淺談體外受精—胚胎移植中的胚胎污染與預(yù)防措施

【摘 要】細(xì)菌對精子的結(jié)構(gòu)和功能都會造成不同程度的影響，由細(xì)菌釋放的內(nèi)毒素也對配子和胚胎有著明顯的毒性效應(yīng)，需要引起生殖醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)室人員的共同重視。嚴(yán)格的會陰部清洗后取精、單純的普通上游法處理精液和使用含有微量抗生素的培養(yǎng)液處理精子、卵子均可有效去除其中的絕大部分細(xì)菌。

【關(guān)鍵詞】體外受精；胚胎移植；污染

1 污染來源

IVF-ET中胚胎污染的來源主要可以分為3個方面：精液、卵泡液和 I V F 培養(yǎng)體系及環(huán)境。

1.1 精液

IVF-ET 中胚胎污染最可能的來源首推精液。很多學(xué)者在行IVF-ET的所有男性患者中， 選取那些沒有生殖系統(tǒng)感染臨床癥狀的男性， 進(jìn)行精液微生物培養(yǎng)， 陽性率可達(dá)13%-97% 因此在行IVF-ET男性患者中， 無癥狀菌精癥（asymptomaticbacteriospermia）是非常普遍的。精液的組成復(fù)雜，包括附睪的精子， 前列腺、精囊和尿道球腺等分泌的多種液體，這其中任何一個部位的感染都可能導(dǎo)致菌精癥的產(chǎn)生。但是在行 IVF-ET 的無感染癥狀男性患者（asymptomatic men）中，尿道菌叢和會陰皮膚共生菌的污染是其精液帶菌的最主要原因。Willen等觀察到在末段尿中能檢測出71%的冠狀溝菌株，提示尿道口、會陰部皮膚處的菌株可能污染到精液，形成菌精癥。對行 IVF-ET 的無感染癥狀男性患者進(jìn)行精液微生物培養(yǎng)，可得到多種微生物，以細(xì)菌為主，也有真菌和支原體。其中非致病性的主要有表皮葡萄球菌、非溶血性鏈球菌、類白喉菌、解脲脲原體和α-溶血性鏈球菌，潛在致病性的有β-溶血性鏈球菌、大腸埃希氏菌、變形桿菌、大腸菌類、混合菌和厭氧菌菌精癥者的精子活力等各項(xiàng)指標(biāo)是否會受到影響， 是生殖醫(yī)學(xué)工作者最關(guān)心的問題。

菌精癥是否會影響精液的質(zhì)量？也可能因精液中所含的細(xì)菌種類不同而有差異，草綠色鏈球菌和糞腸道菌常會導(dǎo)致精液質(zhì)量嚴(yán)重下降，需要進(jìn)行特殊的處理； 大腸埃希氏菌、解脲脲原體和金黃色葡萄球菌也會對精子的生育潛能造成顯著的負(fù)面影響[11]。行IVF的無感染癥狀男性患者單純菌精癥是否會對 IVF 產(chǎn)生不利影響，目前的研究仍然存在爭議。雖然有的研究提示菌精癥會導(dǎo)致妊娠率下降，但多數(shù)研究顯示， 菌精癥存在與否并不會影響受精率、卵裂率、胚胎發(fā)育速度、可移植胚胎數(shù)和臨床妊娠率[5，9，16]。

1.2 卵泡液

正常卵泡液是無菌的，但是卵泡液也是 IVF-ET中胚胎污染的一個不可忽視的來源。Cottell等在取卵前沖洗穿刺針并對沖洗液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，均未觀察到有細(xì)菌生長，但是取卵后穿刺針沖洗液細(xì)菌培養(yǎng)陽性率可達(dá) 27%，左、右側(cè)卵巢穿刺取得的卵泡液的培養(yǎng)陽性率分別為32% 和 40%另外1項(xiàng)研究也顯示取卵時將抽吸到的第1管卵泡液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，陽性率為9%。Stepanovic等的研究顯示，卵泡液本身存在不同程度的抗菌能力，有的表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗菌活性，而有的完全不能抑制細(xì)菌生長，卵泡液的抗菌活性與其中的 E2、孕酮、轉(zhuǎn)鐵蛋白、鐵離子、總蛋白和白蛋白等的水平都無關(guān)聯(lián)，卵泡液呈現(xiàn)抗菌能力的主要原因可能是卵泡液中所含的溶菌酶活性，有的卵泡液抗菌能力針對不同細(xì)菌呈現(xiàn)出選擇性，其中是否還有其他因子參與抗菌過程仍不明確。

