慢性丙型肝炎、肝硬化、肝癌患者血清IL-17、IL-6 和維生素D 水平變化及其臨床意義

崔芳芳，龔作炯

武漢大學(xué)人民醫(yī)院感染科，湖北 武漢430060

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是慢性肝炎的主要致病因子，HCV 感染的顯著特點(diǎn)是約85%的急性患者發(fā)展為慢性持續(xù)性感染，20%左右發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞肝癌，嚴(yán)重威脅著人類健康。HCV 導(dǎo)致肝臟損害方式目前仍不清楚，有學(xué)者認(rèn)為可能與其直接損傷肝細(xì)胞和宿主免疫應(yīng)答引起的免疫損傷有關(guān)。HCV 直接損傷肝細(xì)胞是急性丙型肝炎的主要致病機(jī)制，而宿主免疫應(yīng)答引起的免疫損傷則是在HCV 感染的慢性化中的主要發(fā)病機(jī)制。目前細(xì)胞因子已經(jīng)成為病毒性肝炎發(fā)病機(jī)制研究熱點(diǎn)之一。在免疫應(yīng)答過程中，細(xì)胞因子對細(xì)胞的增殖和分化有重要調(diào)節(jié)作用，細(xì)胞因子在丙型肝炎發(fā)病機(jī)制中的作用正日益受到人們關(guān)注。本文通過對133 例慢性丙肝肝炎、丙肝肝硬化和丙肝相關(guān)肝癌患者血清IL-17、IL-6 水平的檢測，分析其與AFP、HCVRNA 滴度的相關(guān)性，探討這兩種細(xì)胞因子在慢性丙型肝炎患者損傷及病情發(fā)展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009 年5 月-2013 年5 月武漢大學(xué)人民醫(yī)院收治的肝病患者133 例，男69 例，女64例，年齡24 ～74 歲，平均年齡(49.7 ±12.3)歲，其中慢性丙型肝炎54 例(男24 例，女30 例)，丙肝肝硬化47 例(男26 例，女21 例)，丙肝相關(guān)肝癌32 例(男19例，女13 例)，慢性丙型肝炎和丙肝肝硬化診斷符合2006 年《病毒性肝炎防治方案》的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除重疊感染。另選取體檢中心檢測的健康人群50 名，男25 名，女25 名，年齡25 ～75 歲，平均年齡(51. 3 ±11.4)歲。

1.2 方法

1.2.1 血清標(biāo)本收集:清晨空腹從肘靜脈采血，采用血清分離膠硅化內(nèi)壁采血管收集靜脈血5 ml，室溫放置不超過1 h，3 000 r/min，離心10 min，吸取上層血清-80 ℃低溫保存。并收集醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測的各組AFP、HCV-RNA 滴度水平值。

1.2.2 血清IL-17、IL-6、25-OH-D 和1，25(OH)2D 測定:采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定各組血清中的IL-17、IL-6、25-OH-D 和1，25(OH)2D 含量，根據(jù)試劑盒說明書操作(所用的ELISA 試劑盒購自美國RD 公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以±s 表示，各組間比較采用單因素反差分析(One-Way ANOVA)，相關(guān)分析采用Pearson 相關(guān)分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化和丙肝相關(guān)肝癌患者HCV-RNA 滴度、AFP、IL-17、IL-6 及維生素D 水平比較 與對照組相比，慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化和丙肝相關(guān)肝癌患者IL-17、IL-6 水平逐漸升高，各組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);25-OH-D 和1，25(OH)2D 在慢性丙型肝炎及丙肝肝硬化、丙肝相關(guān)肝癌患者逐漸降低，與對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0. 05)，各組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);HCV-RNA 滴度和AFP 水平隨著病情的發(fā)展也逐步升高，與對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，見表1)。

表1 各組患者HCV-RNA 滴度、AFP、IL-17、IL-6 及維生素D 水平比較( ±s)Tab 1 Comparison of laboratory datas (HCV-RNA titer，AFP，IL-17，IL-6 and VitD)of patients among four groups (±s)

表1 各組患者HCV-RNA 滴度、AFP、IL-17、IL-6 及維生素D 水平比較( ±s)Tab 1 Comparison of laboratory datas (HCV-RNA titer，AFP，IL-17，IL-6 and VitD)of patients among four groups (±s)

注:與對照組比較，aP ＜0.05;與慢性丙型肝炎組比較，bP ＜0.05;與丙肝肝硬化比較，cP ＜0.05。

分組 HCV-RNA 滴度(IU/ml)AFP(ng/ml)IL-6(ng/ml)IL-17(ng/ml)25-OH-D(ng/ml)1，25(OH)2D(ng/ml)

2.2 IL-6、IL-17 與HCV-RNA 滴度、AFP、25-OH-D和1，25(OH)2D 之間相關(guān)性 IL-17 與HCV-RNA 滴度、AFP、IL-6 呈明顯正相關(guān)，而與維生素D 呈明顯負(fù)相關(guān)，IL-6 與HCV-RNA 滴度、AFP 呈明顯正相關(guān)，而與維生素D 呈明顯負(fù)相關(guān)(見表2)。

表2 IL-6、IL-17 與HCV-RNA 滴度、AFP、25-OH-D 和1，25(OH)2D 之間相關(guān)性Tab 2 Correlational analysis between IL-6，IL-17 levels and classic hepatocellular markers (HCV-RNA titer，AFP，25-OH-D and 1，25(OH)2D)

