接種處理皆在21mg／L以下），堿性條件下僅 TPhy－P有效磷含量較高（未接種處理為54.53mg／L，接種處理為129.95和122.25mg／L），其余處理未接種對(duì)照仍較低，接種處理雖有上升但皆在50mg／L以下。說明對(duì)根瘤菌而言，磷酸鈣在各pH條件下皆為有效的磷源，植酸鈣鎂在中性和酸性條件下是較有效的磷源，而磷酸鋁和磷酸鐵在任何pH條件下都很難成為根瘤菌的有效磷源。

與未接種對(duì)照相比，TAl－P和TFe－P接種根瘤菌后的有效磷在各pH條件下都有明顯的上升，特別是在堿性條件下的上升幅度最大，如 TAl－P的有效磷含量從未接種的3.18mg／L上升到49.98和45.38mg／L，分別增加了14.70和13.27倍。對(duì)TPhy－P和TCa－P而言，接種根瘤菌僅使中性和堿性處理的有效磷含量上升，特別是堿性條件下 的上升幅度最大（如與未接種對(duì)照比，堿性條件下TPhy－P的有效磷含量從2.27mg／L分別增加到40.44和35.22mg／L），說明根瘤菌的生長(zhǎng)可以促進(jìn)難溶性磷的釋放，但在酸性條件下對(duì)植酸鈣鎂和磷酸鈣中磷的釋放作用較弱。

比較不同pH條件下的有效磷含量發(fā)現(xiàn)，隨pH的升高，TPhy－P和 TCa－P的有效磷含量呈明顯的降低趨勢(shì)，如酸性條件下未接種 TPhy－P和 TCa－P對(duì)照的有效磷分別為612.01和310.06mg／L，中性條件下分別降低到195.12和119.14mg／L，堿性條件下則降低到2.27和54.53mg／L，而 TAl－P和 TFe－P的有效磷含量在不同pH條件下變化不明顯（表4的未接種對(duì)照）。說明環(huán)境pH對(duì)植酸鈣鎂和磷酸鈣中磷的有效性有較大影響，而對(duì)磷酸鋁和磷酸鐵則影響較小。

表4 根瘤菌培養(yǎng)后培養(yǎng)基有效磷含量Table 4 The available phosphate content at the end of culturing mg／L

3 討論

3.1 pH與磷有效性的關(guān)系

土壤中的磷包括無機(jī)磷和有機(jī)磷。無機(jī)磷主要包括Ca－P、Al－P和 Fe－P，其中 Ca－P主要存在于中性和堿性土壤中，酸性土壤中含量很少；Al－P和Fe－P占酸性土壤中無機(jī)磷的絕大多數(shù)［12］，在中性和堿性土壤中也有分布。土壤中的有機(jī)磷主要來源于植物殘?bào)w，其中超過50%以上為植酸及其鹽類［13］。各種磷在土壤中的溶解性與pH密切相關(guān)，酸性和中性條件下僅Ca－P和植酸鹽類可部分溶解，堿性條件下各種磷皆難溶于水［5］。本研究測(cè)定的各處理有效磷含量也印證了這一點(diǎn)。酸性和中性條件下，TCa－P和TPhy－P中有效磷含量遠(yuǎn)高于堿性條件，而TFe－P和TAl－P在各pH條件下的有效磷含量皆較低（表4和表5）。因此在酸性土壤中，無機(jī)有效磷含量很低（Ca－P少，Al－P和Fe－P難溶），堿性土壤中同樣容易缺乏有效磷（磷酸鈣含量不到酸性條件的1／10，考慮到本研究的磷酸鈣經(jīng)過高溫高壓滅菌，堿性土壤中實(shí)際的有效磷含量應(yīng)遠(yuǎn)低于試驗(yàn)值，此外植酸鹽、Al－P和Fe－P溶解度都很低），因此對(duì)于酸性土壤和堿性土壤而言，苜蓿和苜蓿根瘤菌都容易缺磷，苜蓿在這類土壤上的栽培必須特別注意磷肥的施入。

3.2 根瘤菌生長(zhǎng)與磷有效性的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)根瘤菌能提高各種難溶性磷的有效性，以供自身生長(zhǎng)利用，如在初始pH 7.0和pH 9.0的接種處理中有效磷含量較未接種處理都有不同程度的升高，最高的超過未接種對(duì)照的10倍（pH 9.0條件下的TAl－P）。這種升高一方面是泌酸的細(xì)菌，它的生長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致環(huán)境pH的降低（表3），而環(huán)境pH降低將增加Ca－P和有機(jī)磷的有效性，但pH降低對(duì)磷酸鋁和磷酸鐵中磷的釋放作用并不明顯（表4），這與前人的研究結(jié)果一致［2，14－15］，即磷酸鈣和有機(jī)磷的有效性對(duì)pH較為敏感，而磷酸鋁和磷酸鐵則不敏感。