1.3 IVF培養(yǎng)體系及環(huán)境

IVF培養(yǎng)體系及環(huán)境包括 IVF 培養(yǎng)室的內(nèi)部環(huán)境、層流系統(tǒng)和各種儀器設(shè)備、培養(yǎng)箱、培養(yǎng)液、培養(yǎng)皿、各種玻璃管和塑料管以及操作人員等等。所有的生殖醫(yī)學(xué)中心都意識到胚胎培養(yǎng)室環(huán)境的重要性，對其非常重視，所以由此導(dǎo)致的污染較為罕見。但是Cottell等分別對處理前后的精液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，在處理后的精液中檢測到很少量的表皮葡萄球菌和草綠色鏈球菌，而未經(jīng)處理的原始精液中沒有該菌，提示這2種細(xì)菌可能來源于實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)和操作過程[18]。因此，IVF培養(yǎng)體系及環(huán)境也是一個潛在的胚胎污染來源，仍需重視。

2 細(xì)菌對體外受精的影響機(jī)制

發(fā)生胚胎污染時，細(xì)菌是如何影響受精與胚胎發(fā)育的，其中的機(jī)制還不是十分清楚，不過很多研究提示細(xì)菌對精子的結(jié)構(gòu)和功能都會造成不同程度的影響。Mulla 等分別用 0.1% 的 DMSO 或 Ca2+載體A23187促使精子發(fā)生自發(fā)性頂體反應(yīng)和誘導(dǎo)的頂體反應(yīng)，觀察到大腸埃希氏菌顯著抑制誘導(dǎo)發(fā)生的精子頂體反應(yīng)，因此埃希氏菌可能損傷精子的受精能力。Moretti等采用透射電子顯微鏡和熒光原位雜交 （FISH） 技術(shù)對患泌尿生殖道感染的患者精子進(jìn)行檢測分析，結(jié)果顯示，幾乎全部精子均表現(xiàn)出減數(shù)分裂過程異常，主要表現(xiàn)為第二次減數(shù)分裂時姐妹染色單體不分離，導(dǎo)致精子染色體非整倍體發(fā)生率顯著增加，還有相當(dāng)大比例的壞死，少部分患者的精子呈現(xiàn)出凋亡反應(yīng)。此外，內(nèi)毒素（endotoxin）也對配子和胚胎有著明顯的毒性效應(yīng)。內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜表面的一種大分子物質(zhì)，通常在細(xì)菌死亡或分解時自由釋放到周圍介質(zhì)，也可從活細(xì)菌中被泄漏出來，對組織和細(xì)胞都具有很高毒性，很多研究顯示內(nèi)毒素對IVF-ET 中受精和胚胎發(fā)育過程都有很大影響。

綜上所述，我們只要針對體外受精中胚胎污染的三個可能發(fā)生來源采取相應(yīng)的預(yù)防和處理措施，就能夠有效地降低胚胎污染發(fā)生的可能性，從而避免胚胎污染導(dǎo)致的各種嚴(yán)重后果。希望胚胎污染的問題能夠引起生殖醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)室工作人員的足夠重視，控制好每一個環(huán)節(jié)，積極減少胚胎污染的發(fā)生，這需要我們共同的努力。

參考文獻(xiàn)：

[1]朱桂金，魏玉蘭，胡 娟， 等. 體外受精過程中胚胎污染及其來源的探討.中華婦產(chǎn)科雜志，2004，39（6）：382-4.

[2]Seidman DS， Madjar I， Levron J， et al. Testicular spermaspiration and intracytoplasmic sperm injection forpersistentinfectionoftheejaculate.FertilSteril，1999，71（3）：564-6.

[3]CottellE，McMorrowJ，LennonB，etal.Microbialcontami-nationinaninvitrofertilization-embryotransfersystem.FertilSteril，1996，66（5）：776-80.