3 討論

HCV 感染后，多數(shù)患者發(fā)展為慢性丙型肝炎，而具體機(jī)制并不清楚，目前觀點(diǎn)普遍認(rèn)為，在HCV 慢性化過程中，HCV 并不直接損傷肝細(xì)胞，其引起肝組織損傷的主要病理生理機(jī)制是其引發(fā)的機(jī)體細(xì)胞免疫導(dǎo)致的免疫損傷。其中輔助T 細(xì)胞(helper T cell，Th)細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡對HCV 感染后多種疾病狀況的發(fā)生、發(fā)展起到重要作用。Th1/Th2 的平衡在HCV 感染過程中的研究較為集中。新發(fā)現(xiàn)的Th17 細(xì)胞亞群及其分泌的IL-17 通過調(diào)節(jié)固有免疫和細(xì)胞免疫參與多種肝臟疾病的發(fā)生［1-4］。IL-17 是Th17 細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子之一，可通過誘導(dǎo)NF-κB 的產(chǎn)生促進(jìn)炎性細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄，可誘導(dǎo)IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、基質(zhì)金屬蛋白酶等的表達(dá)，參與中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞的增殖、成熟和趨化，對T 細(xì)胞的活化亦起協(xié)同刺激作用，促進(jìn)炎癥的發(fā)生［5］。細(xì)胞和動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)［6-7］，IL-17 能刺激肝星狀細(xì)胞(HSC)增殖，并可間接通過激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥因子激活HSC，HSC是肝臟產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的主要細(xì)胞，其活化、增殖是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)，也可以直接激活HSC 產(chǎn)生ECM，在小鼠肝纖維化過程中起到了重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化和丙肝相關(guān)肝癌患者IL-17 水平逐漸升高，各組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且IL-17 水平與HCVRNA 滴度、AFP 水平呈明顯正相關(guān)，推測IL-17 與HCV 活動有關(guān)，也可能在HCV 感染后引起肝硬化、肝癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要作用。

研究證實(shí)，IL-6 是細(xì)胞因子的核心組成成員，主要由單核-巨噬細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞核纖維母細(xì)胞合成，與T 細(xì)胞的活化、增殖和分化密切相關(guān)，IL-6 水平與肝病的嚴(yán)重程度和病程緊密相關(guān)，Panasiuk 等［8］研究發(fā)現(xiàn)，IL-6 與肝臟炎癥及纖維化程度呈正相關(guān)。此外，研究證實(shí)IL-17 能通過NF-κB、AMPK 等通路促進(jìn)IL-6 生成。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化和丙肝相關(guān)肝癌患者IL-6 水平逐漸升高，各組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且IL-6 水平與HCV-RNA滴度、AFP 水平呈明顯正相關(guān)。表明IL-6、IL-17 可能與病毒復(fù)制及HCV 感染后慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化、肝癌病程、HCV 復(fù)制擴(kuò)增密切相關(guān)。由于慢性肝病患者AFP 也會升高，在診斷肝癌的靈敏性和特異性不足，假陽性和假陰性率較高［9］，本研究發(fā)現(xiàn)IL-6、IL-17 與AFP 水平呈明顯正相關(guān)，提示IL-6、IL-17 可能作為AFP 診斷肝癌的一個補(bǔ)充標(biāo)志物，聯(lián)合檢測可能會提高肝癌診斷準(zhǔn)確率。

本研究還發(fā)現(xiàn)，慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化和丙肝相關(guān)肝癌患者的血清維生素D 水平顯著下降，且隨著病程的發(fā)展，維生素D 水平越低，提示維生素D 水平的下降能反映肝臟損傷嚴(yán)重程度，并可能成為肝臟疾病發(fā)展的一個新的標(biāo)志物［10-11］。本研究與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相近，提示維生素D 不足在非膽汁淤積性肝病中普遍存在，并與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)［12］。研究發(fā)現(xiàn)，維生素D 缺乏狀態(tài)與嚴(yán)重纖維化和以IFN-γ 為基礎(chǔ)治療期間的持續(xù)病毒性應(yīng)答密切相關(guān)［13-14］。維生素D 是重要的免疫調(diào)節(jié)因素，在固有免疫和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中均有重要作用［15］。維生素D 能抑制Th1 細(xì)胞因子如IFN-γ、IL-2 的產(chǎn)生，從而促進(jìn)Th2 細(xì)胞因子如IL-4、IL-5 的產(chǎn)生促進(jìn)體液免疫，本研究發(fā)現(xiàn)，維生素D 水平與IL-17、IL-6 水平呈明顯負(fù)相關(guān)，可能與維生素D 作用于免疫調(diào)控淋巴細(xì)胞有關(guān)。維生素D 與幾種免疫性疾病相關(guān)，并可增加感染和腫瘤易感性［16］。新近研究發(fā)現(xiàn)，維生素D 缺乏被認(rèn)為可預(yù)測PEG-IFNα 和干擾素治療的失?。?3-14］。

綜上所述，隨著HCV 感染后病情的發(fā)展，IL-17、IL-6 水平逐漸升高，且與HCV-RNA 滴度、AFP 呈明顯正相關(guān)，而維生素D 水平逐漸降低，提示IL-17、IL-6 和維生素D 在HCV 感染后慢性丙型肝炎發(fā)展為肝硬化、肝癌的病程中可能起到重要作用，同時(shí)，IL-17、IL-6和維生素D 的檢測可能作為肝臟損傷程度新的標(biāo)志物及AFP 等經(jīng)典標(biāo)志物在肝癌診斷中的補(bǔ)充。

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