根瘤菌泌酸（H＋）導(dǎo)致有效磷的上升并不能完全解釋一些處理中的有效磷在接種根瘤菌后大幅度增加的現(xiàn)象。如pH 9.0條件下的接種根瘤菌處理TAl－P，其培養(yǎng)后培養(yǎng)液有效磷含量達(dá)49.48mg／L（表4），而其培養(yǎng)后培養(yǎng)液pH 為7.29，與pH 7.0條件下的未接種處理TAl－P的pH（6.81）相差不大，若接種處理中僅存在酸（H＋）的溶磷作用，那么二者的有效磷含量應(yīng)差異不大，但實(shí)際上前者含量卻是后者的10倍以上。這說明根瘤菌培養(yǎng)中存在另外一些導(dǎo)致有效磷含量增加的機(jī)理，如這種機(jī)理可能是有機(jī)酸的分泌［4，8－9］，磷饑餓條件下與溶磷相關(guān)的酶分泌和相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)磷的溶解和吸收［13－14］，而中性和酸性條件培養(yǎng)時(shí)因根瘤菌的泌酸作用導(dǎo)致培養(yǎng)液pH下降過低（各處理最終pH皆＜4.0），由此導(dǎo)致溶磷相關(guān)基因的表達(dá)受阻，故接種根瘤菌后有效磷含量未見明顯上升，但這還需進(jìn)一步試驗(yàn)的驗(yàn)證。

3.3 有機(jī)質(zhì)與根瘤菌在土壤中的生存和生長(zhǎng)

有機(jī)磷（如YMA培養(yǎng)基中的酵母膏）是根瘤菌生長(zhǎng)的最有效的磷源之一，土壤中含量最多的有機(jī)磷是植酸鹽類。本研究發(fā)現(xiàn)雖然植酸鹽與磷酸鈣、磷酸鋁和磷酸鐵等無機(jī)磷一樣在水中的溶解度很低，但在中性條件下，它可以作為根瘤菌的有效磷源，其培養(yǎng)后的根瘤菌吸光度與正常培養(yǎng)基中基本一樣，其原因可能在于一方面根瘤菌生長(zhǎng)中泌酸降低了環(huán)境pH，增加了植酸鈣鎂的溶解度，另一方面，苜蓿根瘤菌可能與其他根瘤菌一樣在低磷條件下能分泌植酸酶［5，16］，將植酸鈣鎂分解以供自身生長(zhǎng)所需。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)初始pH 4.1的酸性條件下，植酸鈣鎂則因轉(zhuǎn)變?yōu)橹菜?，而植酸是防腐劑，能抑制多種細(xì)菌的生長(zhǎng)［17－20］，故雖然有效磷含量很高，根瘤菌生長(zhǎng)卻很差。不過，田間生產(chǎn)的條件不同于本試驗(yàn)的室內(nèi)培養(yǎng)條件，土壤中含有多種能分解植酸的微生物，植酸被這些微生物分解后抑菌作用消失，同時(shí)釋放出磷［21］，因此酸性條件下土壤中的植酸磷也應(yīng)該是根瘤菌生長(zhǎng)的良好磷源。

雖然在本研究中，堿性條件下含有機(jī)磷處理（酵母膏CKYE和植酸鈣鎂TPhy－P）的有效磷很低，根瘤菌生長(zhǎng)較差，但這是在單一接種根瘤菌條件下獲得的。實(shí)際生產(chǎn)中，若向鹽堿土壤中添加有機(jī)質(zhì)后，會(huì)促進(jìn)多種微生物，如纖維菌、放線菌、各種真菌和多種其他細(xì)菌的生長(zhǎng)，在它們的共同作用下，土壤會(huì)累積有機(jī)酸，pH降低，有效磷含量增加［22－24］，因此在富含有機(jī)質(zhì)的土壤中根瘤菌的存活和生長(zhǎng)所需磷源應(yīng)該是足夠的。

綜上所述，不管在哪種土壤中，要促進(jìn)低磷土壤中根瘤菌的生長(zhǎng)，提高存活率和結(jié)瘤，一個(gè)間接有效的方法是采取措施提高土壤的有機(jī)質(zhì)含量。

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